ALPCO小鼠C肽ELISA用于定量測(cè)定小鼠血清中的C肽。

作為ALPCO在中國(guó)的區(qū)域總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦ALPCO熱銷(xiāo)產(chǎn)品c肽(小鼠)ELISA試劑盒，96孔。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

c肽(小鼠)ELISA試劑盒，96孔檢測(cè)原理：

ALPCO小鼠C肽ELISA是一種夾心型免疫測(cè)定法。96孔微孔板涂有C肽特異性單克隆抗體。將標(biāo)準(zhǔn)品、對(duì)照品和樣品加入到帶有共軛物的微孔板孔中。然后將微孔板在室溫下在微孔板振蕩器上以700-900rpm的速度孵育。第一次孵育完成后，用洗滌緩沖液洗滌細(xì)胞并吸干。加入TMB底物，在室溫下在微孔板振蕩器上以700-900rpm第二次孵育微孔板。第二次孵育完成后，加入終止溶液，用分光光度計(jì)在450nm處測(cè)量光密度（OD）。產(chǎn)生的顏色強(qiáng)度與樣品中C肽的量成正比。

測(cè)定程序：

所有試劑和微孔板條在使用前應(yīng)平衡至室溫（18-25°C）。使用前輕輕混合所有試劑。每次測(cè)定運(yùn)行和每次使用多個(gè)微孔板時(shí)，都必須執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。所有標(biāo)準(zhǔn)品、對(duì)照品和樣本都應(yīng)雙重運(yùn)行。

1. 在打開(kāi)鋁箔袋前，應(yīng)先將微孔板平衡至室溫。為標(biāo)準(zhǔn)品、對(duì)照品和樣本的雙重測(cè)定分配足夠的微孔板條。其余的微孔板條應(yīng)存放在含干燥劑的密封鋁箔袋中，置于2-8°C。

2. 將每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品、對(duì)照品和樣本的10微升分別吸入相應(yīng)的孔中。見(jiàn)試劑準(zhǔn)備和分析證書(shū)上的對(duì)照品重組說(shuō)明。

3. 向每個(gè)孔中加入100微升的工作強(qiáng)度結(jié)合物（見(jiàn)試劑準(zhǔn)備）。

4. 用板封膜覆蓋微孔板，在室溫下孵育2小時(shí)，在微孔板振蕩器上以700-900轉(zhuǎn)每分鐘的速度搖動(dòng)。

5. 倒掉孔中的內(nèi)容物，使用微孔板洗滌器用每次350微升的工作強(qiáng)度洗滌緩沖液洗板3次（見(jiàn)試劑準(zhǔn)備）。或者，使用帶有洗滌噴嘴的洗滌瓶將工作強(qiáng)度洗滌緩沖液注入孔中。（不建議使用多通道移液管。洗滌緩沖液必須以足夠且均衡的力量分配，以便正確洗滌孔。）每次洗滌之間，將微孔板倒置以丟棄液體，并在吸水紙上用力拍打倒置的微孔板。在最后洗滌后（自動(dòng)或手動(dòng)），通過(guò)倒置并用力拍打微孔板在吸水紙上，去除孔中的任何殘留洗滌緩沖液和氣泡。

6. 向每個(gè)孔中加入100微升的TMB底物。

7. 用板封膜覆蓋微孔板，在室溫下孵育10分鐘，在微孔板振蕩器上以700-900轉(zhuǎn)每分鐘的速度搖動(dòng)。

8. 向每個(gè)孔中加入100微升的終止溶液，并輕輕搖動(dòng)微孔板以混合內(nèi)容物。在進(jìn)行下一步之前，去除任何氣泡。

9. 將微孔板放入能夠讀取450納米吸光度的微孔板閱讀器中。在加入終止溶液后應(yīng)立即分析微孔板，且不得超過(guò)30分鐘。

結(jié)果的計(jì)算：

構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)：

從標(biāo)準(zhǔn)品中構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。將零標(biāo)準(zhǔn)作為曲線(xiàn)的一部分。建議使用軟件程序來(lái)計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)并確定樣本的濃度。小鼠C肽ELISA是一種配體結(jié)合測(cè)定，其響應(yīng)與分析物濃度呈現(xiàn)S形關(guān)系。目前被普遍接受的此類(lèi)曲線(xiàn)的參考模型使用5參數(shù)邏輯（pl）擬合，因?yàn)檫@些模型可以在更大的范圍內(nèi)優(yōu)化準(zhǔn)確性和精確度。盡管三次樣條和其他模型是可以接受的方法，但它們通常在范圍的低端和高端顯示出較低的測(cè)定內(nèi)準(zhǔn)確性和精確度。在以下示例中，使用了5參數(shù)邏輯擬合來(lái)最大化低濃度樣本的準(zhǔn)確性和精確度。然而，由于個(gè)別實(shí)驗(yàn)室條件的影響，所有模型在可檢測(cè)范圍的最低端和最高端的準(zhǔn)確性和精確度都是有限的。因此，在解釋分析物響應(yīng)變得非線(xiàn)性時(shí)所得出的結(jié)果時(shí)，應(yīng)始終謹(jǐn)慎。

不建議將樣本濃度值外推至標(biāo)準(zhǔn)濃度值范圍之外。

典型標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)：

以下結(jié)果僅供演示目的，不能代替實(shí)際測(cè)定所得數(shù)據(jù)。每次測(cè)定運(yùn)行和板測(cè)試時(shí)都必須執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。將摩爾值轉(zhuǎn)換為納克/毫升：320.3皮摩爾 = 1納克/毫升。

短期測(cè)定方案：

ALPCO產(chǎn)品種類(lèi)多樣，可測(cè)樣品來(lái)源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、豬、羊、狗、猴等，涉及神經(jīng)生物學(xué)、骨代謝、心血管疾病和氧化應(yīng)激、細(xì)胞因子與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、糖尿病和肥胖癥、內(nèi)分泌學(xué)、甲狀腺功能、腸胃病學(xué)、免疫學(xué)、生殖激素、抗體和抗原、分子診斷等多個(gè)研究領(lǐng)域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領(lǐng)域見(jiàn)長(zhǎng)。

作為ALPCO在中國(guó)區(qū)域的代理，艾美捷科技有限公司將為中國(guó)客戶(hù)提供全面的ALPCO產(chǎn)品。