一．凋亡與壞死檢測

在生命科學(xué)的浩瀚海洋中，細(xì)胞凋亡與壞死的研究猶如一顆璀璨的明珠，吸引著無數(shù)科研工作者的目光。AAT Bioquest 作為一家專業(yè)的生物試劑供應(yīng)商，憑借其卓越的產(chǎn)品和服務(wù)，成為了這一領(lǐng)域不可或缺的重要伙伴。

細(xì)胞凋亡，也稱為程序性細(xì)胞死亡，是多細(xì)胞生物胚胎發(fā)育和組織穩(wěn)態(tài)維持的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。處于凋亡過程中的細(xì)胞具有一系列獨(dú)特的形態(tài)學(xué)變化和依賴能量的生化機(jī)制特征，如細(xì)胞膜起泡、細(xì)胞收縮、半胱天冬酶級聯(lián)反應(yīng)激活、染色質(zhì)凝聚以及 DNA 片段化，還會產(chǎn)生膜包裹的凋亡小體。由于沒有任何單一參數(shù)能夠完全定義凋亡，因此在細(xì)胞死亡的研究中，我們經(jīng)常采用了多種不同的方法。

AAT Bioquest 擁有豐富多樣的凋亡試劑和檢測方法，能夠測量多種凋亡標(biāo)志物，包括：

※Annexin V 檢測試劑盒

※半胱天冬酶活性檢測試劑盒

※TUNEL 檢測試劑盒

※線粒體膜電位（ΔΨm）指示劑

※谷胱甘肽監(jiān)測試劑盒

表 1：用于檢測凋亡和壞死的產(chǎn)品

二．細(xì)胞周期檢測

細(xì)胞周期是細(xì)胞生命活動的核心過程之一，其調(diào)控機(jī)制的研究對于理解細(xì)胞生長、分化、衰老以及疾病發(fā)生發(fā)展具有重要意義。AAT Bioquest 作為全球領(lǐng)先的生物試劑供應(yīng)商，憑借其卓越的產(chǎn)品和技術(shù)，為細(xì)胞周期檢測提供了全面而高效的解決方案。

流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期：精準(zhǔn)洞察細(xì)胞生命進(jìn)程

流式細(xì)胞術(shù)通過測量細(xì)胞內(nèi)DNA含量來評估DNA倍體水平，并確定細(xì)胞群體處于細(xì)胞周期不同階段的百分比。在細(xì)胞群體中，細(xì)胞在細(xì)胞周期的主要階段（G0/G1、S 和 G2/M）的分布是基于它們的DNA含量差異。通過使用與DNA結(jié)合的熒光染料，這些染料的發(fā)射信號與每個細(xì)胞中的DNA含量成正比，流式細(xì)胞術(shù)分析可以生成頻率直方圖，從而估算每個細(xì)胞周期階段的細(xì)胞百分比。細(xì)胞周期分析可用于研究腫瘤行為，檢測生長模式的變化，監(jiān)測凋亡，并評估各種藥物對細(xì)胞周期進(jìn)程的影響。

活細(xì)胞周期檢測：實(shí)時追蹤細(xì)胞動態(tài)

AAT Bioquest 的 Cell Meter 熒光活細(xì)胞周期檢測試劑盒為監(jiān)測活細(xì)胞、透化細(xì)胞和固定細(xì)胞的細(xì)胞周期進(jìn)程提供了一種簡單而靈敏的方法。每種試劑盒均含有專利的膜滲透性、非熒光、DNA 選擇性染料。這些染料與 DNA 結(jié)合后，會發(fā)出與每個細(xì)胞中 DNA 含量成正比的熒光信號。通過流式細(xì)胞術(shù)分析染色細(xì)胞群體，可以生成頻率直方圖，提供有關(guān)細(xì)胞周期主要階段相對百分比的信息。

Cell Meter 熒光法活細(xì)胞周期檢測試劑盒選擇指南：

這些試劑盒中的 DNA 染料設(shè)計用于匹配標(biāo)準(zhǔn)激光線的主要波長。Nuclear Violet（試劑盒 22845 的 DNA 染料成分）非常適合 405 nm（紫色）激光線，但也可以被 355 nm（紫外）激光激發(fā)。Nuclear Green LCS1（試劑盒 22841 的 DNA 染料成分）和 Nuclear Red CCS2（試劑盒 22860 的 DNA 染料成分）非常適合 488 nm（藍(lán)色）激光線。Nuclear Red CCS2 還可以使用 532 nm（綠色）激光線激發(fā)。除了方便使用外，這些非細(xì)胞毒性的核 DNA 染料還可以與額外的活細(xì)胞應(yīng)用進(jìn)行多重檢測，包括免疫表型分析、GFP 細(xì)胞分析、流式細(xì)胞術(shù)分選、CFSE 細(xì)胞追蹤和凋亡亞 G1 期群體分析。這些核 DNA 染料還以 0.5 mL 單獨(dú)試劑的形式提供，并有多種其他熒光發(fā)射形式，包括 Nuclear Yellow（Ex/Em = 368/501 nm，17539）、Nuclear Orange LCS1（Ex/Em = 512/554 nm，17541）、Nuclear Red LCS1（Ex/Em = 622/645 nm，17542）和 Nuclear Red LCS2（Ex/Em = 651/681 nm，17545）。

固定細(xì)胞周期檢測：經(jīng)典方法與創(chuàng)新結(jié)合

對于固定細(xì)胞周期分析，AAT Bioquest 提供了適用于流式細(xì)胞術(shù)的 Cell Meter 熒光固定細(xì)胞周期檢測試劑盒（22842），以及經(jīng)典的細(xì)胞周期染料，如 DAPI（17511）、碘化丙啶（17515）和 7-AAD（17501）。試劑盒 22842 中的染料成分 Nuclear Red CCS1 是一種膜不滲透性、藍(lán)色激光激發(fā)的 DNA 染料。在固定細(xì)胞中與 DNA 結(jié)合時，Nuclear Red CCS1 會顯著增強(qiáng)熒光，其信號強(qiáng)度與每個細(xì)胞中的 DNA 含量成正比。由于 Nuclear Red CCS1 還會與 RNA 結(jié)合，因此需要使用 RNase A 處理（試劑盒成分 B）進(jìn)行 DNA 含量分析。Nuclear Red CCS1 的峰值發(fā)射約為 618 nm，可以使用 PE-Texas Red 的相同濾光片進(jìn)行檢測，例如 610/20 帶通濾光片。

Cell Meter 熒光法固定細(xì)胞周期檢測試劑盒：

經(jīng)典細(xì)胞周期染料：可靠的選擇 

用于細(xì)胞周期分析的常見核酸染料包括 Hoechst 33258（17520、17523、17525）、Hoechst 33342（17530、17533、17535）、DAPI（17507、17510、17511、17513）、PI（17515、17516、17517）和 7-AAD（17501）。Hoechst 染料和 DAPI 是 UV 激光激發(fā)染料，發(fā)射波長約為 460 nm，而 PI 和 7-AAD 則利用常見的 488 nm 激發(fā)源，發(fā)射波長分別為 618 nm 和 648 nm。在這些經(jīng)典染料中，Hoechst 33342 和 Hoechst 33258 適用于活細(xì)胞周期分析，盡管據(jù)報道 Hoechst 33258 的細(xì)胞滲透性較低。然而，使用 DAPI、PI 或 7-AAD 進(jìn)行細(xì)胞周期分析時，需要對細(xì)胞進(jìn)行固定和透化處理。對于像 PI 這樣非 DNA 特異性的染料，它還會染色其他雙鏈核酸，如 RNA，因此在進(jìn)行 DNA 含量分析時需要使用 RNase A 處理。

經(jīng)典的細(xì)胞周期染料選擇指南：