文獻標題：The S100A8/A9 heterodimer amplifies proinflammatory cytokine production by macrophages via activation of nuclear factor kappa B and p38 mitogen-activated protein kinase in rheumatoid arthritis

DOI：10.1186/ar1939

研究背景

S100A8和S100A9是S100蛋白家族的兩個成員，它們在中性粒細胞和單核細胞/巨噬細胞中以異二聚體復合物(S100A8/A9)的形式分泌。在類風濕性關節(jié)炎(RA)患者中，血清和滑液中的S100A8、S100A9和S100A8/A9水平較骨關節(jié)炎(OA)患者顯著升高，其中S100A8/A9異二聚體更為常見。S100A8/A9在RA的滑膜組織(ST)中主要由浸潤的CD68+巨噬細胞表達，并且與RA的炎癥活動和關節(jié)炎癥有關。

S100A8/A9異二聚體最初被鑒定為抗菌蛋白，在局部環(huán)境中表現(xiàn)出類似細胞因子的功能，特別是增強白細胞遷移到炎癥部位和促進花生四烯酸(AA)向目標細胞的運輸。然而，S100A8/A9的表面受體及其信號傳導途徑尚未完全闡明。S100A8/A9可能通過與肝素硫酸蛋白多糖和新型羧基化糖鏈等特定結合位點的相互作用，與內皮細胞表面結合。此外，CD36和晚期糖基化終產品受體(RAGE)是該復合物的兩個可能的受體。

在RA患者中，炎癥滑膜的特征是炎癥細胞（主要是淋巴細胞和巨噬細胞）的浸潤，滑膜成纖維細胞的增殖，以及血管增多。巨噬細胞在滑膜炎癥和關節(jié)破壞的持續(xù)中起著關鍵作用，主要通過分泌如腫瘤壞死因子α(TNF-α)和白介素1(IL-1)等促炎細胞因子。這些細胞因子通過激活轉錄因子NF-κB和絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)級聯(lián)反應，誘導多種炎癥介質和基質降解酶的合成。

研究方法

1.滑膜組織細胞的分離和培養(yǎng)：新鮮ST樣本在RPMI 1640培養(yǎng)基中用膠原酶和DNase處理后，得到單細胞懸液，并在含有10%熱滅活胎牛血清(FCS)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。培養(yǎng)72小時后收集培養(yǎng)上清液，并在-30°C下保存，直到進行S100A8/A9檢測。

2.S100蛋白和細胞因子的免疫測定：使用商業(yè)ELISA試劑盒測定S100A8、S100A9和S100A8/A9的濃度。使用細胞計量珠陣列(CBA)和流式細胞儀分析測定單核細胞培養(yǎng)上清液中的TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10和IL-12 p70濃度。

3.雙色免疫熒光標記：使用抗S100A8/A9抗體和抗CD68抗體對RA ST樣本進行雙色免疫熒光標記，以確定S100A8/A9在RA ST中的表達。

4.單核細胞和體外分化巨噬細胞的刺激：從健康個體的肝素化PB樣本中通過Ficoll-Hypaque密度梯度離心分離單個核細胞(PBMCs)，然后使用單核細胞分離試劑盒II從PBMCs中純化單核細胞。將單核細胞懸液在含有10% FCS的培養(yǎng)基中與或不與S100A8、S100A9和S100A8/A9共同孵育，并測定培養(yǎng)上清液中的細胞因子濃度。

5.RAGE和CD36阻斷對S100A8/A9刺激的影響：在含有多粘菌素B的條件下，單核細胞懸液與或不與抗RAGE抗體、esRAGE、抗CD36抗體共同孵育，以評估這些受體在S100A8/A9刺激中的作用。

6.MAPK抑制劑和NF-κB抑制劑對S100A8/A9刺激的影響：單核細胞在含有MAPK抑制劑或NF-κB激活抑制劑的條件下與S100A8/A9共同孵育，以評估這些信號通路在S100A8/A9誘導的細胞因子產生中的作用。

7.p38 MAPK激活的檢測：通過ELISA試劑盒測定單核細胞中p38 MAPK蛋白及其磷酸化形式的含量，以評估S100A8/A9對p38 MAPK激活的影響。

8.NF-κB激活的檢測：通過電泳遷移率變化分析(EMSA)測定單核細胞中NF-κB的DNA結合活性，以評估S100A8/A9對NF-κB激活的影響。

研究內容

研究者發(fā)現(xiàn)在RA患者的血清和滑液中，S100A8、S100A9和S100A8/A9的水平較骨關節(jié)炎（OA）患者顯著升高，尤其是S100A8/A9異二聚體形式。通過免疫熒光技術，研究者觀察到S100A8/A9主要在RA患者的滑膜組織中的CD68+巨噬細胞中表達。研究發(fā)現(xiàn)S100A8/A9異二聚體和S100A9同源二聚體能夠刺激純化的單核細胞和體外分化的巨噬細胞產生如腫瘤壞死因子α（TNF-α）等促炎細胞因子。S100A8/A9介導的細胞因子產生被p38絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）抑制劑顯著抑制，且?guī)缀跬耆缓艘蜃应蔅（NF-κB）抑制劑抑制。這表明S100A8/A9通過激活NF-κB和p38 MAPK途徑在RA中放大促炎細胞因子反應。來自RA患者的滑膜組織細胞在體外培養(yǎng)時自發(fā)分泌更多的S100A8/A9蛋白，這可能與RA患者關節(jié)內巨噬細胞的激活狀態(tài)有關。探討了S100A8/A9在RA病理生理過程中的作用，包括其在炎癥細胞募集、花生四烯酸（AA）代謝以及與RA相關的信號通路激活中的角色。研究結果表明，S100A8/A9異二聚體可能是RA治療的一個潛在靶點，通過抑制其活性或阻斷其信號通路可能有助于減輕RA患者的炎癥反應。這項研究為理解RA中的炎癥反應提供了新的分子機制，并為開發(fā)新的治療策略提供了可能的方向

Calprotectin, Polyclonal, primary antibody 貨號：BMA-T-1526

抗體Calprotectin, Polyclonal, primary antibody在文獻中主要被用于兩個方面：

檢測S100A8/A9蛋白：Calprotectin是S100A8和S100A9形成的異二聚體的另一個名稱。在本文中，通過使用針對S100A8/A9復合物的多克隆抗體（例如，文中提到的27E10抗體），研究人員能夠通過酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）和免疫熒光技術檢測RA患者血清和滑液中S100A8/A9的濃度。這些檢測有助于評估RA患者的疾病活動性和炎癥程度。

免疫熒光雙標實驗：研究人員使用S100A8/A9的多克隆抗體和CD68的抗體進行雙色免疫熒光標記，以確定RA滑膜組織中S100A8/A9的表達位置和與CD68陽性巨噬細胞的共定位。這有助于揭示S100A8/A9在RA滑膜炎癥中的作用及其在滑膜組織中的細胞來源。

綜上所述，這些抗體在研究中扮演了關鍵角色，使研究人員能夠檢測和定位S100A8/A9蛋白，進而分析其在RA中的潛在作用和作為生物標志物的潛力。

抗體Calprotectin, Polyclonal, primary antibody，主要指的是針對Calprotectin（S100A8/A9異二聚體）的多克隆一抗，它們在多種研究和臨床應用中具有重要作用。以下是這些抗體的一些主要應用：

1.基礎研究：用于研究Calprotectin在細胞生物學、免疫學和病理學中的作用，特別是在炎癥和免疫反應中的作用。

2.炎癥性疾病的診斷：檢測血清或組織樣本中的Calprotectin水平，以輔助診斷如類風濕性關節(jié)炎（RA）、炎癥性腸病、感染性疾病等。

3.疾病監(jiān)測和治療反應評估：監(jiān)測Calprotectin水平的變化，以評估疾病活動度和治療效果。

4.免疫組織化學：在組織切片上使用這些抗體來檢測Calprotectin的表達和定位，有助于理解其在病理過程中的作用。

5.流式細胞術：用于分析Calprotectin在不同細胞群中的表達，有助于研究其在免疫細胞功能中的角色。

6.ELISA檢測：用于定量測定生物樣本中的Calprotectin水平，常用于研究和臨床檢測。

7.免疫沉淀和Western blot：用于研究Calprotectin與其他蛋白質的相互作用和信號傳導途徑。

8.藥物開發(fā)：在藥物篩選和開發(fā)過程中，用于驗證Calprotectin作為藥物靶點的潛力。

9.生物標志物研究：評估Calprotectin作為疾病標志物的潛力，以預測疾病風險、預后和治療反應。

10.研究Calprotectin的生理功能：例如，其在細胞遷移、細胞分化和細胞死亡中的作用。

這些應用體現(xiàn)了Calprotectin抗體在生物醫(yī)學研究和臨床實踐中的應用廣泛性。