解析文章：《The Potential of Bone Marrow-Derived Cells to Differentiate to Glomerular Mesangial Cells》

鏈接： https://journals.lww.com/jasn/fulltext/2001/07000/the_potential_of_bone_marrow_derived_cells_to.9.aspx

一、背景

骨髓干細(xì)胞（BMC）的分化潛力：

骨髓干細(xì)胞傳統(tǒng)上被認(rèn)為主要能分化為造血系和血管間充質(zhì)細(xì)胞系，但關(guān)于其是否能分化為腎小球細(xì)胞的研究較少。一些腎小球疾病的根本發(fā)病機(jī)制可能與骨髓干細(xì)胞的異常有關(guān)，這一發(fā)現(xiàn)為通過骨髓移植（BMT）治療相關(guān)疾病提供了理論基礎(chǔ)。

研究目的：

探討骨髓干細(xì)胞是否有可能分化為腎小球系膜細(xì)胞，進(jìn)而為腎小球疾病的治療提供新的思路和方法。

二、 方法

實(shí)驗(yàn)動物與分組：

使用同基因C57BL/6j（B6）小鼠作為受體，轉(zhuǎn)基因表達(dá)綠色熒光蛋白（GFP）的B6小鼠作為供體。受體小鼠經(jīng)過致死劑量的全身照射后，移植來自供體小鼠的骨髓干細(xì)胞。

骨髓移植與細(xì)胞處理：

供體小鼠的骨髓干細(xì)胞在移植前進(jìn)行T細(xì)胞清除處理，并通過尾靜脈注射到受體小鼠體內(nèi)。受體小鼠在移植后不同時間點(diǎn)（2周、4周、8周、24周）進(jìn)行腎臟組織學(xué)分析和流式細(xì)胞術(shù)檢測。

組織學(xué)與免疫組化分析：

腎臟組織經(jīng)過固定、包埋、切片后，進(jìn)行PAS染色和免疫組化染色，檢測GFP陽性細(xì)胞在腎小球內(nèi)的分布和類型。

使用特異性抗體（如抗desmin抗體）標(biāo)記系膜細(xì)胞，同時用F4/80抗體標(biāo)記巨噬細(xì)胞，用Thy-1抗體標(biāo)記T細(xì)胞，以區(qū)分GFP陽性細(xì)胞的類型。

MHC Class II 抗體的應(yīng)用：

在本研究中，使用了BMA Biomedicals品牌的MHC Class II 抗體（貨號：T-2106，Clone ER-TR3）來檢測腎小球內(nèi)浸潤的免疫細(xì)胞是否表達(dá)MHC Class II分子。這一抗體對于識別抗原呈遞細(xì)胞（如樹突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和活化的T細(xì)胞）具有重要意義。

通過與GFP陽性細(xì)胞的共定位分析，進(jìn)一步確認(rèn)了GFP陽性細(xì)胞并非活化的免疫細(xì)胞，而是可能來源于供體骨髓干細(xì)胞的系膜細(xì)胞。

三、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

骨髓干細(xì)胞的植入與分化：

流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示，受體小鼠的脾臟淋巴細(xì)胞和骨髓細(xì)胞在移植后逐漸被供體來源的GFP陽性細(xì)胞替代。

組織學(xué)分析表明，從移植后4周開始，GFP陽性細(xì)胞在腎小球內(nèi)逐漸增多，且主要位于系膜區(qū)。

免疫組化染色顯示，部分desmin陽性的系膜細(xì)胞同時表達(dá)GFP，證實(shí)了骨髓干細(xì)胞可以分化為系膜細(xì)胞。

GFP陽性細(xì)胞的性質(zhì)：

GFP陽性細(xì)胞在腎小球內(nèi)并非巨噬細(xì)胞或T細(xì)胞，因?yàn)樗鼈儾槐磉_(dá)F4/80或Thy-1抗原，且僅少數(shù)GFP陽性細(xì)胞表達(dá)巨噬細(xì)胞清道夫受體或MHC Class II分子。

體外培養(yǎng)的腎小球細(xì)胞實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)了GFP陽性細(xì)胞具有系膜細(xì)胞的特征，如表達(dá)desmin和對血管緊張素II（AngII）刺激的收縮反應(yīng)。

四、結(jié)論與討論

骨髓干細(xì)胞分化為系膜細(xì)胞的潛力：

本研究首次證明了骨髓干細(xì)胞具有分化為腎小球系膜細(xì)胞的潛力，這一發(fā)現(xiàn)為腎小球疾病的發(fā)病機(jī)制提供了新的視角。

骨髓干細(xì)胞可能通過替代受損的系膜細(xì)胞或促進(jìn)系膜細(xì)胞的再生來減輕腎小球損傷，為骨髓移植治療腎小球疾病提供了理論依據(jù)。

MHC Class II 抗體的應(yīng)用前景：

MHC Class II 抗體的使用不僅有助于區(qū)分GFP陽性細(xì)胞是否為活化的免疫細(xì)胞，還為進(jìn)一步研究腎小球內(nèi)免疫細(xì)胞亞群及其功能提供了有力工具。

在未來的研究中，該抗體可用于監(jiān)測腎小球疾病中免疫細(xì)胞的浸潤情況，評估疾病活動度和治療效果。

臨床與科研意義：

骨髓干細(xì)胞在腎小球疾病治療中的應(yīng)用前景廣闊，未來的研究應(yīng)聚焦于優(yōu)化骨髓移植方案、探索骨髓干細(xì)胞分化的具體機(jī)制以及評估其在不同腎小球疾病模型中的療效。同時，MHC Class II 抗體的廣泛應(yīng)用將為腎小球疾病的免疫病理學(xué)研究提供新的思路和方法。

五、 未來研究方向

進(jìn)一步研究骨髓干細(xì)胞分化為系膜細(xì)胞的具體分子機(jī)制和調(diào)控因素。探索不同疾病模型下骨髓移植的治療效果及安全性。評估骨髓干細(xì)胞移植與其他治療方法的聯(lián)合應(yīng)用效果。深入研究MHC Class II 抗體在腎小球疾病中的免疫監(jiān)測和療效評估中的作用。

BMA Biomedicals品牌Monoclonal Antibody To Mouse MHC Class II

小鼠MHC II類單克隆抗體（貨號：T-2106）

單克隆抗體ER-TR3：研究T輔助細(xì)胞的重要工具

單克隆抗體ER-TR3是ER-TR系列單克隆抗體（包括ER-TR3、ER-TR2、ER-TR1）中的一員，它們能夠識別由小鼠H-2復(fù)合體中的Ia區(qū)域編碼的MHC II類抗原，該區(qū)域在人類中對應(yīng)于HLA-DR區(qū)域。這些抗體是研究T輔助細(xì)胞與II類抗原呈遞細(xì)胞（包括樹突狀細(xì)胞、B細(xì)胞和巨噬細(xì)胞）相互作用的重要工具。通過這些抗體，研究人員能夠更深入地了解這些細(xì)胞間復(fù)雜的相互作用機(jī)制。

此外，由于ER-TR3等抗體還能夠標(biāo)記胸腺中的基質(zhì)細(xì)胞，因此它們也為研究T輔助細(xì)胞的發(fā)育提供了新的可能性。胸腺是T細(xì)胞發(fā)育的主要場所，基質(zhì)細(xì)胞在其中扮演著關(guān)鍵角色，通過分泌細(xì)胞因子和提供適當(dāng)?shù)奈h(huán)境來支持T細(xì)胞的發(fā)育和分化。因此，ER-TR3等抗體不僅有助于揭示T輔助細(xì)胞與抗原呈遞細(xì)胞間的相互作用，還能夠探索T輔助細(xì)胞在胸腺中的發(fā)育過程。

綜上所述，單克隆抗體ER-TR3是研究T輔助細(xì)胞功能及其發(fā)育過程的重要工具，為免疫學(xué)領(lǐng)域的研究提供了有力的支持。

Product number: T-2106

Host species: Rat IgG2b

Clone: ER-TR3

Quantity: 150 ug

Format: Affinity purified, lyophilized

Reconstitute by adding 0.5ml distilled water. This stock solution contains 0.3mg/ml IgG, phosphate buffered saline pH 7.2 (PBS), 5mg/ml bovine serum albumin (BSA) as a stabilizer and 0.09% sodium azide as a preservative.

Shelf-life: Original vial: 1 year at 4° - 8°C

Stock solution: 1 year at -20°C. Avoid repeated thawing and freezing.

Applications:Tested for immunohistochemistry (IHC); has been described to work in FACS.

Approximate working dilution for IHC:

Frozen sections: 1.5g/ml (1:200)

Paraffin sections: does not react on routinely processed paraffin sections.

Optimal dilutions should be determined by the end user.

Suggested positive control: Mouse spleen.

Immunogen: Murine thymic reticulum.

Antigen, epitope: MHC Class II antigens are heterodimers consisting of one-chain (31-34kDa) and one-chain (26-29kDa). The epitope has not been further characterized.

Antigen distribution

Isolated cells: The antigen is found on dendritic cells, B-cells and macrophages. The level of antigen detected by ER-TR1,ER-TR2 and ER-TR3 differs from strain to strain (see table below).

Tissue Sections: The antigen is found on B-cells, interdigitating cells and macrophages in peripheral lymphoid organs but is absent from T-cells. It is also expressed as a fine reticular pattern on stromal thymic cells of the cortex and as a

confluent pattern on stromal thymic cells of the medulla.

Specificity:

Mouse: cells expressing MHC class II antigens

Other species: negative on human, other unknown

Selected references：

Van Vliet, E., et al.: Monoclonal Antibodies to Stromal Cell Types of the Mouse Thymus. Eur. J. Immunol. 14, 524-529 (1984)

Van Vliet, E., et al.: Stromal Cell Types in the Developing Thymus of the Normal and Nude Mouse Embryo. Eur. J. Immunol. 15, 675-681 (1985)