關(guān)于泛素蛋白修飾

靶蛋白的多聚泛素化是調(diào)節(jié)蛋白酶體介導(dǎo)降解的成熟機(jī)制，這種重要的翻譯后修飾(PTM)的失調(diào)已被證明可以促進(jìn)疾病進(jìn)展。現(xiàn)在人們認(rèn)識(shí)到，多聚和單聚泛素化可以控制關(guān)鍵蛋白質(zhì)功能，如蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用、空間調(diào)節(jié)和與其他PTMs的串?dāng)_。蛋白質(zhì)組學(xué)研究表明，數(shù)千種蛋白質(zhì)受泛素化調(diào)節(jié)；然而，研究靶蛋白內(nèi)源性泛素化的工具并不容易獲得。許多研究目標(biāo)蛋白泛素化是使用Ub和蛋白過表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行的。雖然這些數(shù)據(jù)顯然很重要，并且可以提供關(guān)鍵信息，如位點(diǎn)特異性，但Ub過表達(dá)也可以掩蓋生理變化。Biogradetech 開發(fā)了一系列的產(chǎn)品，用于泛素化的相關(guān)研究。

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一、泛素化蛋白快速富集純化磁珠

基于已知具有泛素親和力的蛋白結(jié)構(gòu)域，串聯(lián)泛素已被開發(fā)用于分離和鑒定泛素化蛋白。在單個(gè)泛素結(jié)合相關(guān)結(jié)構(gòu)域(UBA)上，泛素蛋白親和磁珠對(duì)多泛素基團(tuán)的親和力增加了1000倍。此外，泛素蛋白親和磁珠對(duì)多泛素化蛋白具有保護(hù)作用，允許在相對(duì)較低的豐度下檢測(cè)。這些特性有效地“捕獲”了處于多泛素化狀態(tài)的蛋白質(zhì)。泛素蛋白親和磁珠可用于從細(xì)胞和組織提取物中分離、富集和鑒定泛素化蛋白。

常見用途：

1.從細(xì)胞系，組織，器官中Pull down多聚泛素化蛋白

2.多聚泛素化蛋白深度富集純化與分離（蛋白質(zhì)組研究）

3.保護(hù)多聚泛素化蛋白，免于被去泛素化（DUB，去泛素化酶）

二、泛素化蛋白檢測(cè)——WB檢測(cè)

從任何給定的細(xì)胞或組織裂解液中分離和富集修飾蛋白。然后使用針對(duì)目標(biāo)蛋白的一抗，通過標(biāo)準(zhǔn)的western blot程序分析富集蛋白群。

a. 研究瞬時(shí)調(diào)節(jié)機(jī)制；

b. 測(cè)量多個(gè)通路成員蛋白的信號(hào)通路；

c. 探索一種可能的蛋白修飾；

三、總泛素化蛋白/泛素化靶蛋白的定量方法—ELISA檢測(cè)

Ubiquitin protein/Ubiquitin target protein ELISA quantitative Assay是一種夾心測(cè)定法，可用于細(xì)胞裂解液中泛素/泛素靶蛋白的絕對(duì)測(cè)量。這種基于平板的測(cè)定依賴于使用專有的泛素結(jié)合試劑捕獲總泛素/泛素靶蛋白。

1.使用抗泛素抗體準(zhǔn)確定量總泛素(單泛素和多泛素)。

2.濃度結(jié)果以?g/mL為單位，而不是任意單位。

四、泛素抗體

五、泛素酶