基于細胞的ELISA（cell-based ELISA）是一種新的定性蛋白檢測技術(shù)，細胞直接在微孔板里培養(yǎng)，待檢測時，不需裂解細胞便可直接測量微孔板里的蛋白變化，有利于檢測目標細胞蛋白經(jīng)刺激或抑制作用后的表現(xiàn)。由于省去抽提蛋白和裂解細胞的步驟，樣本的損失也能降到最低，比起其他普通的ELISA測定方法，Cell-Based ELISA檢測技術(shù)能更快速、更方便地一次檢測大量的細胞內(nèi)蛋白。

Cell-Based ELISA優(yōu)勢：

①無需裂解細胞，只需將細胞及蛋白質(zhì)原位固定

②降低蛋白質(zhì)發(fā)生降解的可能性，目標蛋白損失最少；

③可測定粘附細胞還有非粘附細胞；

④整個操作在96孔板中進行，容易實現(xiàn)高通量樣本的檢測；

⑥對于磷酸化蛋白研究，可同時檢測磷酸化蛋白與非磷酸化蛋白水平，實現(xiàn)磷酸化蛋白水平的準確評估，結(jié)果比WB更可靠

Cell-Based ELISA檢測原理（如下圖）：將細胞種到96孔板上，經(jīng)刺激或者抑制處理后，對細胞進行固定透化（方便抗體進入細胞內(nèi)）， 接著分別加入一抗和二抗孵育、顯色，最后測量信號。

Biomatik可提供用于檢測磷酸化以及非磷酸化靶標的基于細胞ELISA（Cell-Based ELISA）的檢測試劑盒。

基于非磷酸化靶標細胞的ELISA試劑盒方案

1) 細胞單層在96孔微量滴定板中培養(yǎng)。然后可以用興奮劑、抑制劑等處理每個孔。然后固定和封閉細胞。

2) 加入抗原特異性一抗，與細胞表面的靶抗原結(jié)合。

3) 洗滌孔并加入與一抗結(jié)合的HRP標記的二抗。

4) 洗滌孔并加入含有TMB的溶液。TMB與HRP 發(fā)生反應(yīng)，從無色變?yōu)樗{色。然后加入酸終止溶液，反應(yīng)停止，藍色變?yōu)辄S色。

基于磷酸化特異性細胞的 ELISA 試劑盒方案

1) 細胞單層在96孔微量滴定板中培養(yǎng)。然后可以用興奮劑、抑制劑等處理每個孔以誘導(dǎo)磷酸化靶標的表達，然后將細胞固定并封閉。

2) 加入磷酸化特異性或泛特異性一抗，與細胞表面的靶抗原結(jié)合。

3) 洗滌孔并加入與一抗結(jié)合的HRP標記的二抗。

4) 洗滌孔并加入含有TMB的溶液。TMB與HRP發(fā)生反應(yīng)，從無色變?yōu)樗{色。然后加入酸終止溶液，反應(yīng)停止，藍色變?yōu)辄S色。

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