一、膠體金標(biāo)記：

膠體金（colloidal gold），又稱金溶膠（gold solution），是指分散相粒子直徑在1—150nm之間的金溶膠，屬于多相不均勻體系，顏色呈桔紅色到紫紅色。膠體金可以作為標(biāo)記物用于免疫組織化學(xué)，近10多年來膠體金標(biāo)記已經(jīng)發(fā)展為一項重要的免疫標(biāo)記技術(shù)。膠體金免疫分析在藥物檢測、生物醫(yī)學(xué)等許多領(lǐng)域的研究已經(jīng)得到發(fā)展，并越來越受到相關(guān)研究領(lǐng)域的重視。

常規(guī)膠體金尺寸的選擇取決于還原劑：

• ①硫氰酸鹽：6nm

• ②乙醇：10nm

• ③白磷：3nm

• ④檸檬酸鈉：12-64nm

• ⑤檸檬酸+單寧酸：3-17nm

膠體金結(jié)合方式：

• ①通過電荷結(jié)合：當(dāng)帶正電荷的基團(tuán)附著在帶負(fù)電荷的[AuCl₂]-金表面時，蛋白質(zhì)與膠體金結(jié)合。

• ②通過疏水相互作用結(jié)合：膠體金具有疏水性質(zhì)，可以結(jié)合疏水域，例如抗體Fc區(qū)域的疏水域。

• ③通過巰基配位結(jié)合：巰基（-SH）對金有很強(qiáng)的親和力。蛋白質(zhì)可以通過半胱氨酸殘基結(jié)合，核酸可以通過合成巰基修飾結(jié)合。

膠體金標(biāo)記的局限性：

• ①標(biāo)記物的種類有限：能帶上膠體金標(biāo)記的物質(zhì)僅限于抗體、蛋白質(zhì)（鏈霉親和素、Protein A、Protein G）、部分肽以及巰基修飾的寡核苷酸結(jié)合物。

• ②容易跟共軛物解離：結(jié)合蛋白可以解離并與標(biāo)記蛋白競爭以實現(xiàn)目標(biāo)結(jié)合，減少標(biāo)記。

• ③容易發(fā)生聚集：膠體金結(jié)合物會聚集在一起。

• ④容易產(chǎn)生背景：暴露的金表面可以與細(xì)胞和組織發(fā)生非特異性結(jié)合。

• ⑤探針體積大：膠體金需要額外的大分子（如BSA）來穩(wěn)定，探針更大會阻礙標(biāo)記物在樣本中的滲透

• ⑥共軛位點非特異性：難以控制結(jié)合的幾何形狀和化學(xué)計量。

二、納米金（Nanogold?）標(biāo)記

Nanogold^④是一種與眾不同的金標(biāo)記。與常規(guī)膠體金相比，它在顯微鏡上的性能得到了改善，對其連接方式和位置明確可控使其成為納米生物技術(shù)和納米結(jié)構(gòu)材料等眾多新領(lǐng)域中的理想選擇。

1.4 nm Nanogold^? 顆粒是一種離散的金化合物。因為它是一種單一的化合物，所以大小非常均勻，而最常用的“1nm”膠體金實際上在1到3nm之間，其化學(xué)和光譜性質(zhì)高度一致。

膠體金（A）和Nanogold尺寸比較：Nanogold尺寸較膠體金小很多，不會影響抗原/抗體表位	Nanogold（A）和膠體金標(biāo)記結(jié)果比較：Nanogold顯示出良好分辨率及對比度

與傳統(tǒng)的膠體金不同，它不吸附在蛋白質(zhì)上，而是在溫和的緩沖條件下，在結(jié)構(gòu)內(nèi)精準(zhǔn)定位與特定的化學(xué)基團(tuán)共價結(jié)合。Nanogold^?可通過多種不同的反應(yīng)進(jìn)行共軛，并可用于標(biāo)記具有適當(dāng)反應(yīng)基團(tuán)的任何分子。Nanogold?已被用于標(biāo)記寡核苷酸、脂質(zhì)、肽、蛋白質(zhì)、酶抑制劑、底物類似物和其他小分子。

Nanogold^?共軛物是一種定義明確的分子，在各種緩沖液和pH條件下都是穩(wěn)定的，可以通過色譜純化。

Nanogold^?是一系列具有不同化學(xué)反應(yīng)性的標(biāo)記試劑。你可以使用這些獨特的產(chǎn)品來標(biāo)記你自己的生物分子、大分子、納米結(jié)構(gòu)材料或表面。Nanogold^?-抗體IgG、Fab'和蛋白質(zhì)結(jié)合物也可提供。

雖然1.4 nm Nanogold^?是最小的電鏡（EM）探針之一，但僅需短暫使用的銀/金增強(qiáng)試劑（LI-silver，HQ-silve或金增強(qiáng)）以產(chǎn)生2-30 nm（取決于顯影時間）或更大尺寸的高可見顆粒。長時間孵育產(chǎn)生在光學(xué)顯微鏡中容易看到的密集、視覺清晰的黑色信號。這也為SDS-PAGE、免疫印跡和Western blots提供了高度敏感和特異的檢測和可視化選擇。

Nanogold?卓越性能：

• ①尺寸小，滲透性能好：不需要額外的大分子，分辨率更高，能滲透進(jìn)入40?m的組織。

• ②選擇性廣：能用合適的反應(yīng)基團(tuán)標(biāo)記任何分子。

• ③顆粒均勻：極其均勻的1.4nm金顆粒，無交聯(lián)和聚集現(xiàn)象。

• ④位點特異性：特定位點標(biāo)記，不影響共軛物的生物活性。

• ⑥高穩(wěn)定性：共軛物在各pH值和離子強(qiáng)度下均表現(xiàn)穩(wěn)定，有較長的保質(zhì)期。

• ⑦低背景：最小的非特異性結(jié)合。 

三、我們能提供的Nanogold?種類：

①納米金結(jié)合物：共價結(jié)合了Fab’/IgG/鏈酶親和素/熒光/脂質(zhì)/不同反應(yīng)基團(tuán)的納米金，是市面上最小的免疫金標(biāo)探針，各方面性能均優(yōu)于膠體金。

應(yīng)用類型及實例：

• 1）原位雜交（ISH）

• 2）電子顯微鏡

• 3）光學(xué)顯微鏡和共聚焦顯微鏡

• 4）免疫層析/側(cè)向流動

• 5）免疫印跡和IHC

• 6）凝膠染色Nanogold標(biāo)記條帶

ISH（原位雜交）檢測：SiHa細(xì)胞中HPV 16的單拷貝	電鏡檢測：單馬來酰亞胺標(biāo)記的Nanogold(箭頭)特異性結(jié)合在IgG分子上鉸鏈的硫醇位點。
光學(xué)顯微鏡檢測：紡錘體Tubulin標(biāo)記，左：膠體金標(biāo)記；右：Nanogold（納米金）	免疫印跡檢測：Nanogold?-抗小鼠Fab'檢測小鼠IgG，實現(xiàn)了前所未有的靈敏度（0.1pg靈敏度）
側(cè)向流動/免疫層析：開發(fā)快速檢測試紙條

Nanogold?優(yōu)點：

• ①金顆粒與Fab’或IgG比例接近1

• ②粒徑小（4nm），且均勻

• ③低背景

• ⑥靈敏度高

• ⑦穩(wěn)定

產(chǎn)品推薦：

標(biāo)記上納米金（Nanogold?）的二抗及鏈霉親和素：

同時標(biāo)記上納米金（Nanogold）和熒光的二抗：

標(biāo)記上納米金（Nanogold）的脂類：

帶不同反應(yīng)基團(tuán)的納米金（Nanogold）顆粒：

② 3-5nm/2-4nm/0.8nm/1.4nm， 帶正電/負(fù)電/不帶電荷，親水/疏水的納米金顆粒：用帶化學(xué)基團(tuán)的不同配基包被和穩(wěn)定，溶解性不同

應(yīng)用：在多種系統(tǒng)和環(huán)境中的應(yīng)用廣泛

產(chǎn)品推薦：

③ Undecagold (Au11)：比納米金（Nanogold）小，直徑僅0.8nm。適用于*高分辨率電鏡（如掃描透射電鏡）或透射電鏡與圖像處理結(jié)合的技術(shù)。單個聚合物在TEM下通常不能被直接觀測到，染色更慢，與納米金相比，銀沉積的量更少。因此在很多應(yīng)用中，建議選用納米金而非Undecagold。

產(chǎn)品推薦：

Nanoprobes公司成立于1990年，專門生產(chǎn)免疫金標(biāo)記和免疫測定試驗產(chǎn)品。主要為廣大科研機(jī)構(gòu)提供用于檢測生物分子的最靈敏的試劑和技術(shù)。Nanoprobes公司獨特的金標(biāo)技術(shù)使用化學(xué)交聯(lián)的金屬簇和納米顆粒作為標(biāo)簽。與膠體金顆粒靜電吸附在抗體和蛋白質(zhì)上的傳統(tǒng)免疫金探針不同，Nanoprobes公司的金標(biāo)是與生物分子在特定位點交聯(lián)的不帶電荷的分子，故其探針具有膠體金不具備的范圍和靈活性。Nanoprobes標(biāo)簽可以附著在任何帶有反應(yīng)基團(tuán)的分子上，比如蛋白質(zhì)、多肽、寡核苷酸、小分子和脂類等，以檢測和定位這些分子。其金標(biāo)也可以和其他標(biāo)簽結(jié)合，一起使用。Nanoprobes獨特的熒光納米金探針在一個探針中結(jié)合了納米金（Nanogold?）和熒光素，用于熒光和電鏡兩種技術(shù)共同進(jìn)行樣品成像。

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