Lysophosphatidic Acid (LPA) Assay Kit II  (貨號EEB-K-2800S） 是一種高靈敏、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性強(qiáng)的用于定量血漿、血清和組織勻漿中的LPA的試劑盒。

樣品類型: 血清、血漿和組織勻漿(人或動物)

樣品體積: 20?L/樣品(重復(fù)點(diǎn))

實(shí)驗(yàn)孵育時(shí)間: 2小時(shí)30分鐘

檢測范圍: 0.064?M~1000?M

LPA是一種血清來源的磷脂，參與多種細(xì)胞過程，如細(xì)胞增殖、趨化性、血小板聚集、傷口愈合、血管生成、腫瘤侵襲和平滑肌收縮。近年來的研究表明，LPA可能在癌癥的病理生理中發(fā)揮重要作用，并可能作為卵巢癌的生物標(biāo)志物。

溶血磷脂酸(LPA)測定是一種設(shè)計(jì)用于體外測定生物樣品中溶血磷脂酸(LPA)的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)。LPA檢測對LPA具有特異性，對不同的酰基鏈敏感。該分析是一種競爭性ELISA，其中比色信號與樣品中存在的LPA的量成反比。本質(zhì)上，隨著LPA在測定中量的增加，比色信號減少。簡單地說，科學(xué)家將他們的樣品與生物素化的抗lpa抗體和樣品稀釋劑混合。然后他們將混合物轉(zhuǎn)移到LPA涂層檢測板上進(jìn)行競爭結(jié)合。鏈親和素hrp和比色檢測用于檢測結(jié)合到板上的生物素化抗lpa的量。使用已知LPA量的標(biāo)準(zhǔn)曲線來確定樣品中LPA的濃度。LPA測定在450nm處讀取，需要3小時(shí)運(yùn)行。

在本文中，我們將介紹溶血磷脂酸(LPA)檢測試劑盒II的特異性數(shù)據(jù)。該ELISA檢測是與Lpath(最初的抗體開發(fā)商)合作開發(fā)驗(yàn)證，將用于檢測其對其他類似或豐富的脂質(zhì)(如磷脂酸(PA)和溶血磷脂酰膽堿(LPC))的特異性，我們將展示它如何區(qū)分各種LPA物種。

LPA分析的重要參與者

Lysophosphatidic Acid(LPA)

LPA是一種血清衍生的生物活性磷脂，參與多種細(xì)胞過程，如細(xì)胞增殖、趨化性、血小板聚集、傷口愈合、血管生成、腫瘤侵襲和平滑肌收縮。最近的研究表明，LPA可能在癌癥的發(fā)展中起著至關(guān)重要的作用，并可能作為卵巢癌的有用生物標(biāo)志物。根據(jù)一項(xiàng)利用LPA測定法的初步研究，LPA水平在子宮內(nèi)膜樣卵巢癌患者中明顯較高。測量陰道分泌物中的LPA可能為絕經(jīng)后婦女診斷子宮內(nèi)膜樣卵巢癌提供一種無創(chuàng)方法。

Lysophosphatidic (LPA) Antibody

LPA Antibody 是一種專門針對LPA的新型單克隆抗體。LPA抗體最初由Lpath獲得專利并開發(fā)，旨在抑制LPA在體外和體內(nèi)的作用。如本文所述，LPA抗體在競爭性ELISA檢測中表現(xiàn)出特異性。一項(xiàng)利用KinExA (Kinetic Exclusion Assays)進(jìn)行的研究證實(shí)，LPA抗體與所有相關(guān)LPA物種，特別是16:0和18:2 LPA具有高親和力。此外，他們發(fā)現(xiàn)LPA抗體可以減少創(chuàng)傷性腦損傷后的病變體積和擴(kuò)散，表明其具有中和炎性脂質(zhì)LPA的潛力，并支持其作為LPA靶向治療藥物的使用。

Lysophosphatidic (LPA) Assay

LPA Assay是一種具有競爭力的ELISA，用于測量復(fù)雜樣品(如血清、血漿和組織勻漿)中的LPA水平。競爭性ELISA也稱為抑制試驗(yàn)，通過評估分析物如何干擾分析信號來確定分析物濃度。該格式對于檢測復(fù)雜混合物(包括血漿、血清或細(xì)胞提取物)中的小分析物(如脂質(zhì))特別有效，只需最少的樣品處理。競爭性ELISA對樣品稀釋和基質(zhì)效應(yīng)不太敏感，并且通常在測定之間表現(xiàn)出較低的變化，使其成為我們許多ELISA測定的首選。

在這個(gè)實(shí)驗(yàn)中，含有LPA的樣品與LPA抗體在樣品稀釋液中孵育。然后將得到的混合物涂在lpa涂層的檢測板上進(jìn)行競爭結(jié)合。檢測采用HRP和比色法測量結(jié)合到板上的LPA抗體的量。LPA濃度是用已知LPA量的標(biāo)準(zhǔn)曲線確定的。該分析在450nm處讀取，大約需要3小時(shí)才能完成。完整的協(xié)議可以在這里找到。

LPA檢測對不同LPA酰基鏈的特異性

LPA的長度和酰基鏈的飽和度不同。這些差異包括鏈上的碳數(shù)(16-、18-或20-)以及脂肪酸是飽和的還是不飽和的。例如，16:0和18:0是飽和脂肪酸，而16:1、18:1、18:2和20:4是不飽和脂肪酸。人血清中最常見的LPA種類是18:1-LPA(油酸)、18:2-LPA(亞油酸)和20:4-LPA(花生四烯酸)。根據(jù)兩份出版物(Murph2007和Sutphen2004)， LPA在人血漿中的存在比例為C16:0: C18:0: C18:1: C18:2: C20:4 = 2.8:1.0:1.5:2.6:3.0。基于這些數(shù)據(jù)，我們分別測試了一個(gè)“混合LPA”和每個(gè)LPA，如下表1所示。在這個(gè)實(shí)驗(yàn)中，我們運(yùn)行了完整的競爭曲線，并通過IC50值進(jìn)行了比較。

Table 1: LPA Assay LPA acyl chain specificity

LPA酰基鏈特異性結(jié)果如下: 

1. LPA測定采用LPA C18:3作為測定標(biāo)準(zhǔn)；

2. LPA測定識別以下LPA種類(從高到低的順序):C18:3 > C18:2 >混合型LPA > C20:4 > C18:1 > C16:0 > C18:0；

3. 混合LPA =存在于人血漿中的LPA種類(C16:0: C18:0: C18:1: C18:2: C20:4 = 2.8:1.0:1.5:2.6:3.0)；

LPA檢測對其他脂質(zhì)的特異性

上文描述了利用LPA抗體的競爭性分析，他們的競爭性ELISA對LPA是特異性的，不結(jié)合其他測試的脂質(zhì)(表1)。他們的結(jié)果反映了我們的內(nèi)部測試，并與Lpath使用可比較的競爭性ELISA方法的結(jié)果一致。

表2給出了在200 μM的LPA實(shí)驗(yàn)中測試的一組脂質(zhì)，測試標(biāo)準(zhǔn)為LPA 18:3。結(jié)果顯示極少或無交叉反應(yīng)性。除了已發(fā)表的數(shù)據(jù)和我們測試的脂質(zhì)外，Lpath測試的更廣泛的脂質(zhì)面板(未顯示)顯示出類似的最小交叉反應(yīng)性。基本上，當(dāng)在競爭性ELISA格式中使用時(shí)，LPA抗體對其靶脂質(zhì)LPA表現(xiàn)出高特異性。

Table 2: LPA Assay lipid cross reactivity

數(shù)據(jù)表明，LPA分析法與我們所測試的脂質(zhì)具有<1%的交叉反應(yīng)性。如果對某一特定脂質(zhì)有顧慮，此處未顯示的其他測試數(shù)據(jù)可應(yīng)要求共享。

綜上所述，Echelon的LPA Assay對于檢測LPA具有高度特異性，LPA是一種具有潛在癌癥生物標(biāo)志物應(yīng)用價(jià)值的關(guān)鍵脂質(zhì)。該方法的廣泛驗(yàn)證表明，它可以有效地區(qū)分LPA與類似的脂質(zhì)，確保在復(fù)雜樣品中準(zhǔn)確測量LPA。該檢測的高特異性和低交叉反應(yīng)性使其成為研究和臨床應(yīng)用的可靠工具。

原文鏈接：https://www.echelon-inc.com/how-specific-is-the-lpa-assay-kit-ii/?mc_cid=93d09d3c99&mc_eid=1618568324