HEK293細胞是一種經(jīng)常在生物醫(yī)學研究中使用的人類胚腎細胞系。HEK293細胞系最初是從一個健康的人胚胎腎臟中獲得的，經(jīng)過轉染而得到的細胞系。這些細胞具有較高的增殖能力和易于轉染的特性，因此在許多生物學研究和生物技術應用中廣泛使用。

HEK293細胞可以在培養(yǎng)基中持續(xù)增殖，并且對于許多實驗室常用的分子生物學和細胞生物學技術非常適用。它們可用于表達外源蛋白質(zhì)、制備重組蛋白、病毒研究、藥物篩選、基因敲除和基因編輯等應用。由于其易于操作和較高的產(chǎn)量，HEK293細胞已成為生物醫(yī)學研究中常用的工具細胞系之一。

HEK293細胞在生物學研究中具有重要的生物學意義。以下是幾個方面的生物學意義：

1. 蛋白表達和生產(chǎn)：HEK293細胞是一種常用的蛋白表達系統(tǒng)。它們可以被用作生產(chǎn)大量外源蛋白質(zhì)的工具細胞。通過轉染目標基因，HEK293細胞可以表達和產(chǎn)生大量的蛋白質(zhì)，包括重組蛋白、抗體、酶等。這對于生物醫(yī)學研究、藥物開發(fā)和生物技術應用具有重要意義。

2. 病毒研究：HEK293細胞對于病毒研究也非常有用。許多病毒需要宿主細胞來進行復制和擴增，而HEK293細胞可以提供一個適合病毒復制的環(huán)境。因此，研究人員可以使用HEK293細胞來研究病毒的感染機制、復制策略以及病毒與宿主細胞的相互作用。

3. 細胞信號傳導和功能研究：HEK293細胞廣泛用于研究細胞信號傳導通路和分子機制。通過轉染特定基因或表達特定蛋白質(zhì)，研究人員可以模擬和研究不同的信號傳導通路，以進一步了解細胞的功能和調(diào)控機制。

4. 藥物篩選和毒性評估：HEK293細胞可用于藥物篩選和毒性評估。通過將HEK293細胞用于體外藥物篩選，研究人員可以評估候選藥物的療效和安全性。此外，HEK293細胞也可以用于評估化合物的毒性和細胞毒性。

總體而言，HEK293細胞在生物醫(yī)學研究和生物技術應用中具有廣泛的應用前景，對于理解細胞生物學、疾病機制和藥物開發(fā)具有重要的生物學意義。

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HEK293懸浮細胞培養(yǎng)基不含無動物源組分、無水解物、化學成分限定，可穩(wěn)定高效表達高質(zhì)量抗體 / 蛋白 / 重組亞單位疫苗。包含3種培養(yǎng)基，分別是HEK293 ExpEnhance SF Medium、HEK293 TransferHelper SF Medium、HEK293 Enhance Feed Medium，每種都可單獨訂購使用。

HEK293 ExpEnhance SF Medium是一款HEK293細胞通用型全懸浮生長培養(yǎng)基，廣泛應用于HEK293懸浮細胞培養(yǎng)，可高效維持HEK293細胞懸浮生長。

HEK293 TransferHelper SF Medium是一款轉染用培養(yǎng)基，應用于質(zhì)粒、siRNA等轉染。

HEK293 Enhance Feed Medium是一款HEK293細胞通用型補料培養(yǎng)基，可延長細胞培養(yǎng)時間和細胞密度。

培養(yǎng)基使用方法

HEK293懸浮細胞培養(yǎng)

1. 細胞培養(yǎng)需要在CO₂環(huán)境下震蕩培養(yǎng)，可選擇CO₂培養(yǎng)箱搭配小搖床或自帶CO₂控制系統(tǒng)的搖床。培養(yǎng)條件：溫度曲線：37℃±0.5℃、濕度曲線：70%±20%、5% CO₂濃度、120-140rpm。

2. 培養(yǎng)過程中需注意以下三點：

1）保證搖床正常運轉；

2）防止外界環(huán)境溫度過高，導致培養(yǎng)箱內(nèi)溫度失控；

3）防止培養(yǎng)箱內(nèi)水盤缺水，導致培養(yǎng)箱內(nèi)濕度過低。

HEK293 ExpEnhance SF Medium培養(yǎng)基（A-EXO002）適應

1. 直接適應：最初培養(yǎng)階段，細胞按初始密度 0.7×10⁶ cells/mL 接種，直接將培養(yǎng)基更換為A-EXO002進行細胞培養(yǎng)。待細胞培養(yǎng)2-3代，且細胞生長穩(wěn)定后進行后續(xù)實驗。293細胞穩(wěn)定生長時，按0.7×10⁶ cells/mL密度接種，培養(yǎng)72h，密度≥4×10⁶ cells/mL，細胞活率≥95%。

2. 間接適應：保持初始接種密度為0.7×10⁶ cells/mL。細胞培養(yǎng)過程中逐步減少原培養(yǎng)基直至完全在A-EXO002培養(yǎng)基中培養(yǎng)。原培養(yǎng)基與A-EXO002比例推薦為（75:25、50:50、25:75、10:90、最終為100% A-EXO002培養(yǎng)基），每個階段至少適應3代，細胞生長穩(wěn)定后進行后續(xù)實驗。293細胞穩(wěn)定生長時，按照0.5-1×10⁶ cells/mL密度接種，培養(yǎng)72h，密度≥4×10⁶ cells/mL，細胞活率活率≥95%。

3. 注意事項

1） 根據(jù)細胞具體情況選擇培養(yǎng)基直接適應或者間接適應。

2） 細胞馴化初期，若出現(xiàn)密度低、結團等不穩(wěn)定狀態(tài)，根據(jù)密度選擇合適的傳代方式：

a. 稀釋傳代：根據(jù)細胞密度計算傳代時所需細胞懸液，去除多余細胞懸液并補加新鮮培養(yǎng)基。

b. 離心傳代：根據(jù)細胞密度計算傳代時所需細胞懸液，800rpm（114g）離心5min，去除上清，用新鮮培養(yǎng)基重懸細胞。

4. 細胞正常狀態(tài)傳代：

不同計數(shù)方式可能存在差異，建議使用Countstar細胞計數(shù)儀。

HEK293懸浮細胞凍存

1. 待細胞恢復至正常狀態(tài)后，擴大細胞培養(yǎng)體積準備凍存建庫。盡量多建細胞庫，保證備份充足。

2. 選擇處于對數(shù)生長期、活率＞90%的細胞凍存，凍存密度:10-15×10⁶ cells/mL，推薦15×10⁶ cells/mL。

3. 準備凍存盒：向程序降溫盒注入適量異丙醇，置于4℃冰箱預冷。

4. 配制細胞凍存液：凍存液 = 80% A-EXO002培養(yǎng)基 + 10% FBS（建議使用進口胎牛血清） + 10% DMSO，凍存液配好后置于4℃冰箱預冷（凍存液配制時，先加培養(yǎng)基再加血清或DMSO，防止DMSO濃度過高導致血清有效成分變性）。

若選擇無血清凍存方案，推薦的凍存液配方：92.5% A-EXO002培養(yǎng)基 + 7.5% DMSO。

5. 取細胞懸液，800rpm（114g）離心5min，棄上清，用細胞凍存液重懸細胞，調(diào)整細胞密度至目標值。

6. 快速分裝細胞液至凍存管中。

7. 將凍存管放入程序降溫盒中，放于-80℃冰箱，24h后轉至液氮罐中儲存。一段時間后復蘇檢測。

HEK293懸浮細胞復蘇

1. 預熱培養(yǎng)基：取20mL對應培養(yǎng)基置于搖瓶中，放入37℃二氧化碳培養(yǎng)箱中預熱30min以上（平衡培養(yǎng)基pH值），保證預熱充分。

2. 將凍存管從液氮保存罐或-80℃冰箱中取出，迅速轉移至37℃水浴中，快速搖晃，直至完全融化。

3. 取預熱的培養(yǎng)基5mL于無菌離心管中，并將解凍后的細胞懸液移入此離心管中。800rpm（114g）離心5min（除去凍存液中DMSO）。

4. 棄上清，用15mL預熱的培養(yǎng)基重懸細胞，移回相應搖瓶，放于培養(yǎng)箱中懸浮培養(yǎng)。

建議瞬轉工藝

（以4×10⁶cells/mL，20mL培養(yǎng)基為例）

1.1 轉染當日，測量細胞密度，當細胞密度應≥4×10⁶cells/mL，細胞活率≥90%，可進行轉染操作。

1.2 質(zhì)粒轉染混合物制備：DNA、PEI和A-EXO003培養(yǎng)基恢復室溫。準備1.5mL （7.5%的總體積） A-EXO003培養(yǎng)基稀釋質(zhì)粒DNA（三質(zhì)粒總量40-60μg，表達質(zhì)粒、包裝質(zhì)粒、輔助質(zhì)粒推薦比例為1:4:3）和PEI （90-120μg），先加質(zhì)粒，輕輕混勻，再加PEI （使用前輕輕渦旋混勻），PEI加入后立即輕輕混勻。

1.3 在室溫下靜置孵育15min。

1.4 轉染細胞：用移液槍輕輕上下吹吸混合液3次后，直接向搖瓶中加入DNA-PEI復合物并輕輕晃動。

1.5 在適當?shù)臏囟取⑥D速和CO₂水平下培養(yǎng)細胞（如37℃, 120轉/分，5%），瞬轉24h、48h后分別補加1mL A-EXO001補料培養(yǎng)基（5%的總體積）。

1.6 按實際情況收獲病毒（建議72h、96h、120h、144h、168h分別取樣檢測細胞密度、活率和產(chǎn)量后，選擇合適的收料時間）。

2. （以4×10⁶cells/mL，20mL培養(yǎng)基為例）

2.1 轉染當日，測量細胞密度，當細胞密度應≥4×10⁶cells/mL，細胞活率≥90%，可進行轉染操作。

2.2 準備 DNA-PEI 復合物： DNA、PEI 試劑和A-EXO003培養(yǎng)基在進行以下步驟前需先使其升至室溫。準備1.5mL （7.5%的總體積） A-EXO003培養(yǎng)基稀釋40μg DNA（按照1μg/10⁶ cells）和 80μL PEI 試劑（每 1μg DNA 需用 2μL 線性PEI轉染試劑）。先加質(zhì)粒，輕輕混勻，再加PEI轉染試劑（使用前輕輕渦旋混勻），渦旋振蕩5s。

2.3 在室溫下靜置15min。

2.4 轉染細胞：用移液槍輕輕上下吹吸混合液3次后，直接向搖瓶中加入DNA-PEI復合物并輕輕晃動。

2.5 將轉染細胞放入搖床，培養(yǎng)24h及48h后，分別加入1mL A-EXO001補料培養(yǎng)基（5%的總體積）。

2.6 若轉染熒光質(zhì)粒，轉染24h即可觀察熒光；若轉染蛋白質(zhì)粒，則按實際情況收獲蛋白（建議72h、120h、144h、168h分別取樣檢測細胞密度、活率和產(chǎn)量后，選擇合適的收料時間）。

HEK293培養(yǎng)基從4℃冰箱取出必須恢復到室溫后使用。

每次搖瓶取出進行轉染或計數(shù)等操作后，應盡快放回搖床，切勿長時間室溫放置。

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