作者： Alok Pandey，博士，PBL Assay Science公司生物標(biāo)志物與轉(zhuǎn)化科學(xué)副總裁

在使用ELISA試劑盒檢測(cè)蛋白質(zhì)生物標(biāo)志物時(shí)，PBL Assay Science公司反復(fù)觀察到的一個(gè)現(xiàn)象是，并非所有檢測(cè)都是同等有效的。基于我們?cè)贓LISA設(shè)計(jì)、制造以及為客戶驗(yàn)證和運(yùn)行第三方ELISA方面的30多年經(jīng)驗(yàn)，我們發(fā)現(xiàn)了在檢測(cè)設(shè)計(jì)、性能和特性化方面存在的一些常見(jiàn)關(guān)注點(diǎn)，包括：

設(shè)計(jì)未充分考慮目標(biāo)分析物的生物變異性：例如，某些分析物以不同的異構(gòu)體形式存在或作為分子復(fù)合物的一部分，而許多檢測(cè)并未優(yōu)化以檢測(cè)這些形式。

定量靈敏度不足：理想的ELISA應(yīng)能準(zhǔn)確量化健康供體樣本中低濃度的分析物，以提供與疾病狀態(tài)樣本進(jìn)行比較的基線。

在存在常見(jiàn)干擾物時(shí)的定量不準(zhǔn)確：健康和疾病狀態(tài)樣本中的生物化合物可能會(huì)人為地降低信號(hào)，如果檢測(cè)未針對(duì)這些干擾物進(jìn)行優(yōu)化。

檢測(cè)規(guī)格不完整：ELISA規(guī)格應(yīng)詳細(xì)說(shuō)明檢測(cè)范圍和定量下限（LLOQ），即分析物能被可靠量化的最低濃度。根據(jù)當(dāng)前的ICH M10生物分析驗(yàn)證指南，LLOQ必須大于或等于校準(zhǔn)曲線中的最低點(diǎn)。一些制造商未能以展示可靠和一致性能的方式驗(yàn)證其檢測(cè)，且許多制造商未指定LLOQ，導(dǎo)致數(shù)據(jù)解釋的不一致性。

PBL在ELISA產(chǎn)品設(shè)計(jì)中解決的四個(gè)挑戰(zhàn)示例：

VeriKine-HS人IL-15 ELISA試劑盒（產(chǎn)品貨號(hào)#41702）

大多數(shù)ELISA僅測(cè)量游離的IL-15或大腸桿菌表達(dá)的IL-15，而PBL設(shè)計(jì)的IL-15試劑盒能夠檢測(cè)游離的IL-15和IL-15/IL-15Rα復(fù)合物——這是人血液中的主要形式。該試劑盒旨在檢測(cè)健康供體血清和血漿中的基礎(chǔ)內(nèi)源性總IL-15和IL-15/IL-15Rα復(fù)合物。在測(cè)試的健康供體血清樣本中，100%的樣本顯示IL-15的量高于定量下限。

圖1：IL-15/ IL15Ra配合物標(biāo)準(zhǔn)品的檢測(cè)。IL15/IL15Ra標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)不良（競(jìng)爭(zhēng)者B）或根本未檢測(cè)到（競(jìng)爭(zhēng)者A和C）。

VeriKine-HS人IFN-Alpha全亞型ELISA試劑盒（產(chǎn)品貨號(hào)#41115和#41135）

盡管許多研究人員認(rèn)識(shí)到存在12種人類(lèi)IFN-alpha蛋白亞型，但市場(chǎng)上的大多數(shù)檢測(cè)并未在健康供體和疾病患者中檢測(cè)到全部亞型，導(dǎo)致定量不準(zhǔn)確。PBL的試劑盒旨在檢測(cè)所有人類(lèi)IFN-alpha亞型，并已通過(guò)各種疾病狀態(tài)血清樣本測(cè)試，以盡量減少假陽(yáng)性和假陰性結(jié)果。該產(chǎn)品的高靈敏度（比其他ELISA高10倍）特別適用于區(qū)分人類(lèi)樣本中常見(jiàn)的較低水平的干擾素。

圖2：仙臺(tái)病毒時(shí)間過(guò)程中內(nèi)源性干擾素α水平的定量測(cè)定

VeriKine-HS人IL-22 ELISA試劑盒（產(chǎn)品貨號(hào)#41701）

由于IL-22結(jié)合蛋白（IL-22BP）的干擾，許多ELISA難以準(zhǔn)確測(cè)量生物樣本中的游離IL-22，且許多檢測(cè)無(wú)法測(cè)量健康供體和疾病狀態(tài)樣本中通常存在的低濃度IL-22。PBL設(shè)計(jì)的ELISA能夠有效地在低濃度下量化游離IL-22，確保在健康供體和疾病狀態(tài)樣本中的準(zhǔn)確測(cè)量。

*競(jìng)爭(zhēng)對(duì)手A列出的ELISA“靈敏度”為5.8 pg/mL，我們將其解釋為檢測(cè)下限（LLOD）。沒(méi)有提供檢測(cè)上限（LLOQ）。

表1：PBL與競(jìng)品ELISA試劑盒的比較

VeriKine-HS人IFN-Beta ELISA試劑盒（產(chǎn)品貨號(hào)#41415和#41435）

大多數(shù)ELISA無(wú)法測(cè)量健康供體和疾病患者中低水平的IFN-beta。此外，如果檢測(cè)不測(cè)量與sIFNAR2（一種常存在于現(xiàn)實(shí)世界樣本中的受體組分）結(jié)合的IFN-beta，則ELISA結(jié)果可能會(huì)人為降低。PBL設(shè)計(jì)的ELISA能夠準(zhǔn)確量化pg/ml水平的內(nèi)源性干擾素，并能在sIFNAR2存在的情況下進(jìn)行定量。該檢測(cè)還量化了在大腸桿菌和CHO細(xì)胞中表達(dá)的治療性IFN-beta分子，并已通過(guò)CRO驗(yàn)證，可用于自身免疫病血清和商標(biāo)IFN-beta治療藥物的定量。

圖3：PBL的檢測(cè)結(jié)果與血清樣品一致，不受sIFNAR2存在的影響。

原文鏈接如下：https://signals.cytokinesociety.org/2024/09/30/elisa-kits-and-real-world-challenges/