β淀粉樣肽(Aβ)的聚集是阿爾茨海默癥大腦的標(biāo)志性特征。Aβ肽池并非呈現(xiàn)單一的、明確的成分，而是復(fù)雜且由N端截短和C端長(zhǎng)度各異的肽組成。為了系統(tǒng)地研究多肽組成對(duì)聚集的影響，生產(chǎn)了一系列具有C端變異的合成淀粉樣β肽。使用硫黃素T結(jié)合、遠(yuǎn)紫外圓二色光譜和透射電子顯微鏡來(lái)研究形成的聚集物的特性。

阿爾茨海默癥是一種進(jìn)展性神經(jīng)退行性疾病，最早的癥狀之一包括認(rèn)知功能的喪失，這通常在65歲左右開(kāi)始顯現(xiàn)。淀粉樣β（Aβ）肽是淀粉樣前體蛋白（APP）加工的產(chǎn)物，其在阿爾茨海默癥大腦中的積累是該病的典型病理特征。多年來(lái)，Aβ肽池已被鑒定為高度復(fù)雜，其中包括含有37、38、40、42和43個(gè)氨基酸的多肽，這主要是由于γ-分泌酶對(duì)APP的切割位點(diǎn)不明確所致。在阿爾茨海默癥患者中，Aβ肽池傾向于過(guò)度表達(dá)較長(zhǎng)的Aβ肽（42個(gè)氨基酸及以上），與健康個(gè)體相比。盡管已經(jīng)報(bào)道Aβ1-42比Aβ1-40聚集得更快，但大腦中其他Aβ肽的特性還不為人知。可以通過(guò)使用硫黃素T結(jié)合、圓二色光譜和透射電子顯微鏡，比較了Aβ的C端變異的聚集特性。

多肽由JPT肽技術(shù)公司（德國(guó)柏林）以六氟異丙醇（HFIP）薄膜的形式提供。肽的純度和身份通過(guò)基質(zhì)輔助激光解吸/電離飛行時(shí)間質(zhì)譜（MALDI-TOF MS）進(jìn)行評(píng)估。肽的溶解采用逐步程序，先用1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙醇（HFIP）和二甲基亞砜（DMSO）溶解，然后在1 mM乙二胺四乙酸（EDTA）和50 mM Tris緩沖液（pH 7.5）中孵育。Aβ的聚集分別在孵育15小時(shí)、2周和2周后通過(guò)硫黃素T結(jié)合、圓二色光譜和透射電子顯微鏡（TEM）進(jìn)行監(jiān)測(cè)。

在孵育15小時(shí)后，通過(guò)監(jiān)測(cè)Aβ1-37、Aβ1-40、Aβ1-42和Aβ1-43與硫黃素T（一種報(bào)告聚集形成的染料）的結(jié)合親和力，來(lái)觀察形成的聚集物（如上圖1）。硫黃素T陽(yáng)性聚集物的形成與Aβ肽的長(zhǎng)度并非呈線性相關(guān)。短的Aβ1-37和長(zhǎng)的Aβ1-42以及Aβ1-43在15小時(shí)孵育后具有相似的低硫黃素T熒光強(qiáng)度，而Aβ1-38和Aβ1-40在相似條件下則顯示出五到六倍更高的熒光強(qiáng)度。通過(guò)使用透射電子顯微鏡，獲得了形成的聚集物的形態(tài)學(xué)描述（如下圖2）。

所有肽都具有很強(qiáng)的自組裝傾向，但形成的聚集物的形態(tài)隨肽的長(zhǎng)度而變化。較短的肽Aβ1-37和Aβ1-38形成延伸的、負(fù)染色的、半柔性的纖維，沒(méi)有明顯的分支。當(dāng)肽的長(zhǎng)度向C端延伸時(shí)，形成的纖維逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)槊芗旧木W(wǎng)絡(luò)，在這些網(wǎng)絡(luò)中，單個(gè)纖維已無(wú)法區(qū)分。盡管Aβ1-37和Aβ1-42在聚集形成時(shí)顯示出相似的硫黃素T結(jié)合特性，但纖維形態(tài)差異很大。為了確定形成的聚集物的二級(jí)結(jié)構(gòu)構(gòu)象，采用了遠(yuǎn)紫外圓二色光譜（見(jiàn)圖3）。數(shù)據(jù)顯示，隨著C端的延伸，聚集物逐漸從無(wú)規(guī)卷曲（198 nm處的負(fù)值）轉(zhuǎn)變?yōu)楦缓?折疊（210 nm處的負(fù)峰）的聚集物。

通過(guò)使用硫黃素T熒光、透射電子顯微鏡和遠(yuǎn)紫外圓二色光譜分別測(cè)試了合成的Aβ肽的C端變異對(duì)聚集傾向、形態(tài)和二級(jí)結(jié)構(gòu)的影響。在本研究中調(diào)查的Aβ肽包含37、38、40、42和43個(gè)氨基酸，這些肽也在大腦中自然存在。觀察到這些肽自組裝并形成硫黃素T陽(yáng)性聚集物的傾向存在很大差異，這主要是由于形態(tài)的變化。盡管使用透射電子顯微鏡和圓二色光譜觀察到Aβ1-42和Aβ1-43存在廣泛的富含β-折疊的聚集，但這些聚集物僅表現(xiàn)出有限的硫黃素T結(jié)合。有人假設(shè)，這兩種肽觀察到的密集網(wǎng)絡(luò)阻止了硫黃素T染料的直接接觸，從而抑制了結(jié)合和熒光強(qiáng)度。大腦中的Aβ肽池主要由Aβ1-40和Aβ1-42組成，其特性已得到廣泛研究。最近認(rèn)識(shí)到Aβ1-37、Aβ1-38和Aβ1-43在大腦中的存在，而且，這些肽現(xiàn)在被認(rèn)為在調(diào)節(jié)阿爾茨海默病的進(jìn)展中發(fā)揮作用。

JPT肽技術(shù)公司（德國(guó)柏林）作為多肽生產(chǎn)專(zhuān)家，可以提供不同長(zhǎng)度不同形式的Aβ肽。