植物的組織培養(yǎng)廣義又叫離體培養(yǎng)，是20世紀(jì)初發(fā)展起來(lái)的一門新興技術(shù)。植物組織培養(yǎng)是一種在無(wú)菌條件下，將植物的組織或細(xì)胞培養(yǎng)在人工培養(yǎng)基上進(jìn)行生長(zhǎng)和繁殖的技術(shù)。它涉及將植物的組織（如葉片、莖、根、胚等）或細(xì)胞分離出來(lái)，并在含有營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、激素和其他必要成分的培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。植物組織培養(yǎng)可以用于多種目的，包括：

1. 植物繁殖：通過(guò)植物組織培養(yǎng)，可以實(shí)現(xiàn)植物的無(wú)性繁殖，如愈傷組織培養(yǎng)、離體芽培養(yǎng)和胚培養(yǎng)等。

2. 基因轉(zhuǎn)化：利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)，可以將外源基因?qū)胫参锛?xì)胞中，實(shí)現(xiàn)植物的基因轉(zhuǎn)化，以獲得具有特定性狀的轉(zhuǎn)基因植物。

3. 病毒檢測(cè)和病毒清除：通過(guò)植物組織培養(yǎng)，可以檢測(cè)植物中存在的病毒，并進(jìn)行病毒清除，以保證植物的健康和繁殖性。

4. 植物生理研究：植物組織培養(yǎng)可以用于研究植物的生理過(guò)程、激素調(diào)控、生長(zhǎng)發(fā)育和代謝途徑等。

植物組織培養(yǎng)技術(shù)在植物育種、研究和工業(yè)生產(chǎn)等領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用。它為研究植物生物學(xué)、改良植物性狀和保護(hù)植物資源提供了有力的工具。

在植物組織培養(yǎng)中，污染指的是在培養(yǎng)過(guò)程中出現(xiàn)的非預(yù)期的微生物、真菌、細(xì)菌或其他外來(lái)物質(zhì)的存在。這些污染物可能來(lái)自環(huán)境、操作人員、培養(yǎng)基或培養(yǎng)器具等。植物組織培養(yǎng)的無(wú)菌條件是非常重要的，因?yàn)槿魏挝廴径伎赡軐?duì)培養(yǎng)物的生長(zhǎng)和發(fā)育產(chǎn)生不利影響。面對(duì)植物組培污染問(wèn)題，我們通常采取在培養(yǎng)基中加入適量的抗生素（如青霉素、鏈霉素、氯霉素等）來(lái)抑菌。但是抗生素一般不穩(wěn)定，遇酸、堿或加熱都易分解而失去活性。而且單一抗生素抑菌容易產(chǎn)生抗藥性，一旦停止使用，污染率就會(huì)顯著上升。同時(shí)，高濃度的抗生素還會(huì)影響植物的生長(zhǎng)。

為解決上述問(wèn)題，我們推薦專業(yè)植物組培高效廣譜性抗菌劑PPM，它可以有效預(yù)防和清除由于空氣、滅菌不徹底、交叉污染、外植體消毒等各種原因?qū)е碌闹参锝M培苗的真菌、細(xì)菌、內(nèi)生菌和農(nóng)桿菌污染。可以加入培養(yǎng)基高溫滅菌；在合理使用劑量下，不會(huì)對(duì)植物的生長(zhǎng)產(chǎn)生任何影響。

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Plant Preservative Mixture (PPM) 使用方法

一．常規(guī)污染預(yù)防用量

一般推薦使用濃度為0.05%-0.2%（1L培養(yǎng)基中加入0.5-0.75ml PPM）；愈傷增殖， 器官形成，胚性組織發(fā)育等使用濃度為0.05%-0.075%。

二．植物內(nèi)生菌污染處理

1. 種子：PPM不推薦用于直接處理含有大量的細(xì)菌或真菌孢子的種子滅菌；對(duì)于種子離體萌發(fā)，建議先采用傳統(tǒng)方法消毒，然后置于含 2-3%PPM的全培養(yǎng)基礎(chǔ)鹽溶液中，輕輕攪拌4-12小時(shí)，此過(guò)程千萬(wàn)不能添加Tween20和調(diào)節(jié)pH，處理完成以后直接插入含有 PPM(草本植物0.05-0.1%，木本植物0.2%)的培養(yǎng)基里進(jìn)行培養(yǎng)。

2. 外植體：以 1cm 外植體為例，將外植體置于含 4-5%PPM的全培養(yǎng)基礎(chǔ)鹽溶液中，輕輕攪拌4-12小時(shí)，此過(guò)程千萬(wàn)不能添加 Tween20和調(diào)節(jié)pH，處理完成以后直接插入含有PPM(草本植物 0.05-0.1%，木本植物0.2%)的培養(yǎng)基里進(jìn)行培養(yǎng)。

3. 塊莖，球莖和鱗狀物的觀賞植物樣本：將其整體放入消毒劑中攪拌消毒處理以后， 用水沖洗干凈，將材料切成薄片，置于含 4-5%PPM的全培養(yǎng)基礎(chǔ)鹽培養(yǎng)液中，輕輕攪拌4-12小時(shí)，此過(guò)程千萬(wàn)不能添加Tween20 和調(diào)節(jié)pH，處理完成以后無(wú)需沖洗直接插入含有 0.1-0.2%的PPM的培養(yǎng)基里進(jìn)行培養(yǎng)。

三．經(jīng)過(guò)處理效果不理想的樣本

如果厚的外植體、污染嚴(yán)重的植株、種子等樣本經(jīng)過(guò)以上處理仍得不到理想效果，可嘗試以下操作：

1. 將材料浸泡在水中持續(xù)攪拌處理(松軟組織攪拌1小時(shí)，硬實(shí)組織攪拌2小時(shí))。

2. 將材料在含50%的PPM全培養(yǎng)基礎(chǔ)鹽溶液中攪拌處理5-10分鐘，此過(guò)程千萬(wàn)不能添加 Tween20 和調(diào)節(jié)pH。

3. 無(wú)需沖洗，將處理過(guò)的材料直接加入到培養(yǎng)基中即可。對(duì)于真菌污染，可在培養(yǎng)基中加入適當(dāng)濃度的PPM。對(duì)于真菌細(xì)菌混合性污染，建議在培養(yǎng)的第一個(gè)月的培養(yǎng)基中加入0.05%-0.2%的PPM。

四．嚴(yán)重污染材料污染去除與搶救（重污染不超過(guò)一周）

1. 將污染的材料至于流水中用軟刷刷洗，然后置于含50% PPM的無(wú)菌水溶液中攪5-15分鐘；對(duì)于細(xì)菌或者混合性污染，建議使用 100% PPM與 0.6g/L 的檸檬酸無(wú)菌水溶液按 1：1 混合的低 pH(2.8-3.2)的酸性溶液處理。

2. 處理后的材料無(wú)需清洗，直接插入含0.05%-0.25的PPM的培養(yǎng)基中培養(yǎng)至少一個(gè)月以上，其中前10天需要弱光培養(yǎng)。

五．農(nóng)桿菌的去除

共培養(yǎng)以后，將樣本用無(wú)菌水清洗，然后將樣本浸沒(méi)在 100% PPM（補(bǔ)充4X的培養(yǎng)基鹽溶液）中處理2分鐘，取出后用無(wú)菌紙吸干后并置于常用抗性培養(yǎng)基中培養(yǎng)，3 周后，更換到只含有0.05%-0.075% PPM(無(wú)常用抗生素)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)：

1. 在所有 PPM消毒處理外植體的過(guò)程中，盡量保證容器的體積足夠大，并使外植體材料所有面積與含PPM的處理溶液充分接觸，以保證消毒效果；

2. 如果外植體出現(xiàn)高度氧化現(xiàn)象，不要扔棄，大約50%的外植體在 4-6 周內(nèi)即可恢復(fù)；

3. 50% PPM 的處理溶液可以重復(fù)使用但是不推薦，因?yàn)槭褂么螖?shù)和效果受外植體的體積與接種密度的影響。將50% PPM的處理溶液保存在4?C可適當(dāng)延長(zhǎng)其活性，一般可使用不超過(guò)10次。如果必要，建議配制2份50% PPM溶液，一份用于外植體消毒內(nèi)生菌污染，另一份用于消除“培養(yǎng)過(guò)程中”的輕度污染材料搶救，第二份溶液在每次處理過(guò)后需要用 0.2mm濾器過(guò)濾；

4. 如果50%PPM溶液處理效果不理想，可采用100%PPM溶液進(jìn)行處理，處理方法相同，但使用次數(shù)不得超過(guò)10次。

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