神經(jīng)元通過突觸互相交流傳遞信號(hào)，電化學(xué)信號(hào)在此處轉(zhuǎn)換為生化信號(hào)。突觸前膜釋放神經(jīng)遞質(zhì)進(jìn)入突觸間隙，突觸后膜上的相應(yīng)受體蛋白接收這些信號(hào)。在此過程中，突觸小泡與突觸前膜融合，使小泡內(nèi)膜短暫暴露于細(xì)胞外空間。

在培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元中，可利用培養(yǎng)基中添加的抗體結(jié)合突觸小泡內(nèi)腔蛋白表位。這些抗體在隨后的網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞作用中被納入突觸小泡。通過這種方法，可以選擇性地標(biāo)記具有活躍小泡循環(huán)的突觸（圖 1）。例如，若使用針對(duì) Synaptotagmin1 的抗體，所有活躍突觸均會(huì)獨(dú)立于其神經(jīng)遞質(zhì)表型而被標(biāo)記（圖 2）。相比之下，針對(duì)囊泡 GABA 轉(zhuǎn)運(yùn)體（VGAT）的抗體可選擇性地標(biāo)記僅活躍的抑制性突觸。

當(dāng)使用預(yù)先標(biāo)記的抗體時(shí)，無(wú)需額外固定或應(yīng)用任何二抗，即可直接觀察小泡。

或者，可將一抗與 FluoTags 納米標(biāo)記的二抗預(yù)先孵育，形成一抗 - 二抗復(fù)合物。這些復(fù)合物隨后可像預(yù)先標(biāo)記的一抗一樣用于活神經(jīng)元的直接標(biāo)記。

 圖 1：利用針對(duì)突觸小泡蛋白內(nèi)腔表位的熒光標(biāo)記抗體標(biāo)記循環(huán)突觸小泡。

 圖 2：標(biāo)記培養(yǎng)海馬神經(jīng)元中的循環(huán)小泡（產(chǎn)品 105 311AF）。活細(xì)胞與標(biāo)記抗體在培養(yǎng)基中孵育 30 分鐘。

內(nèi)吞作用結(jié)束后，突觸小泡腔通過質(zhì)子 ATP 酶重新酸化。由此產(chǎn)生的質(zhì)子梯度對(duì)突觸小泡重新裝載神經(jīng)遞質(zhì)分子至關(guān)重要，這一過程由特定的囊泡神經(jīng)遞質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)體介導(dǎo)，為下一次融合做準(zhǔn)備。CypHer5E 和 AcidiFluor Orange 等 pH 敏感型熒光染料僅在酸性環(huán)境中發(fā)出熒光。相應(yīng)的抗體偶聯(lián)物非常適合檢測(cè)活細(xì)胞中的循環(huán)突觸小泡，因?yàn)樗鼈儍H在抗體完全內(nèi)化且突觸小泡腔重新酸化后才會(huì)發(fā)光（圖 2）。

Synaptic Systems 提供了一系列針對(duì)突觸小泡蛋白內(nèi)腔表位的抗體，這些抗體適用于基于活動(dòng)的循環(huán)小泡標(biāo)記。我們提供多種不同熒光標(biāo)記的偶聯(lián)物，以滿足您的確切需求。

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