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cGAS及cGAS-STING通路:
cGAS-STING信號(hào)通路最初是作為天然免疫系統(tǒng)的一個(gè)重要組成部分被發(fā)現(xiàn),其功能是檢測(cè)胞漿DNA的存在,并在反應(yīng)中觸發(fā)炎癥基因的表達(dá)。DNA通常存在于細(xì)胞核中,異常在胞漿中定位的DNA與腫瘤的發(fā)生或病毒感染有關(guān),環(huán)狀GMP-AMP合成酶(cyclic GMP-AMP Synthasec,cGAS)感知到本不應(yīng)出現(xiàn)在細(xì)胞質(zhì)的DNA時(shí),會(huì)催化GTP和ATP之間發(fā)生化學(xué)反應(yīng)并生成一種被稱(chēng)為環(huán)鳥(niǎo)腺苷酸(cvclic GMP-AMP cGAMP)的小分子,該小分子作為先天免疫系統(tǒng)的信使,會(huì)進(jìn)一步激活免疫反應(yīng)。因比,cGAS就像一個(gè)防盜報(bào)警器,cGAMP則是防盜報(bào)警器產(chǎn)生的電信號(hào)。cGAMP結(jié)合并激活STING,后者是一種作為細(xì)胞對(duì)異常胞漿DNA作出免疫應(yīng)答的關(guān)鍵組分的跨膜接頭蛋白,STING被激活后隨TBK1從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)一起轉(zhuǎn)位至核周內(nèi)體。TBK1激酶磷酸化并激活干擾素調(diào)節(jié)因子(IRFs)和NF-KB,后者誘導(dǎo)Ⅰ型干擾素和其他免疫應(yīng)答基因。

2013年發(fā)現(xiàn)cGAS后不久,自我DNA的異常激活被證明是導(dǎo)致衰弱甚至致命的自身免疫性疾病的基礎(chǔ),如系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)和Aicardi–Goutieres綜合征(AGS)。動(dòng)物模型中的敲除研究清楚地表明,抑制cGAS是一種有希望的治療干預(yù)方法,使得cGAS成為近些年熱門(mén)的先天免疫靶點(diǎn)的酶。這里給大家?guī)?lái)全球領(lǐng)先先導(dǎo)藥物高通量篩選專(zhuān)家BellBrook研發(fā)的cGAS抑制劑高通量篩選工具——Transcreener cGAMP cGAS檢測(cè)試劑盒,可助力全球制藥和生物技術(shù)公司、CRO和學(xué)術(shù)實(shí)驗(yàn)室加速藥物發(fā)現(xiàn)。
Transcreener cGAMP cGAS檢測(cè)法通過(guò)測(cè)定生成的cGAMP來(lái)測(cè)定cGAS酶的活性。通過(guò)檢測(cè)cGAMP輸出,該方法提供了一種實(shí)時(shí)評(píng)估任何cGAMP產(chǎn)生酶活性的通用方法。Transcreener cGAMP檢測(cè)技術(shù)使用了一種簡(jiǎn)單但高效的方法,包括cGAMP特異性抗體搭配遠(yuǎn)紅熒光的示蹤劑。反應(yīng)中產(chǎn)生的cGAMP與示蹤劑競(jìng)爭(zhēng),改變熒光特性并提供熒光讀出。cGAS分析可用于熒光偏振(FP)和時(shí)間分辨-熒光共振能量轉(zhuǎn)移(TR-FRET)兩種方式進(jìn)行檢測(cè)~
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| 熒光偏振(FP)法原理示意圖 |
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| 時(shí)間分辨-熒光共振能量轉(zhuǎn)移(TR-FRET)法示意圖 |
參考用途:
cGAS酶活性檢測(cè)
篩選cGAS抑制劑化合物庫(kù)
量化抑制劑效力
確定cGAS-抑制劑滯留時(shí)間
相關(guān)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證數(shù)據(jù)請(qǐng)參見(jiàn):Targeting the cGAS-STING Pathway Using a Homogenous, HTS Compatible Transcreener? cGAS Assay
Transcreener cGAMP cGAS試劑盒優(yōu)勢(shì):
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| 操作簡(jiǎn)便,高通量,兼容96, 384和1536孔模式~ |
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| 出色的信號(hào)穩(wěn)定性:24小時(shí)以上的信號(hào)依舊穩(wěn)定性 |
產(chǎn)品性能展示:
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| cGAS由雙鏈DNA激活,需要ATP和GTP底物來(lái)生產(chǎn)cGAMP | cGAS和 cGAMP 線(xiàn)性 |
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| 第一步輕松高通量篩選處化合物庫(kù) | 后續(xù)通過(guò)劑量反應(yīng)確定抑制劑效力 |
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| cGAS被dsDNA激活 | ATP和GTP依賴(lài) |
Transcreener cGAMP cGAS試劑盒組分:
| 組分 | 描述 |
| cGAMP Antibody | 二核苷酸cGAMP特異的抗體。 |
| Tracer | 熒光的變化可以在FP或TR-FRET中讀取 |
| Stop & Detect Buffer B, 10X | 一種可以用來(lái)終止酶反應(yīng)的緩沖液,用于終點(diǎn)法讀數(shù) |
| ATP | ATP可用于酶反應(yīng)和標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn) |
| GTP | GTP可用于酶反應(yīng)和標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn) |
| cGAMP | 標(biāo)準(zhǔn)品 |
| Interferon Stimulatory DNA | ISD是一種45-bp的低聚物,用于激活cGAS酶 |
需要自備的試劑及儀器:
| 名稱(chēng) | 描述 |
| cGAS酶 | cGAS(Cat# 2227)可以從艾美捷購(gòu)買(mǎi)。 |
| 酶緩沖液 | 我們通常使用含有20 mM TRIS (pH 7.5), 5 mM MgCl2, 0.01% Brij-35和1% DMSO(測(cè)試化合物的溶劑)的酶緩沖液,使用最適合你的酶條件的緩沖液。 |
| 檢測(cè)用板子 | FP 格式:黑色板子,推薦康寧384孔板(Cat# 4514) TR-FRET格式:白色板子,推薦康寧384孔板(Cat #4513) 均可從艾美捷購(gòu)買(mǎi)~ |
| 讀板器 | 需要能檢測(cè)熒光偏振或者TR-FRET的讀板器 |
| 移液器 | 使用液體處理設(shè)備,可以精確分配亞微升體積到384孔板。 |
| 超純水 | 一些去離子水系統(tǒng)被核酸酶污染,核酸酶可以降解核苷酸底物和產(chǎn)物,降低了檢測(cè)性能。小心處理和使用超純水可以消除這個(gè)潛在的問(wèn)題 |
相關(guān)產(chǎn)品推薦:
| 類(lèi)別 | 貨號(hào) | 名稱(chēng) | 規(guī)格 |
| 熒光偏振法的試劑盒 | 3024-1K | Transcreener cGAMP cGAS FP Assay (1,000 Assay, 384 Well) | 1000 Assay |
| 3024-10K | Transcreener cGAMP cGAS FP Assay (10,000 Assay, 384 Well) | 10000 Assay | |
| 3024-100K | Transcreener cGAMP cGAS FP Assay (10 X 10,000 Assay, 384 Well) | 10X10000 Assay | |
| TR-FRET法的試劑盒 | 3025-1K | Transcreener cGAMP cGAS TR-FRET Assay (1,000 Assay, 384 Well) | 1000 Assay |
| 3025-10K | Transcreener cGAMP cGAS TR-FRET Assay (10,000 Assay, 384 Well) | 10000 Assay | |
| 3025-100K | Transcreener cGAMP cGAS TR-FRET Assay (10 X 10,000 Assay, 384 Well) | 10X10000 Assay | |
| cGAS酶 | 2227 | Recombinant cGAS Enzyme, Active, Human, Full-Length, 10 ?g | 10 ?g |
| 2228 | Recombinant cGAS Enzyme, Active, Human,?Full-Length,?100 ?g | 100 ?g | |
| cGAS酶+試劑盒 | 3024-1K-B | Includes Transcreener cGAS FP Assay 1K Kit and 20 ?g Human cGAS Enzyme | 1000 Assay+20 ?g |
| 3024-10K-B | Includes Transcreener cGAS FP Assay 10K Kit and 200 ?g Human cGAS Enzyme | 10000 assay+200 ?g | |
| 3025-1K-B | Includes Transcreener cGAS TR-FRET Assay 1K Kit and 20 ?g Human cGAS Enzyme | 1000 Assay+20 ?g | |
| 3025-10K-B | Includes Transcreener cGAS TR-FRET Assay 10K Kit and 200 ?g Human cGAS Enzyme | 10000 assay+200 ?g | |
| 3024-1K-B | Includes Transcreener cGAS FP Assay 1K Kit and 20 ?g Human cGAS Enzyme | 1000 Assay+20 ?g | |
| 黑色板子 | 2233 | Corning 96-Well Black Assay Plates (#3686), 3-Pack (200+ Assays) | 3-Pack |
| 2229 | Corning 384-Well Black Assay Plates (#4514), 3-Pack (1,000+ Assays) | 3-Pack | |
| 2230 | Corning 384-Well Black Assay Plates (#4514), 30-Pack (10,000+ Assays) | 30-Pack | |
| 白色板子 | 2234 | Corning 96-Well White Assay Plates (#3642), 3-Pack (200+ Assays) | 3-Pack |
| 2231 | Corning 384-Well White Assay Plates (#4513), 3-Pack (1,000+ Assays) | 3-Pack | |
| 2232 | Corning 384-Well White Assay Plates (#4513), 30-Pack (10,000+ Assays) | 30-Pack |
Note:以上產(chǎn)品僅用于科研,不能用于醫(yī)療及診斷~
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