一種用于檢測(cè)生物素和FITC標(biāo)記的分析物（蛋白質(zhì)、基因擴(kuò)增產(chǎn)物）的通用側(cè)流式檢測(cè)條 

REF: MGHD 1 

規(guī)格：100 Texts

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一、符號(hào)解釋

二、警告和注意事項(xiàng) 

1.所有試劑應(yīng)在原始容器中存放在2-8℃的環(huán)境中。

2.使用前，將所有試劑恢復(fù)至室溫（18-28 ℃）。

3.必須遵守所有組分的有效期限。

4.保護(hù)檢測(cè)條免受濕氣影響；容器必須始終密封。 

5.只接觸和標(biāo)記檢測(cè)條的箔紙覆蓋區(qū)域（標(biāo)記區(qū)域）。

6.廢棄物的處理必須按照當(dāng)?shù)氐姆ㄒ?guī)進(jìn)行。

7.檢測(cè)緩沖液含有抗微生物試劑，因此避免與皮膚和/或黏膜接觸。 

8.適用于專業(yè)用戶。   

三、預(yù)期用途 

HybriDetect是一種通用的側(cè)流式檢測(cè)條，用于檢測(cè)標(biāo)記有FITC和生物素的分析物（蛋白質(zhì)、基因擴(kuò)增產(chǎn)物）。它是一個(gè)開(kāi)發(fā)平臺(tái)。

該測(cè)試僅供研究使用，不用于診斷目的。  

四、提供的材料、儲(chǔ)存和穩(wěn)定性

可根據(jù)要求或從公司網(wǎng)站：www.milenia-biotec.de 獲取材料安全數(shù)據(jù)表（MSDS）。

五、所需材料（不包括在內(nèi)） 

1、移液管 

2、移液管尖（含有PCR的保護(hù)性過(guò)濾器） 

3、反應(yīng)管或96孔微孔板   

六、必要的開(kāi)發(fā)工作-開(kāi)發(fā)平臺(tái) 

開(kāi)發(fā)一個(gè)含有兩種不同標(biāo)記的探針用于分析物的溶液。

以下條件是必要的： 

探針必須標(biāo)記有：FITC（異硫氰酸熒光素）；生物素 

在檢測(cè)過(guò)程中，使用約100微升的液體（樣品和特定于分析物的溶液）。 

所提供的檢測(cè)緩沖液（MGCB）可以用作該特定于分析物的溶液的基礎(chǔ)緩沖液。 

使用示例： 

20微升樣品和80微升特定于分析物的溶液，孵育時(shí)間為5分鐘。 

注意：

1、體積、特定于分析物的溶液和孵育時(shí)間是個(gè)體測(cè)試開(kāi)發(fā)的一部分。

2、檢測(cè)基因擴(kuò)增子的基本步驟在第7頁(yè)解釋：“檢測(cè)性能PCR產(chǎn)物”。擴(kuò)增產(chǎn)物應(yīng)該被生物素化，特異性雜交探針應(yīng)該標(biāo)記有FITC。原則上，所有擴(kuò)增程序（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)或等溫?cái)U(kuò)增，如LAMP或RPA）都可以使用。  

七、方法： 

Milenia HybriDetect是一種即用型的通用測(cè)試條（側(cè)流式試紙），基于使用金顆粒的側(cè)流技術(shù)。該試紙旨在開(kāi)發(fā)用于多種分析物（如蛋白質(zhì)、抗體或基因擴(kuò)增產(chǎn)物）的定性或半定量快速測(cè)試系統(tǒng)。用戶需要開(kāi)發(fā)一種特定于分析物的溶液，其中包含用FITC標(biāo)記的第一種探針（例如抗體、抗原、特異性探針）和用生物素標(biāo)記的第二種探針（例如抗體、引物）（請(qǐng)參閱第5頁(yè)的“常見(jiàn)測(cè)試原理”）。 

待測(cè)樣品與開(kāi)發(fā)的特定于分析物的溶液混合后，將試紙浸入溶液中。 標(biāo)記有FITC和生物素的結(jié)合分析物首先與試紙的樣品應(yīng)用區(qū)域中標(biāo)記有金的FITC特異性抗體結(jié)合。金復(fù)合物在毛細(xì)作用力的驅(qū)動(dòng)下通過(guò)膜傳播。只有捕獲的分析物金顆粒在通過(guò)固定化的生物素配體分子的線時(shí)結(jié)合，并隨時(shí)間形成紅藍(lán)色帶狀。 

未結(jié)合的金顆粒遷移到控制線上，并被物種特異性抗體捕獲。隨著孵育時(shí)間的延長(zhǎng)，會(huì)形成一條顏色濃烈的控制帶。   

八、常見(jiàn)測(cè)試原理

控制帶試紙（Control Band Dipstick） 

無(wú)論如何，控制帶必須可見(jiàn)！

它是一個(gè)控制功能，不能用來(lái)評(píng)估測(cè)試帶結(jié)果的質(zhì)量。如果孵育期后控制帶 

不可見(jiàn)，結(jié)果無(wú)效！必須使用新的試紙重復(fù)測(cè)試！   

九、結(jié)果判讀 

有兩種解讀Milenia HybriDetect試紙結(jié)果的方式： 

1）通過(guò)目視解讀進(jìn)行定性解讀

2）半定量，例如通過(guò)評(píng)估卡進(jìn)行評(píng)估

十、PCR產(chǎn)物測(cè)定性能

1. 從容器中取出所需數(shù)量的試紙條并標(biāo)記它們。

2. 對(duì)于每個(gè)要分析的樣品，將100uL的HybriDetect測(cè)定緩沖液或個(gè)別開(kāi)發(fā)的緩沖液移液到反應(yīng)管或微孔板孔中。

3. 直接將5-10uL的雜交產(chǎn)物移液到樣品施加區(qū)域，或者選擇性地將5-10uL的雜交產(chǎn)物加入反應(yīng)管/孔的溶液中。

4. 將帶有樣品施加區(qū)域的試紙條放入溶液中，垂直放置，孵育時(shí)間為5-15分鐘。

5. 孵育結(jié)束后，將試紙條從測(cè)定溶液中取出，并立即解讀測(cè)試結(jié)果。

注意：

如果需要更高的分析靈敏度，增加PCR產(chǎn)物的體積可能會(huì)有所幫助。

體積、特定于分析物的溶液和孵育時(shí)間始終是個(gè)別測(cè)試開(kāi)發(fā)的一部分。

十一、解讀“PCR”結(jié)果

重要提示：為了檢查反應(yīng)的特異性，強(qiáng)烈建議引入PCR陰性對(duì)照。   

十二、PCR故障排除

十三、PCR測(cè)定的靈敏度 

Milenia HybriDetect的分析靈敏度相當(dāng)于或高達(dá)乙溴化乙錠染色瓊脂糖凝膠的1,000倍。根據(jù)PCR產(chǎn)物的大小和擴(kuò)增循環(huán)的數(shù)量，最多可以檢測(cè)到5 pg的DNA。   

十四、文獻(xiàn)參考 

Kiatpathomchai W, et al, J Virol Methods (2008); 153: 214-217 

Puthawibool T, et al, J Virol Methods (2009); 156 (1-2): 27-31

Jaroenram W, et al, Mol Cell Probes (2009); 23 (2): 65-70 

Nimitphak T, et al, Mol Cell Probes (2009); 24 (1): 1-5 

Kikuchi T, et al, Nematology (2009) ; 99 (12): 1365-1369 

Piepenburg O, et al, PloS Biology 2006, Volume 4, Issue 7, e204   

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