介紹

HIV-1（人類免疫缺陷病毒-1）是一種病毒，屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒家族。它是導(dǎo)致艾滋病的主要病原體之一。HIV-1感染會(huì)攻擊人體的免疫系統(tǒng)，特別是CD4+ T淋巴細(xì)胞，削弱機(jī)體對(duì)各種感染和疾病的抵抗力。隨著疾病的進(jìn)展，免疫系統(tǒng)逐漸受損，最終導(dǎo)致艾滋病的發(fā)展和并發(fā)癥的出現(xiàn)。 

基于人類免疫缺陷病毒-1（HIV-1）的慢病毒載體已成為基因轉(zhuǎn)移研究中具有潛力的載體。慢病毒載體的優(yōu)勢(shì)特點(diǎn)是能夠?qū)⒒蜣D(zhuǎn)移和整合到有分裂和無分裂能力的細(xì)胞中。假型包膜與溶瘤性口炎病毒包膜G（VSV-G）蛋白結(jié)合，擴(kuò)大了目標(biāo)細(xì)胞范圍。已經(jīng)證明，慢病毒載體能夠?qū)⒒蜻f送到神經(jīng)元、淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等細(xì)胞類型，而此前的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體無法使用。慢病毒載體在體內(nèi)也被證明能夠有效遞導(dǎo)腦、肝臟、肌肉和視網(wǎng)膜，而不引起毒性或免疫反應(yīng)。最近，慢病毒系統(tǒng)被廣泛應(yīng)用于在體外和體內(nèi)高效地將siRNA整合到各種細(xì)胞系和原代細(xì)胞中。  

背景

慢病毒顆粒是通過293T細(xì)胞的瞬時(shí)轉(zhuǎn)染3或4個(gè)編碼病毒組分的質(zhì)粒制備的。在48-72小時(shí)內(nèi)收集包裝細(xì)胞產(chǎn)生的病毒培養(yǎng)基中的病毒顆粒。為了確保假病毒培養(yǎng)基是活性的，并控制每個(gè)目標(biāo)細(xì)胞中整合的病毒構(gòu)建物的拷貝數(shù)，需要在進(jìn)行遞導(dǎo)實(shí)驗(yàn)之前確定病毒滴度。病毒滴度可以通過對(duì)HT-1080或Hela細(xì)胞進(jìn)行遞導(dǎo)，然后進(jìn)行穩(wěn)定克隆的抗生素篩選來確定。然而，生成可觀察的穩(wěn)定細(xì)胞克隆以進(jìn)行計(jì)數(shù)和計(jì)算滴度結(jié)果需要幾周的時(shí)間。 

HIV p24 ELISA也已被用于測(cè)定慢病毒樣品的滴度，但它能檢測(cè)到在瞬時(shí)轉(zhuǎn)染過程中由293T細(xì)胞產(chǎn)生的慢病毒相關(guān)p24和游離p24。因此，總p24水平（慢病毒p24和游離p24）不能用于精確確定慢病毒上清樣品中的病毒顆粒。為了精準(zhǔn)便捷的進(jìn)行慢病毒檢測(cè)，Cell Biolabs研發(fā)了QuickTiter?慢病毒滴度試劑盒（慢病毒相關(guān)HIV p24），為病毒上清和純化病毒的快速滴度定量提供了高效的系統(tǒng)。

原理：

Cell Biolabs的QuickTiter?慢病毒滴度試劑盒（慢病毒相關(guān)HIV p24）是一種酶免疫測(cè)定方法，用于檢測(cè)和定量慢病毒相關(guān)的HIV-1 p24核心蛋白（見下面的測(cè)定原理）。在與ViraBind?慢病毒試劑（專利技術(shù)）形成復(fù)合物時(shí)，游離p24保留在上清中，慢病毒相關(guān)的p24的數(shù)量通過HIV p24 ELISA測(cè)量。該試劑盒的檢測(cè)靈敏度限制為1 ng/mL HIV p24，或約10,000到100,000 TU/mL VSVG假型包膜慢病毒樣品。每個(gè)試劑盒提供足夠的試劑進(jìn)行高達(dá)96次的測(cè)定，包括標(biāo)準(zhǔn)曲線和慢病毒樣品。

結(jié)果示例：

以下圖表展示了典型的QuickTiter? 慢病毒滴度試劑盒（慢病毒相關(guān)的HIV p24）結(jié)果。這些數(shù)據(jù)僅供參考，不應(yīng)用于解讀實(shí)際結(jié)果。

圖1：HIV p24 ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖2：游離p24不與ViraBind?形成復(fù)合物。將在培養(yǎng)基中稀釋的重組p24與ViraBind?慢病毒試劑處理。通過p24 ELISA測(cè)量上清液和沉淀中的p24含量，具體步驟請(qǐng)參考實(shí)驗(yàn)步驟。  

圖3：GFP慢病毒上清的病毒相關(guān)p24滴度。將GFP慢病毒構(gòu)建物與包裝混合物共轉(zhuǎn)染到293LTV細(xì)胞中（目錄號(hào)：LTV-100）。轉(zhuǎn)染后48小時(shí)收集培養(yǎng)上清液。HEK293細(xì)胞感染GFP慢病毒樣品3天后顯示GFP表達(dá)（A：GFP慢病毒上清液；B：ViraBind?沉淀物）。通過ViraBind?慢病毒試劑分離游離p24和病毒相關(guān)p24。p24水平的測(cè)定方法請(qǐng)參考實(shí)驗(yàn)說明。   

相關(guān)引用文章：

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