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眾所周知,細(xì)胞內(nèi)的pH和和各類離子濃度對(duì)細(xì)胞的內(nèi)環(huán)境及生理作用起著非常重要的作用,是很多生物學(xué)研究的標(biāo)志因子,是細(xì)胞內(nèi)的一個(gè)重要信號(hào)分子,為了研究這些分子在細(xì)胞活動(dòng)中的調(diào)節(jié)作用,必須定量監(jiān)測(cè)其濃度。以鈣離子為例,最廣泛使用的Ca2+檢測(cè)方法是使用熒光Ca2+指示劑,這是由Roger Tsier救授及其同事首創(chuàng)的一種技術(shù)。離子熒光指示劑是與BAPTA鈣離子整合劑相偶聯(lián)的 熒光團(tuán)。它們?cè)贑a2+解離常數(shù)(Kd)或Ca2+響應(yīng)范圍、激發(fā)/發(fā)射波長、光譜偏移和相對(duì)熒光量子產(chǎn)率方面存在差異。因此,在造擇最適合的Ca2+指示劑時(shí),應(yīng)該考慮到實(shí)驗(yàn)的生物系統(tǒng)、儀器設(shè)置和同時(shí)使用的其他熒光探針。在檢測(cè)Ca2+濃度范圍時(shí),Kd值可以提供一個(gè)估值,通常為0.1Kd至10Kd。然而需要注意的是。體外測(cè)定的Kd值與細(xì)胞內(nèi)的Kd值有很大差異,這是由于細(xì)胞內(nèi)離子強(qiáng)度、pH、溶質(zhì)粘度和脂質(zhì)、蛋白組成的Ca2+緩沖液與體外不同。

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