當(dāng)借助醫(yī)學(xué)檢測(cè)來(lái)檢查我們的健康狀況時(shí)，我們可能得不到一個(gè)準(zhǔn)確的答案。 

醫(yī)學(xué)檢測(cè)中所用的各種指標(biāo)很難說(shuō)清楚我們當(dāng)時(shí)到底是健康還是不健康。   

幸運(yùn)的是，世界各地的科研人員正努力為癌癥患者的健康狀況提供更準(zhǔn)確的答案。  

癌癥基因檢測(cè)技術(shù)大牛 Alex Rolland （Cancer Treatment Options and Management Inc. 和 Liquid Biopsy Labs 的聯(lián)合創(chuàng)始人兼首席科學(xué)家） 和他的團(tuán)隊(duì)專(zhuān)攻解答腫瘤治療的檢測(cè)技術(shù)問(wèn)題。例如：這種癌癥治療的效果如何？病人是否處于緩解期？等等。  

請(qǐng)閱讀下面 Alex Rolland 的成功故事，他們團(tuán)隊(duì)的研究成果為改善癌癥治療方案并為癌癥治療的未來(lái)帶來(lái)了新希望。   

為什么我選擇 Norgen Biotek 的產(chǎn)品

大家好，我叫 Alex Rolland。 我是 Cancer Treatment Options and Management Inc. (CTOAM) 和 Liquid Biopsy Labs 的聯(lián)合創(chuàng)始人兼首席科學(xué)家。    

我在2019年初首次聽(tīng)說(shuō)了 Norgen Biotek 。當(dāng)時(shí)我正在為我們的 digital PCR 血液活檢實(shí)驗(yàn)室尋找可靠的試劑盒來(lái)提純 ct-DNA (circulating tumor DNA，循環(huán)腫瘤 DNA) 。在此之前，我們測(cè)試了許多不同品牌的試劑盒，但都沒(méi)有成功。原因是用這些試劑盒提純出來(lái)的外泌體，無(wú)法用我們的Taqman-ddPCR  (Taqman熒光微滴數(shù)據(jù)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)) 技術(shù)檢測(cè)出來(lái)。

我喜歡 Norgen 的試劑盒，因?yàn)樗麄兊脑噭┖谢陔x心技術(shù)，易于操作。首先，通過(guò)Norgen的微型試劑盒（Micro Kit）我們獲得了少量 ct-DNA，這些 ct-DNA 可以用我們的 Taqman-ddPCR 檢測(cè)出來(lái)。因此我打電話(huà)給Norgen Biotek并與一位高級(jí)科學(xué)家進(jìn)行了交談，他告訴我 Norgen 正在研究一種使用兩個(gè)不同尺寸色譜柱的新方案，并問(wèn)我愿不愿意試一試。     

我想試一試。因?yàn)镹orgen 是唯一一家能給我們帶來(lái)預(yù)期結(jié)果的公司。不僅如此，另一個(gè)讓我們一直在使用Norgen試劑盒的原因是：某家大公司的 ct-DNA 保存管只能讓我們從兩個(gè)試管中獲得 2-4 mL 的血漿/血清，但是Norgen 的 cf-DNA/cf-RNA 保存管 (Cat. 63950) 讓我們能夠從 2 個(gè)試管中獲得多達(dá) 7-10 mL 的血漿/血清。結(jié)果令人驚嘆！這大大增加了我們可分離血漿/血清的體積，讓我們能夠順利完成接下來(lái)的測(cè)試。  

我們隨后測(cè)試了 Norgen 的血漿/血清無(wú)細(xì)胞循環(huán) DNA 純化中型試劑盒 (Cat. 55600) 和血漿/血清外泌體純化和 RNA 分離中型試劑盒 (Cat. 58500), 兩者的測(cè)試結(jié)果都非常好。簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)，這項(xiàng)測(cè)試是從攜帶突變癌癥基因的癌癥患者身上采集的血液，使用 Norgen 中型試劑盒監(jiān)測(cè)他們的治療反應(yīng)。重要的是當(dāng)我們使用Norgen的試劑盒進(jìn)行監(jiān)測(cè)時(shí)，我們只希望尋找與活躍的腫瘤細(xì)胞相關(guān)的 ct-DNA (即從外泌體/外泌體附著等釋放的DNA), 并且希望排除來(lái)自細(xì)胞凋亡或細(xì)胞死亡的 DNA。    

我們發(fā)現(xiàn)活躍的腫瘤細(xì)胞相關(guān)的 ct-DNA 主要對(duì)應(yīng)著 146 bp及以下的 DNA 片段，但是超過(guò)146 bp的DNA片段通常與垂死的腫瘤/細(xì)胞凋亡/細(xì)胞裂解有關(guān)。Norgen的提取試劑盒專(zhuān)注于 ct-DNA 的小片段DNA，讓我們能夠?qū)Ｗ⒂诨钴S腫瘤細(xì)胞的 ct-DNA，這一點(diǎn)對(duì)癌癥檢測(cè)來(lái)說(shuō)非常重要。  

總結(jié)一下我們所認(rèn)為 Norgen 產(chǎn)品的優(yōu)勢(shì)：

(1) Norgen的采血管可以提供更多體積的血漿/血清。

(2) Norgen的試劑盒可以提取更高產(chǎn)量的活躍腫瘤細(xì)胞的外泌體 ct-DNA。  

我們得到的ct-DNA結(jié)果案例：

迄今為止，我們已經(jīng)創(chuàng)建了 100 多種定制 TaqMan 探針，通過(guò)癌基因突變、抑癌基因和意義不明的變異 (即VUS) 中的突變來(lái)監(jiān)測(cè)癌癥患者。 

案例一：

在 PRKDC（腫瘤抑制基因）中攜帶 VUS 的 CRC 患者。我們?cè)诨颊叩哪[瘤 DNA 測(cè)序結(jié)果中發(fā)現(xiàn)了VUS，通過(guò)進(jìn)行計(jì)算機(jī)分析和序列保守分析，表明這種特異的VUS很可能是致病的。事實(shí)上，我們隨后用該VUS來(lái)檢測(cè)該患者的早期復(fù)發(fā)和治療的效果。    

圖 1：從患者全血中獲得的 PRKDC A358T 外泌體 DNA 的量。 誤差線(xiàn)表示 95% 的置信區(qū)間 (CI) 

案例二：

該患者患有晚期乳腺癌，我們的測(cè)序結(jié)果鑒定出了 PIK3CA 突變。 在治療過(guò)程中，醫(yī)生為患者使用了Alpelisib（一種用于治療特定類(lèi)型乳腺癌的藥物）。我們通過(guò)ct-DNA監(jiān)測(cè)了患者的反應(yīng)，在使用Alpelisib治療之前，患者全血內(nèi)的外泌體含量很高 (May 27/20)。通過(guò)Alpelisid的治療之后，患者的外泌體量有了極大的減少 (Aug. 05/20)。 不幸的是，案例中的患者只能在短時(shí)間內(nèi)忍受這種藥物，之后不得不停藥。如圖所示，在停藥治療以后 (Sept. 13/20)  ct-DNA立刻增加。這表明患者全血中的外泌體量可以用于監(jiān)測(cè)治療效果。   

圖 2：從患者的全血中獲得 PIK3CA P1047L 外泌體 DNA, 誤差線(xiàn)表示 95% 的置信區(qū)間 (CI) 

案例三:

在這個(gè)案例中，一名肺癌女性患者被認(rèn)為在接受免疫治療時(shí)病情有所惡化。 患者的醫(yī)生告訴她由于腫瘤細(xì)胞數(shù)量的增加他們將停止她的免疫治療，她別無(wú)選擇。然而，如果僅僅通過(guò)放射成像的腫瘤檢測(cè)技術(shù)，大約 30% 的免疫治療患者會(huì)出現(xiàn)假性進(jìn)展，因?yàn)槟[瘤內(nèi)免疫細(xì)胞的快速增加會(huì)導(dǎo)致可見(jiàn)腫瘤的變大和腫瘤細(xì)胞數(shù)量的增加。這種情況并不能依靠傳統(tǒng)的成像診斷（CT、MRI等）檢測(cè)出來(lái)。因?yàn)榧词惯@些腫瘤是壞死的 (由于免疫細(xì)胞的SUV增加), 在 PET-CT 上這些腫瘤細(xì)胞的成像信號(hào)還是很強(qiáng)。 但是通過(guò)使用 ct-DNA 來(lái)進(jìn)行診斷，我們能夠向腫瘤學(xué)家證明該患者確實(shí)正在經(jīng)歷假性進(jìn)展，患者應(yīng)該繼續(xù)接受治療，并繼續(xù)從治療中獲益。 在這個(gè)案例中，我們可以看出，基于ct-DNA的診斷結(jié)論與成像診斷結(jié)論相反。    

圖3：從患者全血中獲得的KRAS G12D外泌體DNA的數(shù)量，誤差線(xiàn)表示95%的置信區(qū)間（CI）   

案例四：

在這個(gè)案例中，患者化療效果不錯(cuò)。但在后續(xù)的免疫治療中，ct-DNA顯示出明顯的增加，表明免疫治療沒(méi)有效果。這一實(shí)時(shí)數(shù)據(jù)使醫(yī)生能夠及時(shí)調(diào)整治療計(jì)劃。   

圖4：從患者全血中獲得的KRAS G12D外泌體DNA的數(shù)量，誤差線(xiàn)表示95%的置信區(qū)間（CI） 

Norgen Biotek 的幫助：從血樣采集，到生物分子提純，到高通量測(cè)序

最近，Norgen與我們一起進(jìn)行基于RNA seq的基因表達(dá)研究。通過(guò)分離血液的外泌體并且提純外泌體RNA，我們可以獲得高濃度的RNA來(lái)進(jìn)行我們獨(dú)特的外泌體RNA癌癥基因表達(dá)研究。RNA 基因表達(dá)研究發(fā)現(xiàn)，我們能夠從緩解期和復(fù)發(fā)期癌癥患者的腫瘤相關(guān)外泌體中獲得2萬(wàn)個(gè)基因的表達(dá)信息。令人興奮的是，當(dāng)我們對(duì)沒(méi)有癌癥的健康參與者使用這種方法時(shí)，我們無(wú)法獲得足夠數(shù)量的測(cè)序讀數(shù)！這更加表明了Norgen的外泌體試劑盒是特異性針對(duì)于活躍腫瘤細(xì)胞的。  

我們的測(cè)試結(jié)果

通過(guò)我們的研究，我們開(kāi)發(fā)了一個(gè)只在活躍癌癥細(xì)胞中存在的轉(zhuǎn)錄RNA和基因的檢測(cè)面板。為了準(zhǔn)確起見(jiàn)，我們?cè)谝粋€(gè)大型的正常組織面板上進(jìn)行了大量投資，并使用完全相同的技術(shù)來(lái)獲得正常組織的表達(dá)譜。通過(guò)比較從腫瘤外泌體RNA獲得的RNA表達(dá)譜和正常組織譜，我們可以：   

(1) 識(shí)別出癌癥確診前的早期癌癥活動(dòng)。  

(2) 識(shí)別癌癥患者處于緩解期還是早期復(fù)發(fā)時(shí)期。   

(3) 識(shí)別癌癥患者對(duì)治療是否有反應(yīng)。  

(4) 識(shí)別癌癥中 "當(dāng)前 "驅(qū)動(dòng)基因的全身表達(dá)。    

(5) 確定癌癥發(fā)展的潛在驅(qū)動(dòng)因素 – 例如，如果一個(gè)高表達(dá)的基因相對(duì)于特定的身體組織過(guò)度表達(dá)，能讓我們確定靶向藥物的特定組織效益。換句話(huà)說(shuō)，如果基因X在外泌體中相對(duì)于正常的肝臟和肺部有過(guò)度表達(dá)，但相對(duì)于正常的骨骼水平卻沒(méi)有，那么這種靶向藥物可能對(duì)這些器官有益，但對(duì)骨骼卻無(wú)益。   

(6) 這項(xiàng)測(cè)試讓我們能夠確定在腫瘤DNA測(cè)序中發(fā)現(xiàn)的VUS是否參與了癌癥（基于表達(dá)水平）。  

對(duì)我們團(tuán)隊(duì)來(lái)說(shuō)病人是最重要的。我們的腫瘤外泌體研究有可能讓那些原本被提供錯(cuò)誤治療、被迫停止有益治療、或者無(wú)法獲得迫切需要的癌癥治療藥物的癌癥患者們獲得正確、有效的治療，延長(zhǎng)生存時(shí)間，并且提高生活質(zhì)量。這些檢測(cè)工具為我們的工作提供了一個(gè)關(guān)鍵機(jī)制，讓我們能夠給世界各地的癌癥患者帶來(lái)福音。   

如果沒(méi)有 Norgen，這一切都不可能實(shí)現(xiàn)！

癌癥診斷的未來(lái)

像 Alex Rolland 和他的團(tuán)隊(duì)這樣的科學(xué)家正在為腫瘤學(xué)的研究推波助瀾，Norgen Biotek 很榮幸能對(duì)此研究過(guò)程有所幫助。 通過(guò)提供更精確的檢測(cè)、更準(zhǔn)確的治療，我們希望這項(xiàng)研究能有助于降低癌癥相關(guān)死亡率。   

感謝 Alex Rolland 和 CTOAM Inc. 團(tuán)隊(duì)的奉獻(xiàn)精神和辛勤工作。  

了解更多有關(guān)Norgen Biotek產(chǎn)品的信息，請(qǐng)點(diǎn)擊下面的鏈接：

• 血漿/血漿無(wú)細(xì)胞循環(huán)DNA純化中提試劑盒（提取試劑盒）

http://m.zihai029.com/products/NGB-55600.shtml

• 血漿/血漿無(wú)細(xì)胞循環(huán)RNA純化中提試劑盒（提取試劑盒）

http://m.zihai029.com/products/NGB-58500.shtml

• cf-DNA/cf-RNA保存管 （50）

http://m.zihai029.com/products/NGB-63950.shtml  

作為Norgen Biotek在中國(guó)的獨(dú)家代理，艾美捷科技有限公司將為中國(guó)客戶(hù)提供最全面的Norgen Biotek產(chǎn)品，更具價(jià)格優(yōu)勢(shì)，更高性?xún)r(jià)比的選擇，和更快的到貨時(shí)間。  

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