煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）和煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP+）是細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的兩種重要輔因子。NADH是NAD+的還原形式，NAD+是NADH的氧化形式。它通過(guò)酯鍵在腺苷酸的2'位添加磷酸基團(tuán)形成NADP。NADP用于合成代謝生物反應(yīng)，如脂肪酸和核酸合成，這些反應(yīng)需要NADPH作為還原劑。傳統(tǒng)的NAD/NADH和NADP/NADPH測(cè)定是通過(guò)監(jiān)測(cè)340 nm處的NADH或NADPH吸收來(lái)完成的。這種方法靈敏度低，干擾大，因?yàn)樵摐y(cè)定是在紫外范圍內(nèi)進(jìn)行的，需要昂貴的石英微孔板。AAT Bioquest的Amplite?NADP/NADPH比值檢測(cè)試劑盒為靈敏檢測(cè)NADP、NADPH及其比值提供了一種方便的方法。系統(tǒng)中的酶在酶循環(huán)反應(yīng)中特異性識(shí)別NAD/NADH。無(wú)需從樣品混合物中純化NADP/NADPH。酶循環(huán)反應(yīng)顯著提高了檢測(cè)靈敏度。此外，該測(cè)定的背景非常低，因?yàn)樗诩t色可見光范圍內(nèi)運(yùn)行，大大減少了生物樣本的干擾。該檢測(cè)方法具有高靈敏度和低干擾性。Amplite熒光NADP/NADPH檢測(cè)試劑盒可采用方便的96孔或384孔微量滴定板形式進(jìn)行，易于自動(dòng)化，無(wú)需分離步驟。

圖：Syn、Syn/PFP、沼澤紅蜘蛛和沼澤紅蜘蛛/PFP的NADPH/NADP+和ATP含量。使用Amplite熒光分析試劑盒15264發(fā)現(xiàn)NADP+/NADPH比值。來(lái)源：溫宇等，《科學(xué)進(jìn)展》第9卷（11）：eadf6772。2023年3月。

艾美捷AAT Bioquest-熒光法NADP/NADPH比率檢測(cè)試劑盒,紅色熒光：

貨號(hào) 15264

單位尺寸 250次測(cè)試

預(yù)期用途 僅用于研究（RUO）

風(fēng)險(xiǎn)短語(yǔ) R20, R21, R22

UNSPSC 12352200

吸光度 576 ± 5 nm

推薦板 透明底部

激發(fā) 540 nm

發(fā)射 590 nm

截止 570 nm

推薦板 實(shí)心黑色

組分A：NADP/NADPH循環(huán)酶混合物

2瓶（凍干粉）

組分B：NADPH傳感器緩沖液

1瓶（20 mL）

組分C：NADPH標(biāo)準(zhǔn)品

1瓶（167 ?g）

組分D：NADPH提取溶液

1瓶（10 mL）

組分E：NADP提取溶液

1瓶（10 mL）

組分F：NADP/NADPH對(duì)照溶液

1瓶（10 mL）

組分G：NADP/NADPH裂解緩沖液

1瓶（10 mL）

方案概要：

準(zhǔn)備25 ?L的NADPH標(biāo)準(zhǔn)品和/或待測(cè)樣品

加入25 ?L的NADPH或NADP提取溶液

在37°C下孵化15分鐘

加入25 ?L的NADP或NADPH提取溶液

加入75 ?L的NADP/NADPH工作溶液

在37°C下孵化15分鐘至2小時(shí)

在激發(fā)/發(fā)射=540/590 nm（截止=570 nm）監(jiān)測(cè)熒光強(qiáng)度

重要說(shuō)明：

強(qiáng)烈建議與裂解緩沖液（組分G）一起在37°C下孵化細(xì)胞，并使用上清液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

在實(shí)驗(yàn)開始前，在室溫下解凍每個(gè)試劑盒組分的一個(gè)。

庫(kù)存溶液的準(zhǔn)備：

除非另有說(shuō)明，所有未使用的庫(kù)存溶液應(yīng)在制備后分成單次使用的小份，并儲(chǔ)存在-20°C。避免反復(fù)凍融。

NADPH標(biāo)準(zhǔn)溶液（1 mM）

將200 ?L的PBS緩沖液加入NADPH標(biāo)準(zhǔn)品（組分C）的小瓶中，制成1 mM（1 nmol/?L）的NADPH標(biāo)準(zhǔn)溶液。

工作溶液的準(zhǔn)備

將10 mL的NADPH傳感器緩沖液（組分B）加入NADP/NADPH循環(huán)酶混合物（組分A）的瓶中，并充分混合，制成NADP/NADPH工作溶液。

注意       這種NADP/NADPH工作溶液足夠在96孔板中進(jìn)行125次測(cè)定。

文獻(xiàn)參考：

Synergistic and stepwise treatment of resveratrol and catechol in Haematococcus pluvialis for the overproduction of biomass and astaxanthin

Authors: Qiu, Jia-Fan and Yang, Yu-Cheng and Li, Ruo-Yu and Jiao, Yu-Hu and Mou, Jin-Hua and Yang, Wei-Dong and Lin, Carol Sze Ki and Li, Hong-Ye and Wang, Xiang

Journal: Biotechnology for Biofuels and Bioproducts (2024): 80

The Function of HDAC6 Mediated Prx2 Acetylation in Neuronal Apoptosis Related Alzheimer's disease

Authors: Zhang, Lijie and Hu, Jinxia and Zhang, Tao and Gao, Huimin and Wu, Xingrui and Zhang, Conghui and Zhang, Cheng and Chen, Hao and Yang, Minggang and Cao, Xichuan and others,

Journal: (2024)

Solar-powered multi-organism symbiont mimic system for beyond natural synthesis of polypeptides from CO2 and N2

Authors: Yu, Wen and Zeng, Yue and Wang, Zenghao and Xia, Shengpeng and Yang, Zhiwen and Chen, Weijian and Huang, Yiming and Lv, Fengting and Bai, Haotian and Wang, Shu

Journal: Science Advances (2023): eadf6772

The Linkage of Yeast Metabolites, Produced Under Hyperosmotic Stress, to Cellular Cofactor Systems During Icewine Fermentation.

Authors: Allie, Robert

Journal: (2022)

The combined effect of nitrogen deprivation and overexpression of malic enzyme gene on growth and lipid accumulation in Phaeodactylum tricornutum

Authors: Zhang, Ruihao and Zhu, Baohua and Tu, Changchao and Li, Yun and Zhao, Yan and Pan, Kehou

Journal: Journal of Applied Phycology (2021): 1--9

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