以兔為宿主制備的針對含有單甲基化賴氨酸27（H3K27me1）的組蛋白H3的多克隆抗體，使用KLH偶聯(lián)的合成肽作為免疫原。

作為BPS Bioscience在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強烈推薦BPS Bioscience熱銷產(chǎn)品Anti-H3K27me1多克隆抗體。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

Anti-H3K27me1多克隆抗體：

克隆性：多克隆

宿主物種/表達系統(tǒng)：兔

純化方法：親和純化

形式：水溶液

配方：含有0.05%疊氮化物和0.05% ProClin 300的PBS緩沖液

濃度：50 ?g/26 ?l

免疫原：合成肽

儲存/穩(wěn)定性

在-80°C下可保存長達2年。首次解凍后離心以最大化產(chǎn)品回收。分裝以避免反復凍融。分裝后可在-20°C下保存至少一個月。

應用

ChIP（2 ?g/ChIP）

ELISA（1:100 - 1:500）

點雜交（1:20,000）

Western Blot（1:1000）

免疫熒光（1:1000）

運輸溫度：-20°C或-80°C

物種反應性：人

備注：每次免疫沉淀的抗體最佳用量應由終端用戶確定。建議測試1 - 5 ?g/次。

注意事項：避免反復凍融。

科學分類：抗體

監(jiān)管狀態(tài)：僅限研究使用

染色質(zhì)免疫沉淀（ChIP）實驗結(jié)果

使用針對H3K27me1的抗體（產(chǎn)品編號25240）和優(yōu)化的qPCR引物組合，在人HeLa細胞中進行ChIP實驗。實驗使用了10萬個細胞的剪切染色質(zhì)。抗體用量梯度為1、2、5和10 ?g/次ChIP實驗，并進行了分析。以2 ?g/IP的IgG作為陰性免疫沉淀對照。定量PCR使用了活性基因GAPDH的啟動子區(qū)域引物作為陰性對照，以及其編碼區(qū)引物作為陽性對照。

抗體滴度測定

為了測定抗體滴度，使用針對H3K27me1的抗體（產(chǎn)品編號25240）、粗提血清和流穿液進行ELISA實驗，抗體進行梯度稀釋。使用的抗原是含有目標組蛋白修飾的肽段。通過繪制吸光度與抗體稀釋度的關(guān)系圖，估計純化抗體的滴度為1:32,900。

交叉反應性測試

使用針對H3K27me1的抗體（產(chǎn)品編號25240）進行點雜交分析，測試其與其他修飾的肽段以及組蛋白H3和H4的未修飾序列的交叉反應性。將含有相應組蛋白修飾的肽段（100至0.2 pmol）點在膜上，抗體稀釋度為1:20,000。

Western Blot分析

使用針對H3K27me1的抗體（產(chǎn)品編號25240），對HeLa細胞的組蛋白提取物（15 ?g）進行Western Blot分析。抗體在含有5%脫脂奶粉的TBS-Tween中稀釋1:1000。右側(cè)標記了目標蛋白的位置，左側(cè)顯示了分子量標記（單位：kDa）。

免疫熒光分析

人骨肉瘤（U2OS）細胞用針對H3K27me1的抗體（產(chǎn)品編號25240）和DAPI進行染色。細胞用4%甲醛固定20分鐘，并用含有5%正常山羊血清的PBS/TX-100進行封閉。

圖A：細胞用H3K27me1抗體（左側(cè)）在封閉液中稀釋1:1000進行免疫熒光標記，隨后用與Alexa568偶聯(lián)的抗兔抗體進行二抗標記，或用DAPI（右側(cè)）標記，特異性標記DNA。

圖B、C、D和E：分別在抗體與含有未修飾的H3K27以及單甲基化、雙甲基化和三甲基化H3K27的阻斷肽孵育后，用H3K27me1抗體對細胞進行染色。

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