血管緊張素原（Angiotensinogen）是血管緊張素（Angiotensin）的前體蛋白，可被位于腎臟入球小管旁細(xì)胞（JG細(xì)胞）分泌的腎素（Renin）酶切割，生成血管緊張素I（Angiotensin I）。隨后，血管緊張素I在血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（ACE）的作用下進(jìn)一步被切割，生成血管緊張素II（Angiotensin II）。

在腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)（RAAS）中，血管緊張素II具有全身動(dòng)脈收縮的重要作用，并能刺激腎上腺皮質(zhì)分泌醛固酮（Aldosterone）。醛固酮促進(jìn)體內(nèi)鈉的潴留，從而增加血容量、心輸出量以及外周血管阻力（PVR）。當(dāng)血壓升高后，腎素的分泌會(huì)受到抑制。

過去，常通過檢測血漿腎素活性（PRA）、活性腎素濃度（ARC）或其組合來評估RAAS中腎素的活性，但這些方法未充分考慮體位（如站立或坐位）以及一天內(nèi)不同時(shí)間的變化。根據(jù)Kobori等人的研究，提出通過檢測血液中完整型血管緊張素原（Intact Angiotensinogen）和總血管緊張素原（包括被腎素切割后的Des AI Angiotensinogen）的比值，可以獲得更穩(wěn)定的腎素活性生物標(biāo)志物。

血管緊張素原的檢測在原發(fā)性醛固酮增多癥、新型RAAS抑制劑以及心血管和腎臟血管疾病等研究領(lǐng)域具有重要價(jià)值。

近年來，由嚴(yán)重急性呼吸綜合征冠狀病毒2（SARS-CoV-2）引起的新型冠狀病毒肺炎（COVID-19）與RAAS系統(tǒng)（包括ACE抑制劑和血管緊張素受體拮抗劑ARBs）之間的關(guān)系也已成為全球研究的熱點(diǎn)。

本試劑盒可定量檢測小鼠血清、血漿及細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的總血管緊張素原（包括完整型血管緊張素原和被腎素切割后的Des AI血管緊張素原）。

艾美捷IBL-小鼠總血管緊張素原檢測試劑盒：

貨號：27103-96Well

預(yù)期用途：研究用試劑

檢測方法：酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)ELISA.

標(biāo)記物：辣根過氧化物酶HRP.

適用物種：小鼠

檢測樣本類型：血清、EDTA血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液

※ 根據(jù)樣本類型，可能需要額外添加EIA緩沖液。EIA緩沖液需另行購買，詳情請參考說明書。.

檢測范圍：0.16 - 10 ng/mL

第一步反應(yīng)條件：2 - 8 ℃ 孵育過夜

第二步反應(yīng)條件：2 - 8 ℃ 孵育60分鐘

靈敏度：0.03 ng/mL

特異性：可特異性檢測小鼠血清、EDTA血漿和細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的總血管緊張素原。

儲(chǔ)存條件：2 - 8 ℃

包裝規(guī)格：96孔板 × 1

試劑盒組成：

1. 預(yù)包被板：抗小鼠AGT135.兔IgG親和純化.96孔 × 1

2. 標(biāo)記抗體濃縮液：30×.HRP標(biāo)記抗小鼠AGT405.兔IgG Fab’親和純化 0.4 mL × 1

3. 標(biāo)準(zhǔn)品：重組小鼠血管緊張素原.0.5 mL × 2

4. EIA緩沖液 30 mL × 1

5. 標(biāo)記抗體稀釋液 12 mL × 1

6. 顯色底物：TMB溶液 15 mL × 1

7. 終止液 12 mL × 1

8. 洗滌緩沖液濃縮液 50 mL × 1

檢測原理：

本試劑盒采用固相夾心酶聯(lián)免疫吸附法ELISA.。預(yù)包被板上固定有捕獲抗體，將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品加入孔中進(jìn)行第一步反應(yīng)。反應(yīng)后，加入HRP標(biāo)記的檢測抗體進(jìn)行第二步反應(yīng)。洗滌去除未結(jié)合的抗體后，加入四甲基聯(lián)苯胺TMB.顯色底物，顯色強(qiáng)度與目標(biāo)分子的含量成正比。

檢測步驟：

1.加入空白對照   確定空白對照孔，每孔加入100 uL的“4號 EIA緩沖液”。

2.加入準(zhǔn)備好的樣本和標(biāo)準(zhǔn)品   每孔加入100 uL準(zhǔn)備好的樣本和標(biāo)準(zhǔn)品。

3.蓋上板蓋，進(jìn)行孵育第一步反應(yīng)。

4.洗滌   使用準(zhǔn)備好的洗滌緩沖液洗滌板孔，并徹底去除液體。

5.加入準(zhǔn)備好的標(biāo)記抗體   每孔加入100 uL準(zhǔn)備好的標(biāo)記抗體。

6.蓋上板蓋，進(jìn)行孵育第二步反應(yīng).。

7.洗滌   使用準(zhǔn)備好的洗滌緩沖液徹底洗滌板孔，并完全去除液體。

8.加入“6號 顯色底物 - TMB溶液”   每孔加入100 uL TMB溶液。

9.避光孵育。

10.加入“7號 終止液”   每孔加入100 uL終止液。

11.測定吸光度O.D..   清除板底污垢或水滴，確認(rèn)孔內(nèi)液體表面無氣泡后，以空白對照為基準(zhǔn)，測定標(biāo)準(zhǔn)品和樣本的吸光度。

測定波長：450 nm。如使用雙波長測定：主波長為450 nm，副波長為600～650 nm。

檢測結(jié)果計(jì)算方法：

1. 以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫軸，吸光度O.D..為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。可使用適當(dāng)?shù)幕貧w曲線如雙對數(shù)轉(zhuǎn)換后的二次回歸.擬合各點(diǎn)。

2. 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，讀取待測樣本的吸光度對應(yīng)的濃度值。

3. 將讀取的濃度值乘以樣本的稀釋倍數(shù)，計(jì)算最終濃度。

標(biāo)準(zhǔn)曲線示例及實(shí)測值：

備注1：

根據(jù)樣本類型，可能需要額外添加EIA緩沖液。EIA緩沖液需另行購買。請務(wù)必使用本產(chǎn)品專用的EIA緩沖液。

備注2：**操作注意事項(xiàng)**

每次反應(yīng)后請立即使用洗板機(jī)進(jìn)行洗滌，設(shè)置等待時(shí)間為0秒。

洗滌時(shí)間越長，吸光度O.D..值可能越低。