本試劑盒可定量檢測大鼠血清和血漿樣本中的總血管緊張素原（包括完整型血管緊張素原和被腎素切割后的Des AI血管緊張素原）。

艾美捷IBL-大鼠血管緊張素總原檢測試劑盒：

貨號(hào)：27104-96Well

預(yù)期用途：研究用試劑

檢測方法：酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）

標(biāo)記物：辣根過氧化物酶（HRP）

適用物種：大鼠

檢測樣本類型：血清、EDTA血漿

（※ 根據(jù)樣本類型，可能需要額外添加EIA緩沖液。EIA緩沖液需另行購買，詳情請參考說明書。）

檢測范圍：0.08 - 5 ng/mL

第一步反應(yīng)條件：2 - 8 ℃ 孵育過夜

第二步反應(yīng)條件：2 - 8 ℃ 孵育60分鐘

靈敏度：0.009 ng/mL

特異性：可特異性檢測大鼠血清和EDTA血漿中的總血管緊張素原。

儲(chǔ)存條件：2 - 8 ℃

包裝規(guī)格：96孔板 × 1

備注1：根據(jù)樣本類型，可能需要額外添加EIA緩沖液。EIA緩沖液需另行購買。請務(wù)必使用本產(chǎn)品專用的EIA緩沖液。

備注2：**操作注意事項(xiàng)**

每次反應(yīng)后請立即使用洗板機(jī)進(jìn)行洗滌，設(shè)置等待時(shí)間為0秒。

洗滌時(shí)間越長，吸光度（O.D.）值可能越低。

試劑盒組成：

預(yù)包被板：（抗大鼠AGT（135）兔IgG親和純化）96孔 × 1

標(biāo)記抗體濃縮液：（30×）HRP標(biāo)記抗大鼠AGT（405）兔IgG Fab’親和純化 0.4 mL × 1

標(biāo)準(zhǔn)品：（重組大鼠血管緊張素原）0.5 mL × 2

EIA緩沖液 30 mL × 1

標(biāo)記抗體稀釋液 12 mL × 1

顯色底物：TMB溶液 15 mL × 1

終止液 12 mL × 1

洗滌緩沖液濃縮液 50 mL × 1

檢測原理：

該試劑盒為固相夾心ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）。當(dāng)一抗被涂覆在平板上時(shí)，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品被加入到用于第一反應(yīng)的孔。反應(yīng)后，HRP偶聯(lián)的二抗加入孔中進(jìn)行第二次反應(yīng)。洗干凈后，解開次級(jí)將抗體四甲基聯(lián)苯胺（TMB）加入孔中并顯色。

操作手冊與試劑配制方法：

一、需自備但試劑盒中未提供的材料

酶標(biāo)儀（Plate reader）

微量移液器及吸頭

稀釋用試管

量筒和燒杯

去離子水

洗板機(jī)（Plate washer）

紙巾

收集容器（例如：潔凈的一次性試管）

冰箱

二、準(zhǔn)備工作

1、洗滌緩沖液的配制

將“8號(hào) 洗滌緩沖液濃縮液”用去離子水稀釋40倍，作為實(shí)驗(yàn)用洗滌緩沖液。根據(jù)實(shí)際需要調(diào)整配制量。

2、標(biāo)記抗體的配制

使用潔凈的收集容器，將“2號(hào) 標(biāo)記抗體濃縮液”用“5號(hào) 標(biāo)記抗體稀釋液”稀釋30倍，混勻后備用。

3、標(biāo)準(zhǔn)品的配制

向“3號(hào) 標(biāo)準(zhǔn)品”瓶中加入0.5 mL去離子水，充分溶解。溶解后標(biāo)準(zhǔn)品濃度為10 ng/mL。

配制好的標(biāo)準(zhǔn)品可分裝后冷凍保存，但不得反復(fù)凍融。

準(zhǔn)備7支試管用于標(biāo)準(zhǔn)品稀釋，每管加入230 μL的“4號(hào) EIA緩沖液”。

將10 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)品取230 μL加入第一支試管（Tube-1，5 ng/mL），輕輕混勻。

然后從Tube-1中取230 μL加入第二支試管（Tube-2，2.5 ng/mL），輕輕混勻。

依此類推，進(jìn)行2倍系列稀釋，共配制7個(gè)濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)品，濃度范圍從5 ng/mL至0.08 ng/mL。

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋濃度如下：

Tube-1：5 ng/mL

Tube-2：2.5 ng/mL

Tube-3：1.25 ng/mL

Tube-4：0.63 ng/mL

Tube-5：0.31 ng/mL

Tube-6：0.16 ng/mL

Tube-7：0.08 ng/mL

4、待測樣本的配制

使用本試劑盒中的“4號(hào) EIA緩沖液”對待測樣本進(jìn)行稀釋，稀釋比例如下：

大鼠血清或EDTA血漿：至少稀釋2,000倍。

如需大量使用EIA緩沖液，可另行購買“大鼠血管緊張素原EIA緩沖液（100 mL，產(chǎn)品編號(hào)：27104D100）”。

檢測結(jié)果計(jì)算方法：

1、以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫軸，吸光度（O.D.）為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。可使用適當(dāng)?shù)幕貧w曲線（如雙對數(shù)轉(zhuǎn)換后的二次回歸）擬合各點(diǎn)。

2、根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，讀取待測樣本的吸光度對應(yīng)的濃度值。

3、將讀取的濃度值乘以樣本的稀釋倍數(shù)，計(jì)算最終濃度。