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血管緊張素原的檢測在以下研究領(lǐng)域具有重要價值:原發(fā)性醛固酮增多癥、新型腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)(RAAS)抑制劑的研究,以及心血管和腎臟血管疾病的研究。
近年來,由嚴重急性呼吸綜合征冠狀病毒2(SARS-CoV-2)引起的新型冠狀病毒肺炎(COVID-19)與RAAS系統(tǒng)(包括ACE抑制劑和血管緊張素受體拮抗劑ARBs)之間的關(guān)系,已成為全球研究的熱點。
本試劑盒可定量檢測小鼠血清和血漿樣本中的完整型血管緊張素原(Full Length Angiotensinogen)。
艾美捷IBL-小鼠完整血管緊張素原檢測試劑盒:
貨號:27105-96Well
預(yù)期用途:研究用試劑
檢測方法:酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)
標記物:辣根過氧化物酶(HRP)
適用物種:小鼠
檢測樣本類型:血清、EDTA血漿
(※ 根據(jù)樣本類型,可能需要額外添加EIA緩沖液。EIA緩沖液需另行購買,詳情請參考說明書。)
檢測范圍:0.16 - 10 ng/mL
第一步反應(yīng)條件:2 - 8 ℃ 孵育過夜
第二步反應(yīng)條件:2 - 8 ℃ 孵育60分鐘
靈敏度:0.01 ng/mL
特異性:可特異性檢測小鼠血清和EDTA血漿中的完整型血管緊張素原(intact Angiotensinogen)。
儲存條件:2 - 8 ℃
包裝規(guī)格:96孔板 × 1
備注1:根據(jù)樣本類型,可能需要額外添加EIA緩沖液。EIA緩沖液需另行購買。請務(wù)必使用本產(chǎn)品專用的EIA緩沖液。
備注2:**操作注意事項**
每次反應(yīng)后請立即使用洗板機進行洗滌,設(shè)置等待時間為0秒。
洗滌時間越長,吸光度(O.D.)值可能越低。
試劑盒組成:
1. 預(yù)包被板:抗小鼠AGTAI.兔IgG親和純化* 96孔 × 1
2. 標記抗體濃縮液:30×.HRP標記抗小鼠AGT405.兔IgG Fab’親和純化* 0.4 mL × 1
3. 標準品:重組小鼠完整型血管緊張素原 0.5 mL × 2
4. EIA緩沖液 30 mL × 1
5. 標記抗體稀釋液 12 mL × 1
6. 顯色底物:TMB溶液 15 mL × 1
7. 終止液 12 mL × 1
8. 洗滌緩沖液濃縮液 50 mL × 1
檢測原理:
本試劑盒采用固相夾心酶聯(lián)免疫吸附法ELISA.。預(yù)包被板上固定有捕獲抗體,將樣本和標準品加入孔中進行第一步反應(yīng)。反應(yīng)后,加入HRP標記的檢測抗體進行第二步反應(yīng)。洗滌去除未結(jié)合的抗體后,加入四甲基聯(lián)苯胺TMB.顯色底物,顯色強度與目標分子的含量成正比。
檢測步驟:
1.加入空白對照 確定空白對照孔,每孔加入100 uL的“4號 EIA緩沖液”。
2.加入準備好的樣本和標準品 每孔加入100 uL準備好的樣本和標準品。
3.蓋上板蓋,進行孵育第一步反應(yīng).。
4.洗滌 使用準備好的洗滌緩沖液洗滌板孔,并徹底去除液體。
5.加入準備好的標記抗體 每孔加入100 uL準備好的標記抗體。
6.蓋上板蓋,進行孵育第二步反應(yīng).。
7.洗滌 使用準備好的洗滌緩沖液徹底洗滌板孔,并完全去除液體。
8.加入“6號 顯色底物 - TMB溶液” 每孔加入100 uL TMB溶液。
9.避光孵育。
10.加入“7號 終止液” 每孔加入100 uL終止液。
11.測定吸光度O.D.. 清除板底污垢或水滴,確認孔內(nèi)液體表面無氣泡后,以空白對照為基準,測定標準品和樣本的吸光度。
測定波長:450 nm。如使用雙波長測定:主波長為450 nm,副波長為600~650 nm。
檢測結(jié)果計算方法:
1. 以標準品濃度為橫軸,吸光度O.D..為縱軸,繪制標準曲線。可使用適當?shù)幕貧w曲線如雙對數(shù)轉(zhuǎn)換后的二次回歸.擬合各點。
2. 根據(jù)標準曲線,讀取待測樣本的吸光度對應(yīng)的濃度值。
3. 將讀取的濃度值乘以樣本的稀釋倍數(shù),計算最終濃度。
標準曲線示例及實測值:

此處可根據(jù)實際實驗數(shù)據(jù)繪制標準曲線并記錄樣本測定結(jié)果.
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