PMA是比較中肯的v-PCR 染料，并已在數(shù)百份同行評審的論文和大量細(xì)菌、真菌和病毒菌株中得到驗證。早期研究側(cè)重于細(xì)菌中的v-PCR，驗證了在數(shù)十種不同細(xì)菌菌株中的程序，例如大腸桿菌、李斯特菌、軍團(tuán)菌、乳酸桿菌、結(jié)核分枝桿菌、衣原體、幽門螺桿菌以及許多其他與人類健康相關(guān)的菌株. v-PCR 在細(xì)菌中的應(yīng)用非常廣泛，但也有許多引文在酵母和真菌、病毒以及各種其他細(xì)胞類型（如古生菌、變形蟲和寄生蟲）中使用 v-PCR。

已驗證的Viability PCR應(yīng)用實(shí)例：

微生物組研究

環(huán)境測試

益生菌研究

臨床測試

食品和水衛(wèi)生

葡萄酒發(fā)酵

微生物測序

V-PCR的工作原理

PMAxx 和PMA是對DNA具有高親和力的光活性染料。染料插入dsDNA并在暴露于強(qiáng)烈可見光時形成共價鍵。該反應(yīng)通過在純化過程中去除修飾的DNA和通過DNA聚合酶抑制模板擴(kuò)增的組合來抑制修飾的DNA模板的PCR擴(kuò)增。由于染料是細(xì)胞膜不可滲透的，當(dāng)用染料處理含有活細(xì)菌和死細(xì)菌的樣品時，只有細(xì)胞膜受損的死細(xì)菌才容易受到DNA修飾。在qPCR反應(yīng)中，死細(xì)胞DNA將顯示出延遲擴(kuò)增和比活細(xì)胞更高的Ct。

活性PCR染料，如PMAxx 或PMA是膜不滲透的，這使它們具有死細(xì)胞特異性。一旦進(jìn)入死細(xì)胞，它們就會與DNA結(jié)合。暴露在強(qiáng)烈的可見光下會使染料具有活性，并使它們共價附著在DNA上，這種DNA修飾防止了隨后的PCR反應(yīng)中的擴(kuò)增。

v-PCR工作流程：

v-PCR的基本工作流程如下圖所示（詳細(xì)協(xié)議可在產(chǎn)品頁面上找到）。它適用于許多不同的樣本類型和實(shí)驗設(shè)置。對于少量培養(yǎng)物，樣品可以在微型離心管中制備，并在PMA-Lite 2.0 LED光解裝置中暴露在光下。

艾美捷 Viability PCR入門套件

可定制的 Viability PCR 入門套件包含使用 PMA 或 PMAxx 活力染料和 qPCR 選擇性檢測活細(xì)胞所需的材料。這些試劑盒可用于您選擇的任何細(xì)胞類型（有關(guān)已發(fā)布的經(jīng)過驗證的細(xì)胞類型，請參閱PMA/PMAxx 參考列表和經(jīng)過驗證的細(xì)菌菌株列表）。所有試劑盒均包含 Forget-Me-Not EvaGreenqPCR Master Mix，以及您選擇的 PMA 或 PMAxx 染料。您還可以選擇帶有或不帶有革蘭氏陰性細(xì)菌增強(qiáng)劑（不適用于其他細(xì)胞類型）的試劑盒。用戶將需要提供自己的引物來擴(kuò)增他們感興趣的物種（請參閱此 博客文章 用于引物設(shè)計考慮）。每個試劑盒包含的試劑足以處理 80 種細(xì)菌培養(yǎng)物并進(jìn)行200次PCR反應(yīng)。

試劑盒包括：

PMA 染料或 PMAxx 染料

Forget-Me-Not EvaGreen qPCR預(yù)混液

ROX 參考染料

PMA 增強(qiáng)劑（僅限革蘭氏陰性菌株）

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名稱 貨號 活性染料

Viability PCR Starter Kit with PMA 31075

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Biotium公司是一家在熒光技術(shù)領(lǐng)域獨(dú)樹一幟的生物技術(shù)公司，公司位于美國加利福尼亞的BAY AREA------中外知名首要的生物科技中心。該公司一直致力于開發(fā)和生產(chǎn)用于生物醫(yī)學(xué)研究的熒光指示劑及其他特殊生化產(chǎn)品。其產(chǎn)品被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生 物學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、診斷學(xué)、生物化學(xué)、神經(jīng)科學(xué)、血液流動檢測及大規(guī)模藥物篩選等眾多領(lǐng)域。Biotium公司專利產(chǎn)品眾多，包括已經(jīng)被廣泛使用的實(shí)時PCR定量熒光染料EvaGreen、具有劃時代意義的凝膠核酸染料Gel Red和GelGreen，以及最新推出的Cheetah Taq熱啟動酶和CF系列蛋白質(zhì)標(biāo)記染料等。 n目前，Biotium已將其許多專利技術(shù)授權(quán)給一些主要的國際生物技術(shù)公司，包括安捷倫、BD生物科學(xué)、Biolegend、BioRad、EMD Millipore、Illumina、PerkinElmer、Qiagen、Roche、Sartorius AG、Sigma-Aldrich、Thermo Fisher Scientific等。