熒光異硫氰酸酯（FITC）標記的右旋糖酐。

作為Chondrex在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強烈推薦Chondrex熱銷產(chǎn)品FITC-葡聚糖，4kDa。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

FITC-葡聚糖，4kDa：

應(yīng)用：用于評估半透膜的通透性，可以在體內(nèi)或體外進行（1-4）。

注意事項：FITC-右旋糖酐可以與TRITC-右旋糖酐（貨號4014）同時使用，因為它們在不同的波長下發(fā)射熒光。

數(shù)量：5毫升。

形式：0.05M磷酸鹽緩沖鹽水中的25 mg/ml溶液。

分子量：4 kDa。

熒光特性：激發(fā)波長：490 nm，發(fā)射波長：520 nm。

儲存：在暗處于4℃保存。

穩(wěn)定性：有效期為1年。

體內(nèi)實驗步驟：

在口服喂養(yǎng)前禁食小鼠4小時，并在實驗期間保持禁食。

通過口腔灌胃給予20 ml/kg的劑量。

維持禁食狀態(tài)，等待3小時（根據(jù)個體動物可能會有所不同）。

通過眼眶后出血收集血液，然后離心并收集血漿。將血漿與PBS按1:2（或更多）稀釋。

注意事項：

樣本中的蛋白質(zhì)可能干擾并降低熒光強度（FI）。因此，為了準確確定FITC-右旋糖酐的通透性，所有樣本中血漿與PBS的比例必須一致。

Chondrex, Inc.建議通過對儲備FITC-右旋糖酐進行連續(xù)稀釋，制作標準曲線以進行定性研究。

將50或100 μl稀釋后的標準和樣本轉(zhuǎn)移至黑色96孔板中，在熒光讀數(shù)儀中讀取。

讀數(shù)設(shè)置：

激發(fā)波長：490 nm / 發(fā)射波長：520 nm

波長帶寬（激發(fā)和發(fā)射）：9 nm

增益：自動或設(shè)置為80,000，相當于12.5 μg/ml

體外實驗步驟：

體外研究的協(xié)議會因培養(yǎng)細胞的類型、培養(yǎng)系統(tǒng)、研究目的等而有所不同。

圖1。FITC葡聚糖的典型標準曲線

制備標準品

建議標準范圍為12.5至0.2 μg/ml。為制備標準稀釋液，使用與樣本相同的正常小鼠血漿與PBS的比例稀釋劑。例如，如果樣本稀釋使用1:2稀釋（體內(nèi)協(xié)議，步驟4），則應(yīng)準備33%的正常小鼠血漿與0.05M磷酸鹽緩沖鹽水（300 μl血漿與600 μl PBS）作為稀釋劑。

將10 μl的25 mg/ml FITC-聚糖與990 μl PBS混合（得到250 μg/ml）。

將12.5 μl稀釋后的FITC-聚糖與237.5 μl的33%正常小鼠血漿在0.05M磷酸鹽緩沖鹽水中混合（得到12.5 μg/ml）。

將125 μl的12.5 μg/ml溶液與等體積的33%小鼠正常血漿混合（得到6.3 μg/ml）。

對于3.1、1.6、0.8、0.4和0.2 μg/ml的標準溶液重復(fù)上述步驟5次。

將50或100 μl的稀釋標準和樣本轉(zhuǎn)移到黑色96孔板上，并在熒光讀數(shù)儀上讀取。

從標準和樣本的FI值中減去FI空白值（0.05M磷酸鹽緩沖鹽水中的33%正常小鼠血漿）。

將標準的FI值與FITC-聚糖標準的μg/ml繪制圖表，使用對數(shù)/對數(shù)圖可以線性化數(shù)據(jù)（見圖1）。

文獻參考：

1. M. Vijay-Kumar, C. Sanders, R. Taylor, A. Kumar, J. Aitken, et al., Deletion of TLR5 results in spontaneous colitis in mice. J Clin Invest 117, 3909-21 (2007).

2. Q. Wang, C. Fang, P. Hasselgren, Intestinal permeability is reduced and IL-10 levels are increased in septic IL-6 knockout mice. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol 281,R1013-23 (2001).

3. 3. W. Huang et al., HMGB1 increases permeability of the endothelial cell monolayer via RAGE and Src family tyrosine kinase pathways. Inflammation 35, 350-362 (2012). 

Chondrex成立于1996年，致力于開發(fā)和生產(chǎn)高純度膠原蛋白、抗膠原蛋白單克隆抗體和多種ELISA試劑盒等產(chǎn)品，為研究人員提供研究類風濕性關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid Arthritis ,RA)發(fā)病機制和篩選潛在治療方法所需的工具。Chondrex生產(chǎn)400多種免疫學(xué)研究產(chǎn)品，涵蓋腎炎、結(jié)腸炎和過敏性哮喘等一系列自身免疫性疾病模型。此外，還開發(fā)了炎癥相關(guān)產(chǎn)品，如細菌毒素抗體ELISA、細胞因子檢測ELISA等。

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