表觀遺傳之RNA甲基化一 5mc甲基化

      Hello大家好，我今天又給大家帶來表觀遺傳的第四集：RNA甲基化一 5mc甲基化，不知道大家有沒有期待呢？

       通過觀看前面的劇情，我們了解到DNA 5mC甲基化。DNA中的5-甲基胞嘧啶（5-mC）是通過DNA甲基轉移酶在胞嘧啶環的5個碳原子上共價加成甲基而產生的。這個過程已經被充分研究，并且通常與基因表達的抑制有關。還觀察到在人類中，5-mC存在于各種RNA分子中，包括tRNA，rRNA，mRNA和非編碼RNA（ncRNA）。 在mRNA和ncRNA中至少發現了10,275個5-mC候選位點，覆蓋了轉錄組中總胞嘧啶殘基的10.6％，這個比率，確實值得被關注和研究呢。

      5-mC似乎在某些類別的ncRNA中富集，但在mRNA中相對較少。 但是，大多數（83％）候選位點都存在于mRNA中。 在這些轉錄物中，5-mC似乎在蛋白質編碼序列中被耗盡，但富含5'和3'UTR。 已知兩種不同的甲基轉移酶NSUN2和Dnmt2可以催化真核RNA中的5-mC修飾。 最近的數據強烈表明，RNA胞嘧啶甲基化會影響各種生物學過程的調控，例如RNA穩定性和mRNA翻譯。 此外，vtRNA中5-mC的丟失會導致異常加工成與Argonaute相關的小RNA片段，這些片段可以充當microRNA。 因此，vt ncRNA的加工受損可能會導致與NSun2缺陷相關的人類疾病。

      今天就給大家安利一波針對RNA 5mC的產品。

      1.P-9009，MethylFlash 5-mC RNA Methylation ELISA Easy Kit (Fluorometric)，ELISA樣形式基于熒光的總5-mC RNA甲基化定量。

      該產品具有以下優勢和特點：

     【1】快速：整個過程僅需2個小時40分鐘

     【2】穩定：試劑盒的組成使測定具有較大的“信號窗口”，重復之間的差異較小。

     【3】方便：固有的低背景信號，從而消除了板塊步驟的需要

     【4】靈敏-檢測限可低至200 ng輸入RNA中的5-mC RNA的0.02％。

     【5】特異性-對5-mC的特異性高，在指定的樣品RNA濃度范圍內與未甲基化的胞嘧啶或羥甲基化的胞嘧啶沒有交叉反應。

     【6】通用–陽性和陰性對照均可檢測任何物種中的5-mC RNA甲基化

     【7】準確-可按百分比比例分級的優化陽性對照，使測定更加準確并與HPLC-MS分析具有高度可比性

     【8】靈活-帶孔微孔板格式使該測定可用于手動或高通量分析

     簡單的操作步驟~~

      檢測效果~~

      圖p-9009：使用MethylFlash™5-mC RNA甲基化ELISA簡易試劑盒（熒光法）準確定量不同物種的各種RNA樣品中5-mC含量。 結果與通過MS-LC獲得的結果密切相關。

      參考文獻：

     【1】Park MH et. al. (January 2020). Mono-(2-Ethylhexyl)phthalate Regulates Cholesterol Efflux via MicroRNAs Regulated m⁶A RNA Methylation.Chem Res Toxicol.

     【2】P-9007 piNext 5-mC RNA Bisulfite-Seq Easy Kit (Illumina)，用于RNA亞硫酸氫鹽轉化，然后進行“后亞硫酸氫鹽”文庫制備過程。

      該產品具有以下優勢和特點：

     【1】高靈敏度和高效率：通過使用一種創新方法，通過隨機探測可以完整地標記亞硫酸氫鹽轉化的RNA的銜接子標簽，并阻止形成未標記或半標記的RNA片段，包括非條形碼（單重）和條形碼（多重） 文庫，可以高靈敏度和高效率可靠地制備文庫，從而為構建5mC RNA-seq文庫提供了可靠而可靠的方法。 優化的亞硫酸氫鹽RNA方法和增強的銜接子標簽消除了片段丟失和選擇偏倚，使輸入RNA可以低至5 ng，并提高了完全標記的cDNA文庫的效率。

     【2】簡單且簡化的過程：整個過程可以在6個小時內完成。 無膠大小選擇/純化可節省時間并防止處理錯誤以及有價值的樣品丟失。

完全轉化：創新的試劑組合物可將未甲基化的胞嘧啶以大于99.9％的水平轉化為尿嘧啶，當使用指定范圍的樣品RNA時，甲基胞嘧啶向胸腺嘧啶（<0.1％）的轉化不存在或可忽略不計。

     【3】 極為方便：該試劑盒包含RNA庫制備過程中每個步驟的所有必需組件，足以進行亞硫酸氫鹽的轉化，連接，純化，大小選擇和庫擴增，從而簡化了亞硫酸氫鹽RNA庫的制備過程，以獲得最可靠和一致的結果

     【4】最小的偏差：超高保真HiFi擴增可實現亞硫酸氫鹽轉化的RNA文庫的可再生高產量，同時序列偏倚最小且錯誤率低。

     【5】 廣泛的樣品適用性：起始材料可以是從各種組織/細胞樣品（例如新鮮和冷凍的組織），培養瓶或微孔板中培養的細胞中分離的總RNA。

      圖p-9007：文庫片段的大小分布：使用EpiNext&trade;5-mC RNA Bisulfite-Seq Easy Kit（Illumina）從50 ng小鼠RNA中制備亞硫酸氫鹽后cDNA文庫。

      3.p-9003 Methylamp RNA Bisulfite Conversion Kit，用于穩健的、基于化學的亞硫酸氫鹽處理RNA甲基化胞嘧啶分析。

      該產品具有以下優勢和特點：

     【1】快速便捷的操作步驟，可在3小時內完成。

     【2】當使用指定范圍的輸入樣品RNA時，完全或完全地將未甲基化的RNA胞嘧啶轉化為尿嘧啶（> 99.9％），而甲基胞嘧啶向胸腺嘧啶（<0.1％）的不正確/錯誤轉化或可忽略不計。

     【3】強大的RNA降解保護，可防止90％以上的RNA丟失。

      【4】隨附的對照引物對亞硫酸氫鹽轉化的RNA具有特異性，可用于測試亞硫酸氫鹽轉化是否已正確實現。

      【5】少量輸入RNA可用于亞硫酸氫鹽轉化，每個反應低至5 ng。

      【6】簡單，可靠且一致的反應條件。

      圖p-9003：RNA亞硫酸氫鹽測序分析：使用對亞硫酸氫鹽轉化的RNA特異的28S rRNA引物，對從MCF-7細胞分離的RNA進行亞硫酸氫鹽處理，cDNA合成和PCR擴增后測序。 未甲基化的胞嘧啶（＃4、5、14）被轉化為尿嘧啶并被檢測為胸腺嘧啶，而甲基化的胞嘧啶（＃8）保持不變。

      下期預告：組蛋白修飾&mdash;組蛋白乙酰化，大家敬請期待噢~~

      作為一家具有高端的技術實力、先進的經營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業，總部位于武漢光谷高新技術開發區，服務面向全國。艾美捷科技是集進口試劑、實驗室耗材銷售、技術服務與合約開發為一體的專業化高科技公司，為用戶提供專業的前沿資訊、完備的產品、整合的解決方案，及優質的物流服務。為了更好的服務客戶，公司組建了一支經驗豐富的研發團隊-艾美捷生物技術中心，進入研發生產階段，將更優質的產品推薦給國內生物領域的同仁們!

      艾美捷科技與國內外優秀的生物試劑供應商優保持著密切的合作關系，目前已成為眾多國際知名品牌的中國總代理或一級代理，主要包括：AmyJet、AAT Bioquest、Abnova、Agrisera、Biovision、Biosensis、Cayman Chemical、Caisson Labs、Cytoskeleton、CytoNiChe、Epigentek、Equitech-Bio、Hycult Biotech、Jackson、LifeSensors、LigaTrap、ProSpec、Norgen Biotek、Mabtech、Matreya、iRegene、StressMarq、ImmunoReagents、SouthernBiotech、Origene、US Biological、Solis BioDyne等，可以在短時間內為用戶提供專業的前沿資訊、完備的產品及物流服務。