細胞外基質(zhì)蛋白種類多樣，不同蛋白間還可以互相組合為體外細胞培養(yǎng)創(chuàng)造有利條件。但是也正是因為這種多樣性，也為體外培養(yǎng)細胞選擇合適的細胞外基質(zhì)蛋白帶來巨大挑戰(zhàn)。作為2D/3D細胞培養(yǎng)專家，Advanced BioMatrix帶來了 ECM Select Array試劑盒，允許您在36種ECM蛋白組合上培養(yǎng)細胞，幫助您找到適合您細胞的細胞外基質(zhì)(ECM)蛋白。

艾美捷細胞外基質(zhì)（ECM）蛋白篩選試劑盒（5170）的應用：

細胞外基質(zhì)篩選陣列，可幫助您找到適合您細胞的細胞外基質(zhì)(ECM)蛋白（已成功應用于MCF-7、CHO、HUVEC、成纖維細胞、MG-63、Jurkat細胞等細胞系，以及小鼠心臟祖細胞、新生大鼠心肌細胞、人寡突觸前體細胞等原代細胞，使用此方案。）

細胞外基質(zhì)（ECM）蛋白篩選試劑盒實驗流程：

1. 將細胞接種到載玻片上

1.1在5ml完整的培養(yǎng)基中準備250000個所需細胞(50,000個細胞/毫升)。

1.2從-20℃的冰箱中取出ECM Select? Array Kit Ultra-36，并放置在無菌層流罩下。打開鋁箔袋并取出其中的組分。首先，從塑料袋中取出細胞培養(yǎng)板，并取下蓋子。然后打開載玻片支架上的蓋子，輕輕取出載玻片。將載玻片放入細胞培養(yǎng)板的一個小隔間中。在取出載玻片時要小心，使用無菌技術(shù)，如戴無菌手套或使用無菌鑷子，并只觸摸載玻片的邊緣。確保印刷的斑點面朝上（載玻片上的數(shù)字和字母應清晰可見）。

1.3在載玻片上加入5ml無菌PBS。確保整個載玻片浸泡在PBS溶液中，避免在載玻片下方困住氣泡。輕輕搖動載玻片幾次，然后吸出PBS溶液。注意：不要觸摸載玻片表面。

1.4加入5ml所需的培養(yǎng)基（用于細胞培養(yǎng)的相同培養(yǎng)基），確保整個載玻片浸泡在培養(yǎng)基中。輕輕搖動載玻片幾次，然后吸出培養(yǎng)基溶液。注意：不要觸摸載玻片表面。

1.5 通過輕輕上下移液混合準備好的25萬個細胞，然后立即將細胞直接加到載玻片上。在向載玻片上分配細胞時，同時來回移動移液管，均勻分布細胞。注意：不要觸摸載玻片表面。將蓋子放回培養(yǎng)皿上。

1.6小心地將含有載玻片的4孔板轉(zhuǎn)移到孵育箱中，在37℃、5% CO2條件下過夜培養(yǎng)細胞（至少12小時，以確保細胞有效附著，最長可達3天）。

注意：從載玻片支架上取下載玻片時，載玻片表面可能可見陣列斑點。用PBS/培養(yǎng)基洗滌后，這些斑點可能會消失。這是正常現(xiàn)象，不會影響ECM陣列的性能。

注意：對于細胞系，12小時應足以看到細胞附著。對于新鮮從組織中分離出的細胞或之前被冷凍的細胞，可能需要最多2天才能看到明顯的細胞附著。

注意：如果需要進行細胞增殖研究，請減少細胞數(shù)量，以便在斑點上留出額外空間供細胞分裂。建議根據(jù)細胞的大小和形態(tài)，從10萬到15萬個細胞開始。細胞越大，所需的細胞數(shù)量就越少。

2. 在載玻片上清洗和觀察細胞

2.1經(jīng)過至少12小時的孵育后，從培養(yǎng)箱中取出培養(yǎng)板，將培養(yǎng)板放在相差顯微鏡下觀察，從5倍物鏡開始。輕輕來回移動培養(yǎng)板，區(qū)分非粘附的漂浮細胞和附著細胞。

注意：由于ECM Select?載玻片上的水凝膠表面具有不易粘附的特性，細胞會優(yōu)先附著到打印有適當細胞外基質(zhì)的斑點上。細胞被限制在斑點內(nèi)。

2.2吸去非粘附的漂浮細胞，確保不擾動載玻片表面。每次用5ml培養(yǎng)基洗滌載玻片兩次，然后將載玻片留在5ml培養(yǎng)基中。

2.3在相差顯微鏡下觀察每個斑點塊的細胞附著情況。每個塊代表一個具有9個復制點的唯一ECM。

2.4在這個階段，細胞可以固定，也可以在載玻片上再培養(yǎng)3天。

3. 在載玻片上固定細胞

3.1通過吸去培養(yǎng)基，去除載玻片上的培養(yǎng)細胞。用含Ca2+和Mg2+的冷1倍Hank's平衡鹽溶液（HBSS）兩次洗滌載玻片上的細胞，每次用5ml。

3.2通過在1倍PBS溶液中加入4%的冷聚甲醛（PFA）來固定載玻片上的細胞。將載玻片放入4℃的PFA溶液中5分鐘，然后在室溫下額外固定10分鐘。

3.3去除PFA溶液，然后用1倍HBSS溶液每次洗滌載玻片兩次，每次用5ml。載玻片可以存放在4℃的1倍HBSS溶液中以備將來染色，或者可以立即處理。

4. 在載玻片上進行細胞核和免疫染色

4.1可以使用許多可用的核染色試劑對載玻片上的細胞進行染色，如DAPI、PoPo-3、DraQ等。

4.2對于特定抗體染色，請按照制造商的說明進行免疫細胞化學稀釋建議。

4.3完成染色后，用5ml細胞培養(yǎng)水每次洗滌載玻片兩次，每次5分鐘。然后將載玻片從培養(yǎng)皿中取出，放在暗處的架子上晾干。

4.4載玻片可以直接放入熒光顯微鏡中觀察。

注意：不要使用任何封片介質(zhì)，如Vectashield。

注意：不要使用倒置位置進行觀察，這通常用于油鏡頭。