Jackson丨艾美捷代理FITC標(biāo)記驢抗兔IgG(H+L)多克隆抗體：經(jīng)典綠色熒光檢測試劑的特性與應(yīng)用

發(fā)布者：艾美捷科技發(fā)布時(shí)間：2025-10-21

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在免疫熒光檢測技術(shù)發(fā)展的漫長歷程中，異硫氰酸熒光素（FITC）標(biāo)記的抗體無疑扮演了奠基者的角色。作為最早被廣泛應(yīng)用的熒光染料之一，F(xiàn)ITC以其成熟的工藝和穩(wěn)定的性能，至今仍在許多實(shí)驗(yàn)室中發(fā)揮著作用。本文將詳細(xì)介紹FITC標(biāo)記驢抗兔IgG(H+L)多克隆抗體（貨號：711-095-152）這一經(jīng)典次級抗體的核心特性、應(yīng)用方案及其在當(dāng)代研究中的定位。

Jackson 總部位于美國賓夕法尼的蘭卡斯特，距離費(fèi)城大概有40英里。Jackson在1982年由科學(xué)家展開了包括在細(xì)胞生物學(xué)，蛋白質(zhì)化學(xué)，微生物學(xué)，免疫學(xué)及產(chǎn)品開發(fā)實(shí)驗(yàn)研究。 Jackson產(chǎn)品僅用于研究，不用于診斷或治療用途。作為美國各種二抗生產(chǎn)公司之一，Jackson在各國設(shè)有幾十家代理。由于其產(chǎn)品效價(jià) 高、種類全、價(jià)格低廉，因而成為各大藥廠、試劑盒生產(chǎn)廠、大型實(shí)驗(yàn)室采購此類試劑的優(yōu)選。其產(chǎn)品主要包括：各種純化的二抗、標(biāo)記的二抗（AMCA、 Cy2、FITC、Cy3、TRITC、RRX、TR、Cy5、長臂生物素、辣根酶和堿磷酶標(biāo)記）等。

一、抗體核心特性：高特異性與廣泛反應(yīng)性

本品為源自驢宿主的多克隆抗體，其靶標(biāo)為兔源性免疫球蛋白G。抗體形式為全分子IgG，意味著其保留了完整的抗體結(jié)構(gòu)——包含一個(gè)Fc片段和兩個(gè)通過二硫鍵連接的抗原結(jié)合Fab片段，形成分子量約為160kDa的二價(jià)結(jié)構(gòu)。這種完整結(jié)構(gòu)使其具備更高的抗原結(jié)合親合力，適用于絕大多數(shù)免疫檢測實(shí)驗(yàn)，并且因其制備工藝成熟而具有顯著的成本優(yōu)勢。

其特異性被定義為IgG(H+L)。這表明它不僅能識別兔IgG分子的重鏈，也能與其輕鏈結(jié)合。由于同一物種內(nèi)不同類別免疫球蛋白（如IgM、IgA等）共享相同或相似的輕鏈，因此該抗體能夠與兔的各種IgG亞類以及其他兔免疫球蛋白發(fā)生反應(yīng)，確保了檢測的全面性。

本品格外突出的優(yōu)勢之一在于其經(jīng)過嚴(yán)格處理的最小交叉反應(yīng)性。通過ELISA和/或固相吸附測試，已證實(shí)該抗體與牛、雞、山羊、豚鼠、敘利亞倉鼠、馬、人、小鼠、大鼠和綿羊的血清蛋白發(fā)生交叉反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)極低。這一特性對于在復(fù)雜組織樣本（如包含多種細(xì)胞或血清成分的樣本）中進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的研究者至關(guān)重要，它能有效避免由非特異性結(jié)合導(dǎo)致的高背景，從而獲得更清晰、更可靠的特異性信號。當(dāng)然，產(chǎn)品說明也提示，它仍有可能與未列出的其他物種免疫球蛋白發(fā)生交叉反應(yīng)。

二、制備工藝與穩(wěn)定保存方案

該抗體通過免疫親和層析技術(shù)進(jìn)行純化，從抗血清中特異性分離出目標(biāo)抗體，確保了產(chǎn)品的高純度與高活性。產(chǎn)品以凍干粉形式提供，應(yīng)在2-8°C下干燥保存。

使用前，需按照產(chǎn)品說明書加入指定體積的去離子水進(jìn)行重懸。若溶液不夠澄清，建議進(jìn)行離心處理。重懸后的液體在2-8°C下可作為原液穩(wěn)定保存約6周。

對于長期保存，推薦以下兩種策略：

1.分裝深凍：將重懸后的抗體分裝至小管中，于-70°C或更低的溫度下冷凍保存，并嚴(yán)格避免反復(fù)凍融。

2.甘油保存：在抗體原液中加入等體積的甘油（最終濃度為50%），然后以液體形態(tài)儲存于-20°C。

自重新水化之日起，產(chǎn)品的有效期為一年。若經(jīng)性能測試驗(yàn)證合格，此有效期可酌情延長。產(chǎn)品的基礎(chǔ)緩沖體系為pH7.6的0.01M磷酸鈉和0.25MNaCl，并含有15mg/ml的無IgG、無蛋白酶牛血清白蛋白作為穩(wěn)定劑，以及0.05%的疊氮鈉作為防腐劑。

三、熒光標(biāo)記：FITC的性能分析與應(yīng)用考量

本品所使用的標(biāo)記物是異硫氰酸熒光素（FITC）。其最大激發(fā)波長和最大發(fā)射波長分別為492nm和520nm，是典型的綠色熒光信號。

作為歷史最悠久的熒光標(biāo)記物之一，F(xiàn)ITC的主要優(yōu)勢在于其技術(shù)成熟、成本相對較低，并且擁有大量的歷史數(shù)據(jù)可供參考。然而，與新一代的綠色熒光染料（如AlexaFluor?488）相比，F(xiàn)ITC也存在一些固有的局限性：

亮度較低：在相同條件下，F(xiàn)ITC的熒光強(qiáng)度通常不及AlexaFluor?488。

光穩(wěn)定性差：FITC在光照下容易發(fā)生光漂白，導(dǎo)致熒光信號迅速衰減，這給拍照和觀察，特別是需要長時(shí)間曝光的實(shí)驗(yàn)帶來了挑戰(zhàn)。為了緩解此問題，強(qiáng)烈建議在封片時(shí)使用含有抗熒光淬滅劑的封片劑。

因此，在產(chǎn)品說明中，制造商明確建議，對于許多原本計(jì)劃使用FITC的應(yīng)用，AlexaFluor?488是更優(yōu)的選擇，因?yàn)樗痢⒏凸馄祝覍H變化的敏感性更低。

四、使用建議與實(shí)驗(yàn)優(yōu)化

產(chǎn)品給出的建議工作稀釋度范圍是1:50至1:200。這個(gè)起始范圍相較于其他一些熒光標(biāo)記的抗體要更濃一些，可能與FITC本身的熒光效率有關(guān)。然而，必須明確指出，這僅是一個(gè)推薦的起始點(diǎn)，最佳的稀釋倍數(shù)必須通過使用者自身的實(shí)驗(yàn)體系進(jìn)行嚴(yán)謹(jǐn)?shù)慕?jīng)驗(yàn)性確定。

影響最終工作濃度的因素繁多，主要包括：

抗原密度：目標(biāo)蛋白在樣本中的表達(dá)水平。

樣本類型與固定方式：不同的樣本處理方式會影響抗體的滲透性與結(jié)合效率。

信號檢測設(shè)備的靈敏度。469篇文獻(xiàn)中被引用

FITC標(biāo)記驢抗兔IgG(H+L)多克隆抗體

五、熱門產(chǎn)品

111-095-003	熒光素（FITC）偶聯(lián)的 AffiniPure 山羊抗兔 IgG （H+L）
112-095-003	熒光素（FITC）偶聯(lián) AffiniPure 山羊抗大鼠 IgG （H+L）
115-095-003	熒光素（FITC）偶聯(lián) AffiniPure 山羊抗小鼠 IgG （H+L）
705-165-003	Cy3 偶聯(lián) AffiniPure 驢抗山羊 IgG （H+L）
711-165-152	Cy3 偶聯(lián) AffiniPure 驢抗兔 IgG（H+L）（最小 X Bov，Ck，Gt，GP，Sy Hms，Hrs，胡，Ms，大鼠，Shp Sr Prot）
715-165-150	Cy3 偶聯(lián) AffiniPure 驢抗小鼠抗小鼠 IgG （H+L）（min x bov，ck，gt，GP，Sy Hms，Hrs，胡，Rb，Shp Sr Prot）
111-165-003	Cy3 偶聯(lián) AffiniPure 山羊抗兔 IgG （H+L）
115-165-003	Cy3 偶聯(lián) AffiniPure 山羊抗小鼠 IgG （H+L）
200-582-156	Alexa Fluor 594 偶聯(lián) IgG 組分單克隆小鼠抗地高辛
115-005-020	AffiniPure 山羊抗小鼠 IgM，μ鏈特異性
112-005-167	AffiniPure 山羊抗大鼠 IgG （H+L）（最小 X 胡，Bov，小時(shí)，Ms，Rb Sr Prot）
115-005-044	AffiniPure 山羊抗小鼠 IgG + IgM （H+L）
713-545-003	Alexa Fluor 488 偶聯(lián) AffiniPure 驢抗綿羊 IgG （H+L）
111-035-003	過氧化物酶偶聯(lián) AffiniPure 山羊抗兔 IgG （H+L）
109-115-098	R-藻紅蛋白偶聯(lián) AffiniPure 山羊抗人 IgG，F(xiàn)cγ 片段特異性（min x bov，hrs，Ms Sr Prot）
711-165-152	Cy3 偶聯(lián) AffiniPure 驢抗兔 IgG（H+L）（最小 X Bov，Ck，Gt，GP，Sy Hms，Hrs，胡，Ms，大鼠，Shp Sr Prot）
017-000-121	普通驢精華液
001-000-162	牛血清白蛋白（無 IgG、無蛋白酶）
115-035-003	過氧化物酶偶聯(lián)的 AffiniPure 山羊抗小鼠 IgG （H+L）
211-032-171	過氧化物酶偶聯(lián) IgG 組分單克隆小鼠抗兔 IgG，輕鏈特異性（min x bov，gt，arm hms，hrs，胡，ms，大鼠，shp ig）
115-035-003	過氧化物酶偶聯(lián)的 AffiniPure 山羊抗小鼠 IgG （H+L）
111-545-003	Alexa Fluor 488 偶聯(lián) AffiniPure 山羊抗兔 IgG （H+L）
115-545-003	Alexa Fluor 488 偶聯(lián) AffiniPure 山羊抗小鼠 IgG （H+L）
115-035-174	過氧化物酶偶聯(lián) AffiniPure 山羊抗小鼠 IgG，輕鏈* 特異性（最小 x Bov，Gt，Hrs，胡，Rb，大鼠，shp ig）
017-000-121	普通驢精華液
712-605-153	Alexa Fluor 647 偶聯(lián) AffiniPure 驢抗大鼠 IgG （H+L）（最小 X BoV，Ck，Gt，GP，Sy Hms，Hrs，胡，Ms，Rb，Shp Sr Prot）
109-005-044	AffiniPure 山羊抗人 IgG + IgM （H+L）
115-035-008	過氧化物酶偶聯(lián)的 AffiniPure 山羊抗小鼠 IgG，F(xiàn)cγ 片段特異性
109-115-098	R-藻紅蛋白偶聯(lián) AffiniPure 山羊抗人 IgG，F(xiàn)cγ 片段特異性（min x bov，hrs，Ms Sr Prot）
200-052-156	堿性磷酸酶偶聯(lián) IgG 組分單克隆小鼠抗地高辛
111-205-144	12nm 膠體金-AffiniPure 山羊抗兔 IgG（H+L）（min x 胡，Ms，大鼠 Sr Prot）（EM 級）
211-032-171	過氧化物酶偶聯(lián) IgG 組分單克隆小鼠抗兔 IgG，輕鏈特異性（min x bov，gt，arm hms，hrs，胡，ms，大鼠，shp ig）
111-605-003	Alexa Fluor 647 偶聯(lián) AffiniPure 山羊抗兔 IgG （H+L）
009-000-003	ChromPure 人 IgG，全分子
001-000-161	牛血清白蛋白（無 IgG、無蛋白酶）
017-000-121	普通驢精華液
109-116-097	R-藻紅蛋白偶聯(lián) AffiniPure F（ab'）2 片段山羊抗人 IgG，F(xiàn)（ab'）2 片段特異性（min x Bov，Hrs，Ms Sr Prot）
109-546-097	Alexa Fluor 488 偶聯(lián) AffiniPure F（ab'）2 片段山羊抗人 IgG，F(xiàn)（ab'）2 片段特異性（最小 X Bov，小時(shí)，Ms Sr Prot）
115-605-164	Alexa Fluor 647 偶聯(lián)的 AffiniPure 山羊抗小鼠 IgG（亞類 1 + 2a + 2b + 3），F(xiàn)cγ片段特異性（最小 X 胡，Bov，Rb Sr Prot）
115-115-164	R-藻紅蛋白偶聯(lián) AffiniPure 山羊抗小鼠 IgG（亞類 1+2a+2b+3），F(xiàn)cγ 片段特異性（min x 胡，Bov，Rb Sr Prot）
109-005-097	AffiniPure 山羊抗人 IgG，F(xiàn)（ab'）2 片段特異性（最小 X Bov，小時(shí)，Ms Sr Prot）