胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素（TSLP）是一種I型細(xì)胞因子，在免疫系統(tǒng)中兼具警報(bào)素（alarmin）和生長因子的功能。TSLP主要由肺、皮膚及胃黏膜的上皮細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生，也可由樹突狀細(xì)胞（DCs）、嗜堿性粒細(xì)胞和肥大細(xì)胞分泌。感染、促炎細(xì)胞因子、蛋白酶甚至機(jī)械損傷均可誘導(dǎo)TSLP的表達(dá)——例如，流感病毒或鼻病毒感染肺部后，TSLP水平顯著升高。

TSLP在2型免疫應(yīng)答和Th2細(xì)胞應(yīng)答中發(fā)揮核心作用，能夠促進(jìn)樹突狀細(xì)胞的成熟與募集，并調(diào)控T細(xì)胞、B細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞及其他淋巴細(xì)胞的活性。更重要的是，TSLP通過誘導(dǎo)OX40L、CD80和CD86的表達(dá)，刺激CD4+ T細(xì)胞向Th2表型分化，從而參與過敏性哮喘、特應(yīng)性皮炎、食物過敏等多種過敏性疾病的發(fā)病機(jī)制。基于TSLP在過敏性疾病中的關(guān)鍵作用，2021年，靶向TSLP的中和抗體tezepelumab獲FDA批準(zhǔn)用于治療重癥哮喘，這標(biāo)志著TSLP信號通路成為自身免疫病及過敏性疾病藥物研發(fā)的重要靶點(diǎn)。目前，針對TSLP的抗體藥物仍在多項(xiàng)臨床試驗(yàn)中用于治療多種自身免疫性疾病。

為滿足科研人員在TSLP靶向藥物篩選中的需求，艾美捷代理的BPS Bioscience公司推出的TSLPR:TSLP [Biotinylated] Antibody Screening Chemiluminescence Assay Kit（貨號：82507）提供了一套完整、靈敏、高通量兼容的解決方案。該試劑盒專門用于篩選和表征能夠阻斷TSLP受體（TSLPR）與TSLP結(jié)合的中和抗體或阻斷劑，適用于過敏性疾病及自身免疫病治療性抗體的早期發(fā)現(xiàn)。

圖1：TSLPR機(jī)制示意圖：TSLP[生物素化]抗體篩選化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒。

96孔板涂有TSLPR蛋白。封閉后，用中和抗體對板進(jìn)行預(yù)孵育。與生物素-TSLP孵育后，洗滌板并加入鏈霉親和素-HRP。加入ELISA ECL底物，可用化學(xué)發(fā)光微孔板讀數(shù)器測量所得信號。化學(xué)發(fā)光信號與TSLPR與TSLP的結(jié)合成正比。

一、試劑盒核心組分與設(shè)計(jì)優(yōu)勢

1. 即用型完整組分，操作便捷

試劑盒提供所有必需成分：

生物素化重組人TSLP（氨基酸29-159）：保留了天然TSLP的完整受體結(jié)合表位，生物素標(biāo)記便于后續(xù)檢測。

重組人TSLPR（氨基酸25-231）：為TSLP受體的胞外結(jié)構(gòu)域，能夠與TSLP特異性結(jié)合。

鏈霉親和素-辣根過氧化物酶（Streptavidin-HRP）：用于化學(xué)發(fā)光檢測。

檢測緩沖液及洗滌緩沖液：優(yōu)化反應(yīng)條件，降低非特異性背景。

用戶無需額外準(zhǔn)備蛋白或標(biāo)記試劑，即可直接開展篩選實(shí)驗(yàn)。

2. 化學(xué)發(fā)光檢測，高靈敏度與寬動(dòng)態(tài)范圍

本試劑盒采用化學(xué)發(fā)光ELISA原理：將TSLPR蛋白包被于微孔板，加入生物素化TSLP和待測中和抗體（或阻斷劑）。如果抗體能夠阻斷TSLP與TSLPR的結(jié)合，則后續(xù)結(jié)合的Streptavidin-HRP減少，化學(xué)發(fā)光信號降低。發(fā)光強(qiáng)度與TSLP-TSLPR結(jié)合程度成正比，與中和抗體的活性成反比。

化學(xué)發(fā)光法具有背景極低、信噪比高、動(dòng)態(tài)范圍寬等優(yōu)點(diǎn)，相較于顯色法或熒光法，能夠更靈敏地檢測微弱的信號變化，尤其適用于需要精確定量IC50的中和抗體篩選實(shí)驗(yàn)。

3. 96孔板格式，支持高通量篩選

試劑盒提供96孔板格式（支持100次反應(yīng)），可與自動(dòng)化移液工作站無縫對接，實(shí)現(xiàn)中等通量至高通量篩選（HTS）。用戶可在單次實(shí)驗(yàn)中完成數(shù)十至數(shù)百個(gè)候選抗體（雜交瘤上清、噬菌體展示文庫、單克隆抗體等）的初篩，快速識別能夠阻斷TSLP-TSLPR相互作用的中和抗體。

4. 內(nèi)置陽性對照（建議自行配置）

雖然產(chǎn)品描述中未明確列出陽性對照抗體，但研究人員可使用已知的TSLP中和抗體（如tezepelumab） 作為陽性對照，以驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)體系的有效性。建議在每次實(shí)驗(yàn)中設(shè)置陽性對照孔和陰性對照孔（無抗體或無生物素化TSLP），以確保數(shù)據(jù)的可靠性。

二、檢測原理詳解

該試劑盒的檢測流程基于競爭性結(jié)合抑制原理，具體步驟如下：

1. 包被：將重組人TSLPR蛋白包被于微孔板表面。

2. 封閉：加入封閉緩沖液，阻斷非特異性結(jié)合位點(diǎn)。

3. 加樣與競爭：同時(shí)加入生物素化TSLP和梯度稀釋的待測中和抗體。待測抗體與生物素化TSLP競爭結(jié)合固相化的TSLPR。抗體濃度越高，阻斷效果越強(qiáng)，結(jié)合的生物素化TSLP越少。

4. 檢測：加入Streptavidin-HRP，后者與固相上殘留的生物素化TSLP結(jié)合。洗滌后加入化學(xué)發(fā)光底物，產(chǎn)生穩(wěn)定的發(fā)光信號。

5. 讀數(shù)與分析：使用酶標(biāo)儀讀取發(fā)光值（相對光單位，RLU）。發(fā)光值與結(jié)合的TSLP量成正比，與待測抗體的中和活性成反比。通過繪制劑量-反應(yīng)曲線，可擬合出待測抗體的IC50值。

關(guān)鍵質(zhì)量控制：設(shè)置無抗體對照孔（最大結(jié)合，即高RLU）和無關(guān)抗體對照孔（評估非特異性抑制），以確保篩選結(jié)果的特異性。

三、應(yīng)用場景與科研價(jià)值

1. 治療性中和抗體的篩選與表征

TSLP中和抗體（如tezepelumab）已在重癥哮喘治療中取得成功，但仍有大量過敏性疾病（如特應(yīng)性皮炎、慢性鼻竇炎伴鼻息肉、嗜酸性粒細(xì)胞性食管炎）對TSLP靶向治療有迫切需求。利用該試劑盒，研究人員可以：

從雜交瘤文庫、噬菌體展示文庫或單個(gè)B細(xì)胞篩選平臺中快速識別能夠阻斷TSLP-TSLPR相互作用的抗體克隆。

對陽性克隆進(jìn)行親和力成熟和表位競爭分析，比較不同克隆的阻斷效力。

測定候選抗體的IC50和EC50，為后續(xù)體內(nèi)藥效研究提供劑量依據(jù)。

2. 小分子TSLP/TSLPR阻斷劑的篩選

除了單克隆抗體，小分子化合物、環(huán)肽或核酸適配體也可作為TSLP-TSLPR相互作用的阻斷劑。該試劑盒同樣適用于小分子抑制劑的篩選——只需將待測化合物替代抗體加入反應(yīng)體系，通過化學(xué)發(fā)光信號的降低來評估化合物的阻斷活性。由于化學(xué)發(fā)光法不受化合物自發(fā)熒光干擾，特別適用于含有熒光基團(tuán)的小分子庫篩選。

3. 過敏性疾病機(jī)制研究

TSLP不僅由上皮細(xì)胞產(chǎn)生，還受到多種細(xì)胞因子的調(diào)控。利用該試劑盒，研究人員可以：

評估不同細(xì)胞因子或環(huán)境因素對TSLP-TSLPR結(jié)合活性的影響（例如，通過檢測細(xì)胞上清中TSLP的“有效阻斷濃度”）。

分析TSLP基因突變體（如與過敏性疾病相關(guān)的SNP）與TSLPR結(jié)合能力的變化。

篩選能夠下調(diào)TSLP表達(dá)或阻斷其與受體結(jié)合的天然產(chǎn)物或化合物。

4. 聯(lián)合用藥策略評估

TSLP信號通路與其他炎癥通路（如IL-4、IL-13、IL-25）存在交叉調(diào)控。利用該試劑盒，可以評估TSLP中和抗體與其他靶點(diǎn)藥物（如IL-4Rα抗體dupilumab）聯(lián)用對TSLP-TSLPR結(jié)合的影響，為聯(lián)合用藥方案的設(shè)計(jì)提供分子層面的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

四、技術(shù)參數(shù)與操作要點(diǎn)

規(guī)格與儲(chǔ)存

檢測格式：化學(xué)發(fā)光ELISA（96孔板）。

物種：人源。

靶點(diǎn)：TSLP 與 TSLPR（CRLF2）。

運(yùn)輸溫度：-80°C（干冰）。

穩(wěn)定性：按照指示儲(chǔ)存（各組分保存條件詳見說明書），試劑盒在收貨后6個(gè)月內(nèi)保持最佳性能。

監(jiān)管狀態(tài)：僅限研究使用（Research Use Only），不可用于臨床診斷。

操作流程概述（典型步驟）

1. 包被：將TSLPR蛋白稀釋于包被緩沖液，加入微孔板，4°C過夜。

2. 封閉：棄去包被液，加入封閉緩沖液，室溫孵育1小時(shí)。

3. 洗滌：使用洗滌緩沖液洗板3次。

4. 加樣：同時(shí)加入生物素化TSLP（工作濃度參見說明書）和梯度稀釋的待測抗體（或化合物），室溫孵育1-2小時(shí)。

5. 洗滌：洗板3次。

6. 檢測：加入Streptavidin-HRP，室溫孵育30分鐘；洗滌后加入化學(xué)發(fā)光底物，立即使用酶標(biāo)儀讀取發(fā)光值。

7. 數(shù)據(jù)分析：計(jì)算抑制率 =（1 - 樣品RLU / 無抗體對照RLU）× 100%，使用非線性回歸擬合IC50曲線。