PCR，即聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR），是一種用于放大擴(kuò)增特定的DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)。說(shuō)起PCR的擴(kuò)增原理，想必大家都知道，這里小編也不再贅述。PCR說(shuō)容易也容易，說(shuō)難也難，可怕的不是P不出來(lái)，而是P不出來(lái)還找不到原因，想到曾經(jīng)無(wú)數(shù)個(gè)為此焦心的日夜，小編的心到現(xiàn)在還為之顫抖~

        PCR的時(shí)候，你是否還在費(fèi)心的準(zhǔn)備冰盒，是否還在擔(dān)憂會(huì)否因?yàn)槭覝靥邔?dǎo)致酶活降低甚至失效，今天小編為大家mark一家專門且只提供PCR相關(guān)試劑的供應(yīng)商——Solis BioDyne，為你解開這些煩憂。Solis BioDyne運(yùn)用獨(dú)特的蛋白質(zhì)穩(wěn)定技術(shù)，確保其PCR試劑具有極高的穩(wěn)定性，即便是在室溫條件下放置1個(gè)月，酶活也絲毫不受影響，而且不管你做的是哪種PCR技術(shù)，Solis BioDyne都能滿足你的需求。

• 終點(diǎn)PCR(End point PCR,PCR)

        顧名思義既是對(duì)PCR擴(kuò)增反應(yīng)的終產(chǎn)物進(jìn)行定性及定量分析，因?yàn)槠湓诜磻?yīng)過程中無(wú)法監(jiān)測(cè)反應(yīng)進(jìn)行情況，只有反應(yīng)完成后通過跑膠得到結(jié)果,也稱常規(guī)PCR。通常在常規(guī)PCR反應(yīng)中，反應(yīng)體系各成分是一次性加入并進(jìn)入循環(huán)，極易發(fā)生引物錯(cuò)配和二聚體的形成，繼而導(dǎo)致非特異性產(chǎn)物的擴(kuò)增。而升級(jí)后的熱啟動(dòng)PCR技術(shù)可以有效地解決這一問題，熱啟動(dòng)通過各種物理化學(xué)方法控制PCR的必須成分，通常是DNA聚合酶，直到反應(yīng)混合物被加熱到可以阻止非特異性引導(dǎo)和引物聚合的溫度后，再啟動(dòng)PCR來(lái)達(dá)到有效擴(kuò)增特異性PCR產(chǎn)物的目的。

• 定量PCR（Quantitative PCR, Q-PCR）

        通過對(duì)PCR擴(kuò)增反應(yīng)中的每一個(gè)循環(huán)產(chǎn)物熒光信號(hào)的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)從而實(shí)現(xiàn)對(duì)其實(shí)模板的定性及定量分析。目前它主要通過兩種方式——熒光染料或者熒光標(biāo)記的探針對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記跟蹤，實(shí)時(shí)在線監(jiān)控反應(yīng)過程，并結(jié)合相應(yīng)的軟件對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行分析，計(jì)算待測(cè)樣品模板的初始濃度。

        熒光染料：在傳統(tǒng)PCR反應(yīng)體系中，加入過量熒光染料，該染料只與雙鏈DNA小溝結(jié)合的染料，并不與單鏈DNA鏈結(jié)合，而且在游離狀態(tài)不發(fā)出熒光，只有摻入DNA雙鏈中才可以發(fā)光，因此，在PCR體系中，隨著特異性PCR產(chǎn)物的指數(shù)擴(kuò)增，每個(gè)循環(huán)的延伸階段，染料摻入雙鏈DNA中，其熒光信號(hào)強(qiáng)度與PCR產(chǎn)物的數(shù)量呈正相關(guān)。下圖以SYBR Green I染料為例：.

        探針法：PCR擴(kuò)增時(shí)在加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5'－3'外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物形成完全同步。再通過實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程熒光信號(hào)的積累，與標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)比進(jìn)行定量分析。下圖以TaqMan探針為例：

• 反轉(zhuǎn)錄PCR（Reverse TranscriptionPCR, RT-PCR）

        RT-PCR是一種將cDNA合成與PCR技術(shù)結(jié)合分析基因表達(dá)的快速靈敏的方法，主要用于對(duì)表達(dá)信息進(jìn)行檢測(cè)或定量分析。在實(shí)際應(yīng)用中，RT—PCR又常常分為一步法RT-PCR和兩步法RT-PCR。

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