一、產(chǎn)品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的本品為針對人p73蛋白的兔源多克隆抗體（貨號：A300-126A），經(jīng)抗原親和純化，適用于免疫沉淀（IP）及Western Blot（WB）檢測。p73是p53家族的重要成員，與p53及p63在結(jié)構(gòu)和功能上高度相關(guān)，但各自承擔(dān)獨特的生物學(xué)角色。p73參與DNA損傷誘導(dǎo)的細胞凋亡應(yīng)答，并在基因反式激活和生長抑制中發(fā)揮關(guān)鍵作用。本抗體特異性識別p73蛋白的N末端區(qū)域，可檢測除ΔNp73外的多種p73亞型。

二、關(guān)鍵規(guī)格參數(shù)

參數(shù) | 詳細信息

靶標 | p73（TP73）

反應(yīng)性 | 人

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

免疫原 | 人p73蛋白第1至50位氨基酸之間的區(qū)域（實際表位位于1-62）

亞型 | IgG

純化方式 | 抗原親和純化

濃度 | 1000 ?g/ml

存儲條件 | 2 - 8 °C

保質(zhì)期 | 收貨后1年

緩沖液 | Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液，pH 7-8，含0.09%疊氮化鈉

三、免疫原與特異性識別

3.1 表位定位

本抗體識別的表位位于人p73蛋白第1至62位氨基酸殘基之間（參考Swiss-Prot條目O15350，GeneID 7161）。該區(qū)域?qū)?yīng)p73蛋白的N端轉(zhuǎn)錄激活域（Transactivation domain, TAD），是p73發(fā)揮轉(zhuǎn)錄因子功能的核心結(jié)構(gòu)域。

3.2 亞型識別譜

p73基因通過可變剪接產(chǎn)生多種亞型。經(jīng)驗證，本抗體可識別以下全長亞型：

α、β、γ、δ、ε、ζ、κ 亞型

不識別：ΔNp73（N末端截短亞型，缺乏轉(zhuǎn)錄激活域）。這一特性使本抗體成為區(qū)分全長p73與顯性負性抑制亞型ΔNp73的理想工具。

3.3 特異性說明

抗體通過固相載體上固定的p73特異性表位進行親和純化，確保高特異性和低背景。免疫球蛋白濃度采用比爾定律測定（1 mg/mL IgG在A280處吸光度為1.4）。

預(yù)期交叉反應(yīng)：基于序列同源性分析，本抗體不與p53或p63發(fā)生交叉反應(yīng)。建議用戶在使用時設(shè)置相應(yīng)的陰性對照以驗證。

四、應(yīng)用方法與推薦條件

4.1 Western Blot（WB）

參數(shù) | 條件

稀釋比例 | 1:2000 - 1:10,000

封閉/稀釋液 | 5% 脫脂牛奶-TBST

一抗孵育 | 過夜孵育

二抗 | 山羊抗兔IgG重鏈和輕鏈抗體（貨號A120-101P）

操作提示：

陽性對照：推薦使用人細胞系裂解液，如HCT116（p53野生型，p73表達水平中等）、SJSA-1或U2OS。DNA損傷劑（如阿霉素、依托泊苷、順鉑）處理可誘導(dǎo)p73表達上調(diào)。

預(yù)期條帶：全長p73α亞型分子量約為73-75 kDa；其他亞型因剪接差異分子量有所不同（β約68 kDa，γ約55 kDa等）。有時可觀察到多條帶，代表不同亞型或磷酸化修飾形式。

起始稀釋度：建議從1:2000開始，根據(jù)信號強度優(yōu)化至1:5000-1:10000。

樣品制備：使用含蛋白酶抑制劑的RIPA緩沖液裂解細胞。p73為核蛋白，建議進行核質(zhì)分離或使用超聲輔助裂解以提高提取效率。

4.2 免疫沉淀（IP）

參數(shù) | 條件

推薦用量 | 6 ?g 抗體 / mg 細胞裂解蛋白

操作提示：

使用非變性裂解緩沖液（如含150 mM NaCl、1% NP-40、50 mM Tris-HCl pH 7.4）以保持蛋白-蛋白相互作用。

每mg總蛋白加入6 ?g抗體，4°C旋轉(zhuǎn)孵育2-4小時或過夜。

加入蛋白A/G磁珠或瓊脂糖珠，繼續(xù)孵育1-2小時。

洗滌3-5次后，加入SDS-PAGE上樣緩沖液，煮沸變性。

IP產(chǎn)物WB檢測的特殊要求：當對免疫沉淀復(fù)合物進行WB分析時，必須使用抗兔IgG輕鏈HRP結(jié)合抗體（而非普通抗兔IgG H+L），以避免IP抗體的重鏈信號（約50 kDa）干擾目標蛋白檢測。同時，在封閉液中添加5%正常豬血清（貨號S100-020）可進一步降低非特異性背景。

4.3 功能研究應(yīng)用

由于本抗體識別N端轉(zhuǎn)錄激活域，可用于：

檢測全長p73與ΔNp73的比例：結(jié)合特異性識別ΔNp73的抗體（如C端抗體）進行平行分析。

分析p73的轉(zhuǎn)錄激活活性：通過ChIP-qPCR或報告基因?qū)嶒灺?lián)合使用。

研究p73與p53的協(xié)同作用：在DNA損傷應(yīng)答中，p73可補償p53功能缺失。

五、存儲與穩(wěn)定性

存儲溫度：2 - 8°C，請勿冷凍。高濃度（1000 ?g/ml）配方在冷藏條件下極為穩(wěn)定。若長期不使用，可分裝后保存于-20°C或-80°C，但需避免反復(fù)凍融。

保質(zhì)期：收貨后1年內(nèi)保持完整活性。

防腐劑：含0.09%疊氮化鈉，可抑制微生物污染。若下游應(yīng)用涉及HRP檢測（如WB中使用HRP二抗），疊氮化鈉會抑制過氧化物酶活性，需通過透析或脫鹽柱去除。對于IP實驗，疊氮化鈉通常不影響抗體與蛋白A/G的結(jié)合。

緩沖液體系：Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液（pH 7-8），兼容多數(shù)免疫檢測體系。

本產(chǎn)品適用于p53家族生物學(xué)、DNA損傷應(yīng)答、細胞凋亡機制及腫瘤耐藥性等相關(guān)研究領(lǐng)域。