一、產(chǎn)品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的本品為兔源抗XRN1多克隆抗體（貨號：A300-443A），經(jīng)抗原親和純化制備，以未標記的完整IgG形式提供。該抗體特異性識別人和小鼠來源的XRN1蛋白（5′→3′ 核糖核酸外切酶1），適用于免疫沉淀（IP）和蛋白質(zhì)印跡（WB）應用，是研究細胞質(zhì)mRNA代謝、mRNP復合物功能以及骨肉瘤腫瘤抑制機制的重要工具。

二、核心產(chǎn)品參數(shù)

參數(shù)項目 | 具體規(guī)格

靶標蛋白 | XRN1

反應種屬 | 小鼠、人

宿主來源 | 兔

克隆類型 | 多克隆

抗體形式 | 完整IgG

免疫原區(qū)域 | 第1656位至C末端

抗體亞型 | IgG

標記類型 | 未標記

純化方式 | 抗原親和純化

抗原種屬 | 人

工作濃度 | 1000 ?g/ml（1 mg/ml）

保存溫度 | 2 - 8 °C

有效期 | 自收貨之日起1年

緩沖體系 | Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液，pH 7–8，含0.09%疊氮化鈉

三、推薦應用與實驗條件

3.1 應用稀釋度匯總

應用技術 | 推薦用量/稀釋度 | 備注

免疫沉淀（IP） | 6 ?g / mg 裂解物 | 每毫克總蛋白使用6微克抗體

蛋白質(zhì)印跡（WB） | 1:2000 - 1:10,000 | 建議從1:2000起始優(yōu)化

3.2 蛋白質(zhì)印跡（WB）專用實驗條件

通用條件：

封閉液及抗體稀釋液：5% 牛奶-TBST

一抗孵育方式：過夜孵育（不可縮短）

細胞裂解物Western Blot：

推薦二抗：山羊抗兔IgG重鏈和輕鏈抗體（貨號A120-101P）

免疫沉淀產(chǎn)物的Western Blot：

推薦二抗：抗兔IgG輕鏈HRP標記抗體

封閉液補充：需添加5%正常豬血清（貨號S100-020）

*重要提示：使用輕鏈特異性二抗可避免免疫沉淀實驗中抗體重鏈（約55 kDa）的交叉檢測干擾。XRN1分子量約為220 kDa，與重鏈信號距離較遠，但采用此標準仍有助于獲得最佳信噪比。

四、生產(chǎn)與純化工藝

4.1 親和純化

采用固定于固相載體上的XRN1特異性表位進行親和層析純化，確保抗體針對C末端區(qū)域具有高特異性和親和力。

4.2 濃度測定

免疫球蛋白濃度采用比爾定律（Beer’s Law）測定，計算依據(jù)為：1 mg/ml IgG溶液在280 nm波長處的吸光度值為1.4。本產(chǎn)品濃度為1000 ?g/ml（1 mg/ml），屬于高濃度抗體，適合需要高靈敏度的IP實驗。

五、儲存與穩(wěn)定性

推薦儲存條件：2°C至8°C冷藏，切勿冷凍（冷凍會導致蛋白變性及抗體活性喪失）

有效期：自收貨之日起1年

緩沖液成分：Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液，pH 7–8，含0.09%疊氮化鈉作為防腐劑

pH范圍：7–8的寬泛pH范圍提供了良好的緩沖穩(wěn)定性

運輸建議：冷藏運輸，避免反復溫度波動

別名信息：

5′-3′ exoribonuclease 1；SEP1；strand-exchange protein 1 homolog

*注釋：“SEP1”源于酵母同源物鏈交換蛋白1的命名；“Dhm2”為小鼠同源物的名稱。*

六、使用注意事項

1. 疊氮化鈉警示：緩沖液含0.09%疊氮化鈉，該化合物具毒性，操作時請佩戴手套和護目鏡，避免接觸皮膚或吸入氣溶膠。

2. 高濃度特性：本抗體濃度為1000 ?g/ml（1 mg/ml），屬于高濃度制劑。進行IP實驗時按6 ?g/mg裂解物用量吸取少量即可，建議使用低吸附吸頭以提高移液準確性。

3. IP用量計算：推薦用量為6 ?g抗體/mg總蛋白裂解物。示例：若細胞裂解物總蛋白為2 mg，則需加入12 ?g抗體（即12 ?l，因濃度為1 ?g/?l）。

4. 二抗選擇：

檢測細胞裂解物WB時，可使用識別重鏈和輕鏈的二抗（如A120-101P）

檢測IP產(chǎn)物WB時，建議使用抗兔IgG輕鏈HRP標記抗體，并添加5%正常豬血清以降低非特異性背景。XRN1分子量較大（約220 kDa），與抗體重鏈（約55 kDa）無重疊，但使用輕鏈特異性二抗可消除潛在的降解產(chǎn)物干擾。

5. 過夜孵育要求：WB實驗中一抗需過夜孵育（建議4°C緩慢搖動），請勿縮短至室溫1–2小時。XRN1分子量大且豐度相對較低，過夜孵育對獲得清晰信號至關重要。

6. 反應種屬確認：本經(jīng)驗證可識別人和小鼠XRN1。對于大鼠等其他物種，建議通過序列比對評估交叉反應可能性，并進行預實驗驗證。

7. 陽性對照推薦：建議使用HeLa、HEK293T或小鼠NIH/3T3細胞裂解物作為陽性對照。XRN1在這些細胞系中普遍表達，預期在220 kDa附近檢測到特異性條帶。

8. 酶活性相關注意事項：XRN1是一種RNA降解酶，在制備細胞裂解物時應注意使用RNase抑制劑，以防止內(nèi)源性XRN1在實驗過程中降解RNA并可能影響其與其他蛋白的相互作用。

*本說明書基于產(chǎn)品特性研究編寫，使用者應結合具體實驗體系進行優(yōu)化驗證。