一、產(chǎn)品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的本品為兔源抗Lasu1/Ureb1（HUWE1）多克隆抗體（貨號：A300-486A），經(jīng)抗原親和純化制備，以未標(biāo)記的完整IgG形式提供。該抗體特異性識別人類HUWE1蛋白（一種HECT結(jié)構(gòu)域E3泛素連接酶），適用于免疫組織化學(xué)（IHC）、免疫沉淀（IP）和蛋白質(zhì)印跡（WB）應(yīng)用，是研究組蛋白修飾、細(xì)胞周期調(diào)控、凋亡及精子發(fā)生中泛素化降解機制的重要工具。

二、核心產(chǎn)品參數(shù)

參數(shù)項目 | 具體規(guī)格

靶標(biāo)蛋白 | Lasu1 / Ureb1（HUWE1）

反應(yīng)種屬 | 人

宿主來源 | 兔

克隆類型 | 多克隆

抗體形式 | 完整IgG

免疫原區(qū)域 | 第2275–2325位氨基酸

抗體亞型 | IgG

標(biāo)記類型 | 未標(biāo)記

純化方式 | 抗原親和純化

抗原種屬 | 人

工作濃度 | 1000 ?g/ml（1 mg/ml）

保存溫度 | 2 - 8 °C

有效期 | 自收貨之日起1年

緩沖體系 | Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液，pH 7–8，含0.09%疊氮化鈉

三、推薦應(yīng)用與實驗條件

3.1 應(yīng)用稀釋度匯總

應(yīng)用技術(shù) | 推薦用量/稀釋度 | 備注

免疫組織化學(xué)（IHC） | 1:1000 - 1:5000 | 福爾馬林固定石蠟包埋切片推薦使用檸檬酸緩沖液pH 6.0進(jìn)行抗原修復(fù)

免疫沉淀（IP） | 6 ?g / mg 裂解物 | 每毫克總蛋白使用6微克抗體

蛋白質(zhì)印跡（WB） | 1:2000 - 1:10,000 | 推薦使用3-8% Tris-醋酸酯凝膠

3.2 蛋白質(zhì)印跡（WB）專用實驗條件

通用條件：

封閉液及抗體稀釋液：5% 牛奶-TBST

一抗孵育方式：過夜孵育（不可縮短）

細(xì)胞裂解物Western Blot：

推薦二抗：山羊抗兔IgG重鏈和輕鏈抗體（貨號A120-101P）

免疫沉淀產(chǎn)物的Western Blot：

推薦二抗：抗兔IgG輕鏈HRP標(biāo)記抗體

封閉液補充：需添加5%正常豬血清（貨號S100-020）

*重要提示：使用輕鏈特異性二抗可避免免疫沉淀實驗中抗體重鏈（約55 kDa）的交叉檢測干擾。HUWE1分子量極大（約530 kDa），重鏈信號不直接影響目標(biāo)位置，但仍建議遵循此標(biāo)準(zhǔn)以獲得最佳信噪比。

3.3 免疫組織化學(xué)（IHC）特別說明

推薦使用檸檬酸緩沖液（pH 6.0）進(jìn)行熱誘導(dǎo)抗原修復(fù)

適用樣本類型：福爾馬林固定、石蠟包埋（FFPE）組織切片

建議設(shè)置陽性和陰性對照以驗證特異性

四、生產(chǎn)與純化工藝

4.1 親和純化

采用固定于固相載體上的Ureb1/Lasu1特異性表位進(jìn)行親和層析純化，確保抗體針對目標(biāo)區(qū)域具有高特異性和親和力。

4.2 濃度測定

免疫球蛋白濃度采用比爾定律（Beer’s Law）測定，計算依據(jù)為：1 mg/ml IgG溶液在280 nm波長處的吸光度值為1.4。本產(chǎn)品濃度為1000 ?g/ml（1 mg/ml），屬于高濃度抗體，適合需要高抗體投入量的IP實驗。

五、儲存與穩(wěn)定性

推薦儲存條件：2°C至8°C冷藏，切勿冷凍（冷凍會導(dǎo)致蛋白變性及抗體活性喪失）

有效期：自收貨之日起1年

緩沖液成分：Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液，pH 7–8，含0.09%疊氮化鈉作為防腐劑

pH范圍：7–8的寬泛pH范圍提供了良好的緩沖穩(wěn)定性

運輸建議：冷藏運輸，避免反復(fù)溫度波動

六、使用注意事項

1. 疊氮化鈉警示：緩沖液含0.09%疊氮化鈉，操作時請佩戴手套和護(hù)目鏡，避免接觸皮膚或吸入氣溶膠。

2. 高濃度特性：本抗體濃度為1000 ?g/ml（1 mg/ml），屬于高濃度制劑。進(jìn)行IP實驗時按6 ?g/mg裂解物用量吸取少量即可，建議使用低吸附吸頭以提高移液準(zhǔn)確性。

3. IP用量計算：推薦用量為6 ?g抗體/mg總蛋白裂解物。示例：若細(xì)胞裂解物總蛋白為2 mg，則需加入12 ?g抗體（即12 ?l）。

4. WB凝膠選擇關(guān)鍵：HUWE1分子量極大（約530 kDa），常規(guī)SDS-PAGE系統(tǒng)難以有效分離。必須使用3-8% Tris-醋酸酯凝膠或類似適用于大分子量蛋白的凝膠體系。使用常規(guī)Tris-甘氨酸凝膠可能導(dǎo)致蛋白無法進(jìn)入分離膠或遷移異常。

5. IHC抗原修復(fù)要求：對于FFPE組織切片，務(wù)必進(jìn)行檸檬酸緩沖液（pH 6.0）熱誘導(dǎo)抗原修復(fù)。省略修復(fù)步驟可能導(dǎo)致信號丟失或背景增高。

6. 二抗選擇：

檢測細(xì)胞裂解物WB時，可使用識別重鏈和輕鏈的二抗（如A120-101P）

檢測IP產(chǎn)物WB時，建議使用抗兔IgG輕鏈HRP標(biāo)記抗體，并添加5%正常豬血清以降低非特異性背景。

7. 過夜孵育要求：WB和IHC實驗中一抗均需過夜孵育（WB為4°C，IHC為4°C或室溫，建議優(yōu)化）。HUWE1分子量大且豐度相對較低，過夜孵育對獲得清晰信號至關(guān)重要。

8. 陽性對照推薦：建議使用HeLa、HEK293T或U2OS細(xì)胞裂解物作為WB陽性對照。IHC陽性對照可使用人睪丸組織或某些腫瘤組織切片，已知HUWE1在生殖細(xì)胞和部分癌細(xì)胞中高表達(dá)。