一、產(chǎn)品概述

DDX6（DEAD-box解旋酶6）是DEAD-box蛋白家族成員之一，該家族蛋白含有多個(gè)保守基序，其中包括高度保守的DEAD（天冬氨酸-谷氨酸-丙氨酸-天冬氨酸）氨基酸序列基序。DEAD-box蛋白的主要功能是作為ATP依賴性RNA解旋酶，在前體mRNA剪接、RNA合成、RNA降解、RNA輸出、RNA翻譯、RNA二級(jí)結(jié)構(gòu)形成、核糖體生物發(fā)生以及核糖核蛋白（RNP）復(fù)合物組裝等RNA代謝與功能的各個(gè)環(huán)節(jié)中發(fā)揮重要作用。研究表明，DDX6通過在翻譯水平調(diào)控基因表達(dá)，正向調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)。

本文介紹的由艾美捷代理Bethyl Laboratories推出的A300-460A型兔抗DDX6多克隆抗體（貨號(hào)A300-460A）由美國(guó)生產(chǎn)，經(jīng)抗原親和純化，適用于小鼠及人源樣本的免疫組化（IHC）、免疫沉淀（IP）和免疫印跡（WB）檢測(cè)。

二、核心規(guī)格參數(shù)

參數(shù) | 詳細(xì)信息

靶標(biāo) | DDX6（DEAD-box解旋酶6）

反應(yīng)性 | 小鼠，人

應(yīng)用 | IHC, IP, WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 全I(xiàn)gG

免疫原 | 人DDX6蛋白第1–50位氨基酸（N末端）

同型 | IgG

標(biāo)記 | 非偶聯(lián)

純度 | 抗原親和純化

抗原物種 | 人

濃度 | 200 ug/ml

儲(chǔ)存條件 | 2 - 8 °C

保質(zhì)期 | 收貨后1年

緩沖液 | Tris緩沖鹽水，含0.1% BSA及0.09%疊氮化鈉

三、免疫原與識(shí)別表位

本抗體采用表位特異性親和純化工藝制備。將針對(duì)DDX6蛋白N末端區(qū)域的特異性表位固定在固相支持物上，從抗血清中親和捕獲并純化特異性抗體。

A300-460A所識(shí)別的表位位于人DDX6蛋白第1位至第50位氨基酸（N末端區(qū)域）。編號(hào)依據(jù)Swiss-Prot數(shù)據(jù)庫(kù)條目P26196（GeneID 1656）。選擇N末端區(qū)域作為免疫原，可有效避免與其它DEAD-box家族成員（其保守區(qū)域主要位于中部和C末端）的交叉反應(yīng)，從而提高抗體的特異性。

四、濃度測(cè)定方法

免疫球蛋白濃度采用比爾定律測(cè)定。標(biāo)準(zhǔn)條件下，1 mg/mL IgG在280 nm波長(zhǎng)處的吸光度（A280）為1.4。本抗體濃度為200 ug/ml（即0.2 mg/ml），使用時(shí)需根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要計(jì)算相應(yīng)體積。

五、應(yīng)用與實(shí)驗(yàn)條件

通用說明

所有免疫印跡實(shí)驗(yàn)均采用5%脫脂牛奶-TBST作為封閉液及抗體稀釋液。一抗孵育條件為過夜孵育（推薦4°C）。

推薦稀釋比例與用量

應(yīng)用 | 推薦稀釋比例/用量 | 特殊說明

免疫組化（IHC） | 1:100 - 1:500 | 推薦使用Tris-EDTA緩沖液（pH 9.0）進(jìn)行抗原修復(fù)（FFPE組織切片）

免疫沉淀（IP） | 6 ug/mg 裂解物 | 按抗體質(zhì)量計(jì)算，體積需相應(yīng)調(diào)整

免疫印跡（WB） | 1:5000 - 1:15000 | 較寬的工作范圍，建議從1:5000開始優(yōu)化

六、二抗選擇說明

細(xì)胞裂解物免疫印跡：

使用山羊抗兔IgG重鏈和輕鏈抗體（貨號(hào)A120-101P）。該二抗可同時(shí)識(shí)別兔IgG的重鏈和輕鏈。

免疫沉淀產(chǎn)物的免疫印跡：

使用抗兔IgG輕鏈HRP偶聯(lián)抗體，并在封閉緩沖液中添加5%正常豬血清（貨號(hào)S100-020）。免疫沉淀后樣本經(jīng)變性處理會(huì)釋放抗體的重鏈（約55 kDa）和輕鏈（約25 kDa）。采用輕鏈特異性二抗可有效消除重鏈信號(hào)的干擾，提高目標(biāo)蛋白（DDX6分子量約54 kDa）的檢測(cè)靈敏度。值得注意的是，DDX6的分子量（54 kDa）與抗體輕鏈（25 kDa）和重鏈（55 kDa）均有重疊，尤其是重鏈信號(hào)可能完全掩蓋DDX6條帶。因此，在檢測(cè)免疫沉淀產(chǎn)物中的DDX6時(shí)，強(qiáng)烈建議使用抗兔輕鏈特異性二抗，以避免重鏈干擾。

七、產(chǎn)品使用與儲(chǔ)存

儲(chǔ)存注意事項(xiàng)

抗體應(yīng)儲(chǔ)存于2 - 8°C，請(qǐng)勿冷凍。反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致抗體聚集和活性下降。本抗體緩沖液中含有0.1% BSA作為穩(wěn)定蛋白，以及0.09%疊氮化鈉作為防腐劑。

穩(wěn)定性與保質(zhì)期

自收貨之日起，在推薦的儲(chǔ)存條件下保質(zhì)期為1年。因濃度較低（200 ug/ml），建議分裝保存，避免多次開蓋導(dǎo)致的污染和蒸發(fā)。

濃度特別提醒

與其他常見抗體（如1000 ug/ml）相比，本抗體濃度較低，使用時(shí)需注意：

免疫沉淀：推薦用量為6 ug抗體/mg裂解物。以200 ug/ml濃度計(jì)算，每mg裂解物需加入30 ul抗體。

免疫印跡：以1:5000稀釋度為例，需將1 ul抗體稀釋至5 ml抗體稀釋液中。以1:15000稀釋度計(jì)算，1 ul抗體可稀釋至15 ml，經(jīng)濟(jì)性良好。

八、質(zhì)量控制

每批次產(chǎn)品均經(jīng)過抗原親和純化驗(yàn)證，確保抗體特異性。生產(chǎn)過程中使用固定于固相支持物上的DDX6 N末端特異性表位（第1-50位氨基酸）進(jìn)行純化。建議用戶在使用新批次時(shí)進(jìn)行稀釋梯度驗(yàn)證（尤其是WB和IHC），以確定最佳工作濃度。因本抗體濃度較低，建議收貨后立即分裝為單次使用量（如5-10 ul/管），避免反復(fù)凍融及污染。

別名：

ATP依賴性RNA解旋酶p54、DEAD-box解旋酶6、DEAD-box蛋白6、HLR2、原癌基因RCK、P54