一、產(chǎn)品概述

V5標(biāo)簽是一種由14個(gè)氨基酸殘基組成的短肽標(biāo)簽，序列為GKPIPNPLLGLDST，源自猴副流感病毒5型（Simian virus 5）RNA聚合酶α亞基。作為一種表位標(biāo)簽，V5標(biāo)簽具有分子量小（約1.4 kDa）、免疫原性低、不易干擾融合蛋白天然構(gòu)象和功能的優(yōu)點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于重組蛋白的檢測(cè)、純化及定位研究。與其它常用標(biāo)簽（如FLAG、HA、c-Myc）相比，V5標(biāo)簽尤其適合用于需要維持蛋白天然活性的實(shí)驗(yàn)體系。

本文介紹艾美捷代理Bethyl Laboratories推出的兔抗V5標(biāo)簽抗體親和純化（貨號(hào)：A190-120A），適用于酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）、免疫細(xì)胞化學(xué)（ICC）、免疫沉淀（IP）及免疫印跡（WB）等多種檢測(cè)平臺(tái)。

二、核心規(guī)格參數(shù)

參數(shù) | 詳細(xì)信息

靶標(biāo) | V5標(biāo)簽（GKPIPNPLLGLDST）

應(yīng)用 | ELISA, ICC, IP, WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 全I(xiàn)gG

同型 | IgG

標(biāo)記 | 非偶聯(lián)

純度 | 抗原親和純化

濃度 | 1 mg/ml

儲(chǔ)存條件 | 2 - 8 °C

保質(zhì)期 | 收貨后1年

緩沖液 | 磷酸鹽緩沖液（PBS），含0.09%疊氮化鈉

三、免疫原與生產(chǎn)工藝

免疫原設(shè)計(jì)

本抗體采用合成肽作為免疫原。該合成肽對(duì)應(yīng)V5標(biāo)簽的全長(zhǎng)氨基酸序列，即猴副流感病毒5型RNA聚合酶α亞基的第95至108位殘基（序列：GKPIPNPLLGLDST）。為提高免疫原性，該合成肽與匙孔血藍(lán)蛋白（KLH）進(jìn)行化學(xué)交聯(lián)偶聯(lián)，隨后用于兔免疫。

純化方法

抗血清經(jīng)采集后，通過親和層析法純化。將V5標(biāo)簽合成肽固定在固相支持物上，從抗血清中特異性捕獲識(shí)別V5標(biāo)簽的抗體，經(jīng)洗脫后獲得高純度、高特異性的多克隆抗體。此工藝有效去除了不識(shí)別V5標(biāo)簽的非特異性IgG，確保抗體在各類應(yīng)用中的低背景和高信噪比。

濃度測(cè)定

免疫球蛋白濃度采用比爾定律測(cè)定。標(biāo)準(zhǔn)條件下，1 mg/mL IgG在280 nm波長(zhǎng)處的吸光度（A280）為1.4。本抗體濃度為1 mg/ml。對(duì)于酶偶聯(lián)物（如HRP標(biāo)記版本），酶/抗體蛋白的摩爾比為4:1（本產(chǎn)品為非偶聯(lián)版本，此信息供參考）。

四、應(yīng)用與實(shí)驗(yàn)條件

重要提示

并非所有列出的應(yīng)用均已在本實(shí)驗(yàn)室經(jīng)過具體測(cè)試。用戶需根據(jù)自身實(shí)驗(yàn)體系進(jìn)行優(yōu)化和驗(yàn)證。以下推薦條件基于產(chǎn)品說明及行業(yè)通用經(jīng)驗(yàn)。

通用說明

所有免疫印跡實(shí)驗(yàn)均采用5%脫脂牛奶-TBST作為封閉液及抗體稀釋液。一抗孵育條件為過夜孵育（推薦4°C）。

推薦稀釋比例與用量

應(yīng)用 | 推薦稀釋比例/用量 | 說明

ELISA | 1:1000 - 1:30000（檢測(cè)用）；1:100 - 1:500（包板用） | 作為檢測(cè)抗體時(shí)，建議從1:5000開始優(yōu)化；作為包被抗體時(shí)，用PBS稀釋后包被ELISA板

免疫細(xì)胞化學(xué)（ICC） | 1:100 - 1:400 | 建議使用4%多聚甲醛固定細(xì)胞，0.1% Triton X-100透化

免疫沉淀（IP） | 1 - 4 ?g/mg 裂解物 | 具體用量取決于V5標(biāo)簽融合蛋白的表達(dá)水平

免疫印跡（WB） | 1:1000 - 1:30000 | 建議從1:5000開始進(jìn)行梯度預(yù)實(shí)驗(yàn)

五、二抗選擇說明

細(xì)胞裂解物免疫印跡：

使用山羊抗兔IgG重鏈和輕鏈抗體（貨號(hào)A120-101P）。該二抗可同時(shí)識(shí)別兔IgG的重鏈和輕鏈，適用于檢測(cè)總IgG信號(hào)。

免疫沉淀產(chǎn)物的免疫印跡：

使用抗兔IgG輕鏈HRP偶聯(lián)抗體，并在封閉緩沖液中添加5%正常豬血清（貨號(hào)S100-020）。采用輕鏈特異性二抗可有效避免免疫沉淀中抗體重鏈（約55 kDa）信號(hào)的干擾，尤其當(dāng)目標(biāo)融合蛋白分子量接近55 kDa時(shí)尤為重要。

六、產(chǎn)品使用與儲(chǔ)存

儲(chǔ)存注意事項(xiàng)

抗體應(yīng)儲(chǔ)存于2 - 8°C，請(qǐng)勿冷凍。反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致抗體聚集和活性下降。緩沖液為PBS，含0.09%疊氮化鈉作為防腐劑。

穩(wěn)定性與保質(zhì)期

自收貨之日起，在推薦的儲(chǔ)存條件下保質(zhì)期為1年。建議分裝為單次使用量?jī)?chǔ)存于2-8°C，避免反復(fù)開蓋引入污染。

七、V5標(biāo)簽的技術(shù)優(yōu)勢(shì)

V5標(biāo)簽（14個(gè)氨基酸，GKPIPNPLLGLDST）具有以下特點(diǎn)，使其成為蛋白檢測(cè)的優(yōu)選標(biāo)簽：

1. 分子量極小：約1.4 kDa，遠(yuǎn)小于GFP（27 kDa）或GST（26 kDa），對(duì)融合蛋白的天然結(jié)構(gòu)、互作及生物學(xué)功能干擾極小。

2. 高免疫原性：該序列在哺乳動(dòng)物蛋白質(zhì)組中罕見，抗V5抗體與非特異性蛋白的交叉反應(yīng)風(fēng)險(xiǎn)低。

3. 多位置兼容：可融合于目標(biāo)蛋白的N末端、C末端或內(nèi)部環(huán)區(qū)，通常不影響蛋白的折疊和活性。

4. 檢測(cè)靈敏度高：本抗體在WB中稀釋比可達(dá)1:30,000，ELISA中可達(dá)1:30,000，足以檢測(cè)低豐度表達(dá)的重組蛋白。