一、產(chǎn)品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的本品為兔源抗CtIP多克隆抗體（貨號：A300-488A），經(jīng)抗原親和純化制備，以未標記的完整IgG形式提供。該抗體特異性識別人類CtIP蛋白（CtBP相互作用蛋白，亦稱RBBP8），適用于免疫沉淀（IP）和蛋白質(zhì)印跡（WB）應(yīng)用，是研究DNA雙鏈斷裂修復(fù)、細胞周期調(diào)控及腫瘤抑制機制的核心工具。

二、核心產(chǎn)品參數(shù)

參數(shù)項目 | 具體規(guī)格

靶標蛋白 | CtIP（RBBP8）

反應(yīng)種屬 | 人

宿主來源 | 兔

克隆類型 | 多克隆

免疫原區(qū)域 | 第847位至C末端（897位）

抗體形式 | 完整IgG

純化方式 | 抗原親和純化

工作濃度 | 1000 ?g/ml（1 mg/ml）

保存條件 | 2 - 8°C，切勿冷凍

有效期 | 1年

緩沖體系 | Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液，pH 7–8，含0.09%疊氮化鈉

三、推薦應(yīng)用與實驗條件

應(yīng)用 | 推薦用量/稀釋度 | 關(guān)鍵條件

免疫沉淀（IP） | 6 ?g/mg裂解物 | 每毫克總蛋白使用6 ?g抗體

蛋白質(zhì)印跡（WB） | 1:2000 – 1:10,000 | 5%牛奶-TBST封閉，一抗過夜孵育

WB二抗選擇：

細胞裂解物WB：使用山羊抗兔IgG重鏈+輕鏈抗體（A120-101P）

IP產(chǎn)物WB：必須使用抗兔IgG輕鏈HRP抗體，并添加5%正常豬血清（S100-020），以避免重鏈信號干擾（CtIP分子量約125 kDa，與55 kDa重鏈無重疊，但仍建議遵循標準）

四、免疫原與純化工藝

本抗體免疫原對應(yīng)人CtIP蛋白第850位至C末端（897位）之間的區(qū)域（NP_002885.1）。表位位于C末端，該區(qū)域參與CtIP與BRCA1、MRE11-RAD50-NBS1（MRN）復(fù)合物的相互作用，對DNA末端切除和同源重組修復(fù)至關(guān)重要。

采用固相載體固定的CtIP特異性表位進行親和層析純化，確保抗體針對C末端區(qū)域具有高特異性。免疫球蛋白濃度采用比爾定律測定（1 mg/ml IgG在A280為1.4）。

五、CtIP靶標背景

CtIP（CTBP相互作用蛋白）最初鑒定為與CTBP（腺病毒E1A的C末端結(jié)合蛋白）相互作用的蛋白。后續(xù)研究發(fā)現(xiàn)其具有多重關(guān)鍵功能：

5.1 DNA損傷修復(fù)中的核心角色

CtIP是DNA雙鏈斷裂（DSB）同源重組修復(fù)（HR）的必需因子。它與MRN復(fù)合物（MRE11-RAD50-NBS1）協(xié)同啟動DNA末端切除，生成3′單鏈DNA，從而啟動HR修復(fù)。CtIP缺失導(dǎo)致HR缺陷，細胞對PARP抑制劑和DNA損傷化療藥物高度敏感。

5.2 腫瘤抑制功能

CtIP與兩種經(jīng)典腫瘤抑制因子直接相互作用：

pRb（視網(wǎng)膜母細胞瘤蛋白）：CtIP通過結(jié)合pRb參與細胞周期調(diào)控

BRCA1：CtIP-BRCA1相互作用是DNA損傷誘導(dǎo)的G2/M檢查點和HR修復(fù)的關(guān)鍵

CtIP本身也被認為是候選腫瘤抑制因子。其表達下調(diào)或功能缺失突變在多種癌癥（乳腺癌、卵巢癌、頭頸部鱗癌）中被發(fā)現(xiàn)，導(dǎo)致基因組不穩(wěn)定和化療耐藥。

六、使用注意事項

1. 高濃度優(yōu)勢：1000 ?g/ml濃縮型，IP實驗僅需少量（如2 mg裂解物加12 ?l抗體），降低批次差異影響。

2. C末端特異性：抗體識別C末端區(qū)域（847–897 aa），可檢測全長CtIP（約125 kDa）及部分C末端截短變體。如需檢測N末端切割產(chǎn)物，需選用其他表位抗體。

3. IP用量精確計算：嚴格按照6 ?g/mg裂解物，過度增加抗體可能導(dǎo)致非特異性沉淀。

4. 過夜孵育要求：WB一抗必須4°C過夜孵育。CtIP豐度較低（尤其在未處理細胞中），過夜孵育是獲得清晰信號的先決條件。

5. 陽性對照推薦：

WB：HeLa、U2OS、HEK293T細胞裂解物，預(yù)期在~125 kDa處檢測到條帶

誘導(dǎo)DNA損傷（如依托泊苷、電離輻射）可穩(wěn)定CtIP蛋白水平

*本說明書基于產(chǎn)品特性編寫，使用者應(yīng)結(jié)合具體實驗體系優(yōu)化驗證。