一、產(chǎn)品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的本品為兔源抗ASH2多克隆抗體（貨號(hào)：A300-107A），經(jīng)抗原親和純化制備，以未標(biāo)記的完整IgG形式提供。該抗體特異性識(shí)別人類ASH2蛋白（ASH2L，Set1樣組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物亞基），適用于免疫組織化學(xué)（IHC）、免疫沉淀（IP）和蛋白質(zhì)印跡（WB）應(yīng)用，是研究組蛋白H3K4甲基化、染色質(zhì)調(diào)控及表觀遺傳機(jī)制的重要工具。

二、核心產(chǎn)品參數(shù)

參數(shù)項(xiàng)目 | 具體規(guī)格

靶標(biāo)蛋白 | ASH2（ASH2L）

反應(yīng)種屬 | 人

宿主來(lái)源 | 兔

克隆類型 | 多克隆

抗體形式 | 完整IgG

免疫原區(qū)域 | 第75–125位氨基酸

抗體亞型 | IgG

標(biāo)記類型 | 未標(biāo)記

純化方式 | 抗原親和純化

抗原種屬 | 人

工作濃度 | 1000 ?g/ml（1 mg/ml）

保存溫度 | 2 - 8 °C

有效期 | 自收貨之日起1年

緩沖體系 | Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液，pH 7–8，含0.09%疊氮化鈉

三、推薦應(yīng)用與實(shí)驗(yàn)條件

3.1 應(yīng)用稀釋度匯總

應(yīng)用技術(shù) | 推薦用量/稀釋度 | 備注

免疫組織化學(xué)（IHC） | 1:1000 - 1:5000 | 福爾馬林固定石蠟包埋切片推薦使用檸檬酸緩沖液pH 6.0進(jìn)行抗原修復(fù)

免疫沉淀（IP） | 6 ?g / mg 裂解物 | 每毫克總蛋白使用6微克抗體

蛋白質(zhì)印跡（WB） | 1:2000 - 1:10,000

3.2 蛋白質(zhì)印跡（WB）專用實(shí)驗(yàn)條件

通用條件：

封閉液及抗體稀釋液：5% 牛奶-TBST

一抗孵育方式：過(guò)夜孵育（不可縮短）

細(xì)胞裂解物Western Blot：

推薦二抗：山羊抗兔IgG重鏈和輕鏈抗體（貨號(hào)A120-101P）

免疫沉淀產(chǎn)物的Western Blot：

推薦二抗：抗兔IgG輕鏈HRP標(biāo)記抗體

封閉液補(bǔ)充：需添加5%正常豬血清（貨號(hào)S100-020）

*重要提示：使用輕鏈特異性二抗可避免免疫沉淀實(shí)驗(yàn)中抗體重鏈（約55 kDa）的交叉檢測(cè)干擾。ASH2分子量約為68 kDa，與重鏈信號(hào)接近，因此強(qiáng)烈建議在IP-WB中使用輕鏈特異性二抗以避免信號(hào)干擾。

3.3 免疫組織化學(xué)（IHC）特別說(shuō)明

推薦使用檸檬酸緩沖液（pH 6.0）進(jìn)行熱誘導(dǎo)抗原修復(fù)

適用樣本類型：福爾馬林固定、石蠟包埋（FFPE）組織切片

稀釋范圍寬（1:1000–1:5000），建議從1:1000起始優(yōu)化

四、儲(chǔ)存與穩(wěn)定性

推薦儲(chǔ)存條件：2°C至8°C冷藏，切勿冷凍（冷凍會(huì)導(dǎo)致蛋白變性及抗體活性喪失）

有效期：自收貨之日起1年

緩沖液成分：Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液，pH 7–8，含0.09%疊氮化鈉作為防腐劑

pH范圍：7–8的寬泛pH范圍提供了良好的緩沖穩(wěn)定性

運(yùn)輸建議：冷藏運(yùn)輸，避免反復(fù)溫度波動(dòng)

五、主要生物學(xué)功能

1. H3K4甲基化：ASH2是復(fù)合物中穩(wěn)定催化亞基與WDR5/RBBP5相互作用的關(guān)鍵支架蛋白，直接調(diào)控H3K4甲基轉(zhuǎn)移酶活性。

2. 轉(zhuǎn)錄激活：H3K4me3富集于活躍轉(zhuǎn)錄基因的啟動(dòng)子區(qū)，ASH2參與的甲基化事件與基因表達(dá)激活密切相關(guān)。

3. 發(fā)育調(diào)控：ASH2在胚胎發(fā)育、造血分化、神經(jīng)發(fā)生等過(guò)程中發(fā)揮重要作用。

別名信息

ASH2；ash2 (absent, small, or homeotic)-like；ASH2L1；ASH2L2；ASH2-like protein；Bre2；set1/Ash2 histone methyltransferase complex subunit ASH2

六、使用注意事項(xiàng)

1. 疊氮化鈉警示：緩沖液含0.09%疊氮化鈉，操作時(shí)請(qǐng)佩戴手套和護(hù)目鏡，避免接觸皮膚或吸入氣溶膠。

2. 高濃度特性：本抗體濃度為1000 ?g/ml，IP實(shí)驗(yàn)時(shí)按6 ?g/mg裂解物用量吸取少量即可，建議使用低吸附吸頭。

3. IP用量計(jì)算：推薦用量為6 ?g抗體/mg總蛋白裂解物。示例：2 mg總蛋白加入12 ?g抗體（即12 ?l）。

4. 二抗選擇關(guān)鍵：

細(xì)胞裂解物WB：可使用重鏈+輕鏈二抗（A120-101P）

IP產(chǎn)物WB：ASH2分子量約68 kDa，與兔IgG重鏈（約55 kDa）非常接近，常規(guī)抗兔二抗會(huì)檢測(cè)到55 kDa的重鏈信號(hào)，嚴(yán)重干擾68 kDa處ASH2信號(hào)的判讀。必須使用抗兔IgG輕鏈HRP標(biāo)記抗體，并添加5%正常豬血清以徹底消除重鏈干擾。

5. IHC抗原修復(fù)要求：對(duì)于FFPE組織切片，務(wù)必進(jìn)行檸檬酸緩沖液（pH 6.0）熱誘導(dǎo)抗原修復(fù)。省略修復(fù)步驟可能導(dǎo)致信號(hào)完全丟失。

6. 過(guò)夜孵育要求：WB和IHC實(shí)驗(yàn)中一抗均需過(guò)夜孵育（4°C）。ASH2作為復(fù)合物亞基，過(guò)夜孵育有助于充分結(jié)合低豐度或交聯(lián)的表位。

7. 陽(yáng)性對(duì)照推薦：

WB：使用HeLa、HEK293T、K562細(xì)胞裂解物，預(yù)期在~68 kDa處檢測(cè)到特異性條帶

IHC：使用人睪丸組織或多種腫瘤組織切片，ASH2在增殖活躍的細(xì)胞核中呈陽(yáng)性

七、常見(jiàn)應(yīng)用方案建議

免疫沉淀（IP）標(biāo)準(zhǔn)流程

1. 制備細(xì)胞裂解物（使用非變性裂解緩沖液，如含150 mM NaCl的NP-40裂解液，添加蛋白酶抑制劑），測(cè)定總蛋白濃度

2. 取含1–2 mg總蛋白的裂解液，加入6 ?g抗體/mg蛋白

3. 4°C旋轉(zhuǎn)孵育2小時(shí)（或過(guò)夜）

4. 加入20–30 ?l Protein A/G瓊脂糖珠（50%漿液），4°C繼續(xù)孵育1–2小時(shí)

5. 用裂解緩沖液洗滌瓊脂糖珠3–5次

6. 加入2× SDS上樣緩沖液，95°C加熱5分鐘洗脫

7. 進(jìn)行Western Blot檢測(cè)時(shí)，必須使用輕鏈特異性二抗

*本說(shuō)明書(shū)基于產(chǎn)品特性研究編寫(xiě)，使用者應(yīng)結(jié)合具體實(shí)驗(yàn)體系進(jìn)行優(yōu)化驗(yàn)證。