一、產(chǎn)品概述

4EBP1（真核翻譯起始因子4E結(jié)合蛋白1）是mTORC1信號(hào)通路下游的關(guān)鍵翻譯抑制因子。由艾美捷代理Bethyl Laboratories推出的本產(chǎn)品（A300-501A）為針對(duì)人4EBP1蛋白的兔多克隆抗體，經(jīng)抗原親和純化，適用于免疫組織化學(xué)（IHC）和蛋白質(zhì)印跡（WB）檢測(cè)。抗體識(shí)別表位位于4EBP1第75位氨基酸至C末端（第118位殘基）之間，可特異性結(jié)合人源4EBP1蛋白。

二、關(guān)鍵特性

參數(shù) | 詳細(xì)信息

靶標(biāo) | 4EBP1

反應(yīng)性 | 人

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 完整IgG

免疫原 | 第68位至C末端區(qū)域

同型 | IgG

偶聯(lián)物 | 未偶聯(lián)

純度 | 抗原親和純化

抗原種屬 | 人

濃度 | 1000 ug/ml

保存條件 | 2 - 8 °C

有效期 | 收貨后1年

緩沖液 | Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液，pH 7-8，含0.09%疊氮化鈉

三、生物學(xué)背景

4EBP1（真核翻譯起始因子4E結(jié)合蛋白1，基因名EIF4EBP1，Gene ID 1978，Uniprot Q13541）直接結(jié)合eIF4E，抑制翻譯起始復(fù)合物的組裝，發(fā)揮翻譯抑制功能。在生長(zhǎng)因子刺激下，mTORC1復(fù)合物直接磷酸化4EBP1，導(dǎo)致其從eIF4E上解離，從而解除翻譯抑制，允許蛋白質(zhì)合成繼續(xù)進(jìn)行。4EBP1屬于翻譯抑制蛋白家族，在細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖和代謝調(diào)控中發(fā)揮重要作用。別稱包括：4E-BP1、BP-1、PHAS-I（胰島素調(diào)節(jié)的磷酸化熱酸穩(wěn)定蛋白）。

四、儲(chǔ)存與穩(wěn)定性

抗體以1000 ug/ml濃度提供于Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液（pH 7-8）中，含0.09%疊氮化鈉作為防腐劑。收到后應(yīng)在2-8°C條件下儲(chǔ)存，避免冷凍。在此條件下，自收貨之日起可穩(wěn)定保存1年。疊氮化鈉對(duì)某些細(xì)胞系具有毒性，如需用于活細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)通過(guò)透析或脫鹽柱去除。

應(yīng)用與推薦稀釋度

蛋白質(zhì)印跡（WB）

推薦稀釋范圍：1:1000 - 1:6000

封閉與抗體稀釋液：5%脫脂牛奶-TBST

一抗孵育：過(guò)夜孵育（推薦4°C）

二抗推薦：山羊抗兔IgG（重鏈+輕鏈）抗體（如A120-101P）

操作提示：建議根據(jù)樣本中4EBP1的表達(dá)豐度，在推薦范圍內(nèi)優(yōu)化稀釋倍數(shù)。對(duì)于高表達(dá)細(xì)胞系（如HeLa、HEK293），可使用較高稀釋度（如1:5000）；對(duì)于低表達(dá)樣本，可嘗試1:1000。

免疫組織化學(xué)（IHC）

推薦稀釋范圍：1:5000 - 1:20,000

抗原修復(fù)：推薦使用檸檬酸鹽緩沖液（pH 6.0）進(jìn)行熱誘導(dǎo)抗原修復(fù)（FFPE組織切片）

操作提示：對(duì)于福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）組織切片，抗原修復(fù)是獲得最佳染色信號(hào)的關(guān)鍵步驟。建議在正式實(shí)驗(yàn)前進(jìn)行稀釋度梯度預(yù)實(shí)驗(yàn)，以確定特定組織類型的最佳工作濃度。1:10,000為常見起始稀釋度。

五、生產(chǎn)與純化工藝

本抗體通過(guò)固定化固相載體上的4EBP1特異性表位進(jìn)行親和純化。具體而言，識(shí)別表位定位于人4EBP1蛋白第75-118位殘基區(qū)域（參考序列NP_004086.1）。免疫球蛋白濃度采用比爾定律測(cè)定，設(shè)定1 mg/ml IgG在280 nm處吸光度為1.4。

六、注意事項(xiàng)

1. 防腐劑：緩沖液中含有0.09%疊氮化鈉，該化合物毒性較低但需注意實(shí)驗(yàn)室安全規(guī)范。疊氮化鈉可能與二抗中的HRP反應(yīng)，在使用HRP檢測(cè)系統(tǒng)前需充分洗脫。

2. 應(yīng)用限制：產(chǎn)品僅限研究使用，不得用于診斷或治療程序。

3. 批次差異：不同批次的抗體濃度已標(biāo)準(zhǔn)化為1000 ug/ml，但建議收到新批次后驗(yàn)證最佳工作稀釋度。

本產(chǎn)品在優(yōu)化條件下可提供高特異性和靈敏度的4EBP1檢測(cè)結(jié)果，適用于研究mTORC1信號(hào)通路、翻譯調(diào)控以及相關(guān)疾病模型中的蛋白表達(dá)分析。