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一、產(chǎn)品概述
MLL1(混合譜系白血病蛋白1,又稱KMT2A)是一種組蛋白賴氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶,在胚胎發(fā)育和造血系統(tǒng)調(diào)控中發(fā)揮關(guān)鍵作用,其染色體易位與多種血液系統(tǒng)惡性腫瘤密切相關(guān)。由艾美捷代理Bethyl Laboratories推出的本產(chǎn)品(A300-086A)為針對(duì)人MLL1蛋白的兔多克隆抗體,經(jīng)抗原親和純化,適用于免疫沉淀(IP)和蛋白質(zhì)印跡(WB)檢測。抗體識(shí)別表位位于MLL1第720–780位氨基酸區(qū)域(對(duì)應(yīng)N端約300 kDa的蛋白水解片段),可特異性檢測人源MLL1蛋白,包括14P-18B亞型。
二、關(guān)鍵規(guī)格
參數(shù) | 詳細(xì)信息
靶標(biāo) | MLL1(KMT2A)
反應(yīng)性 | 人
宿主 | 兔
克隆性 | 多克隆
形式 | 完整IgG
免疫原 | 第725–775位氨基酸區(qū)域
同型 | IgG
偶聯(lián)物 | 未偶聯(lián)
純度 | 抗原親和純化
抗原種屬 | 人
濃度 | 1000 ug/ml
保存條件 | 2 – 8 °C
有效期 | 收貨后1年
緩沖液 | Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液,pH 7-8,含0.09%疊氮化鈉
三、生物學(xué)背景
MLL1(混合譜系白血病蛋白1,基因名KMT2A,Gene ID 4297,Uniprot Q03164)是一種賴氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶2A,參與多種染色體易位事件,這些易位與急性白血病等血液系統(tǒng)惡性腫瘤密切相關(guān)。MLL1作為轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子,在胚胎發(fā)育過程中對(duì)HOX基因的表達(dá)起關(guān)鍵調(diào)控作用。其蛋白結(jié)構(gòu)包含CXXC型鋅指結(jié)構(gòu)域和SET結(jié)構(gòu)域(甲基轉(zhuǎn)移酶活性區(qū))。本抗體識(shí)別的表位位于N端約300 kDa的蛋白水解片段上,適用于檢測全長MLL1及其N端裂解產(chǎn)物。
別稱:ALL-1、CXXC7、HRX、HTRX1、MLL、MLL1A、TRX1、WDSTS、鋅指蛋白HRX、trithorax樣蛋白等。
四、儲(chǔ)存與穩(wěn)定性
抗體以1000 ug/ml濃度提供于Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液(pH 7-8)中,含0.09%疊氮化鈉作為防腐劑。收到后請(qǐng)?jiān)?–8°C條件下儲(chǔ)存,避免冷凍。在此條件下,自收貨之日起可穩(wěn)定保存1年。
注意:疊氮化鈉對(duì)某些細(xì)胞系具有毒性,如需用于活細(xì)胞或體內(nèi)實(shí)驗(yàn),請(qǐng)通過透析或脫鹽柱去除。疊氮化鈉也可能抑制HRP活性,在使用HRP標(biāo)記二抗前應(yīng)確保充分洗滌。
五、應(yīng)用與推薦稀釋度
蛋白質(zhì)印跡(WB)
推薦稀釋范圍:1:2000 – 1:10,000
封閉與抗體稀釋液:5%脫脂牛奶-TBST
一抗孵育:過夜孵育(推薦4°C)
標(biāo)準(zhǔn)WB二抗:山羊抗兔IgG(重鏈+輕鏈)抗體(如A120-101P)
免疫沉淀后WB的特殊注意事項(xiàng):
當(dāng)檢測免疫沉淀復(fù)合物中的MLL1時(shí),由于常規(guī)二抗會(huì)識(shí)別兔IgG的重鏈(約55 kDa)和輕鏈(約25 kDa),可能掩蓋目標(biāo)蛋白(MLL1分子量較大,約500–600 kDa,但N端片段約300 kDa)附近或輕鏈位置的信號(hào)。為此,免疫沉淀物的WB檢測推薦使用抗兔IgG輕鏈HRP偶聯(lián)抗體,并在封閉緩沖液中添加5%正常豬血清(貨號(hào)S100-020)以降低背景。
免疫沉淀(IP)
推薦用量:6 ug抗體 / mg 細(xì)胞裂解液
操作提示:
對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)IP實(shí)驗(yàn)(如1 mg總蛋白裂解液),加入6 ul本抗體(因濃度1000 ug/ml,即1 ug/ul,故6 ul相當(dāng)于6 ug)。建議同時(shí)設(shè)置同型對(duì)照兔IgG作為陰性對(duì)照。IP產(chǎn)物可用上述輕鏈特異性二抗進(jìn)行WB檢測,以避免IgG重鏈干擾。
六、注意事項(xiàng)
1. 僅限研究使用:本產(chǎn)品僅用于生命科學(xué)研究,不得用于診斷、治療或人體相關(guān)應(yīng)用。
2. 安全防護(hù):緩沖液含疊氮化鈉,操作時(shí)請(qǐng)佩戴實(shí)驗(yàn)手套和護(hù)目鏡,避免接觸皮膚和黏膜。
3. 批次差異:不同批次抗體濃度已標(biāo)準(zhǔn)化為1000 ug/ml,但建議收到新批次后在特定應(yīng)用中進(jìn)行稀釋度驗(yàn)證。
本抗體為研究MLL1在造血分化、白血病發(fā)生及HOX基因調(diào)控中的功能提供了可靠工具。
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