一、產(chǎn)品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的本品為兔源抗LEDGF/p75多克隆抗體（貨號(hào)：A300-848A），經(jīng)抗原親和純化制備，以未標(biāo)記的完整IgG形式提供。該抗體特異性識(shí)別人類LEDGF/p75蛋白（轉(zhuǎn)錄共激活因子p75/p52），適用于免疫沉淀（IP）和蛋白質(zhì)印跡（WB）應(yīng)用，是研究轉(zhuǎn)錄調(diào)控、神經(jīng)發(fā)生及慢病毒整合機(jī)制的重要工具。

二、核心產(chǎn)品參數(shù)

參數(shù)項(xiàng)目 具體規(guī)格

靶標(biāo)蛋白 LEDGF/p75

反應(yīng)種屬 人

宿主來源 兔

克隆類型 多克隆

抗體形式 完整IgG

免疫原區(qū)域 介于480位氨基酸與C末端之間

抗體亞型 IgG

標(biāo)記類型 未標(biāo)記

純化方式 抗原親和純化

抗原種屬 人

工作濃度 200 ?g/ml

保存溫度 2 - 8 °C

有效期 自收貨之日起1年

緩沖體系 含0.1% BSA和0.09%疊氮化鈉的Tris緩沖鹽水

三、推薦應(yīng)用與實(shí)驗(yàn)條件

3.1 應(yīng)用稀釋度匯總

應(yīng)用技術(shù) 推薦用量/稀釋度 備注

免疫沉淀（IP） 6 ?g / mg 裂解物 每毫克總蛋白使用6微克抗體

蛋白質(zhì)印跡（WB） 1:2000 - 1:10,000

3.2 蛋白質(zhì)印跡（WB）專用實(shí)驗(yàn)條件

通用條件：

封閉液及抗體稀釋液：5% 牛奶-TBST

一抗孵育方式：過夜孵育

細(xì)胞裂解物Western Blot：

推薦二抗：山羊抗兔IgG重鏈和輕鏈抗體（貨號(hào)A120-101P）

免疫沉淀產(chǎn)物的Western Blot：

推薦二抗：抗兔IgG輕鏈HRP標(biāo)記抗體

封閉液補(bǔ)充：需添加5%正常豬血清（貨號(hào)S100-020）

*注：使用輕鏈特異性二抗可避免檢測(cè)免疫沉淀中抗體的重鏈信號(hào)干擾。*

四、免疫原與表位信息

4.1 免疫原區(qū)域

本抗體免疫原對(duì)應(yīng)人LEDGF/p75蛋白第480位至C末端之間的區(qū)域。依據(jù)NP_150091.2（GeneID 11168）的編號(hào)體系，該蛋白全長530個(gè)氨基酸，因此表位映射在480–530位氨基酸之間。

4.2 表位位置

抗體識(shí)別的特異性表位位于靠近C末端的功能區(qū)域。該區(qū)域?qū)τ谵D(zhuǎn)錄共激活活性及與整合酶等蛋白的相互作用具有重要生物學(xué)意義。

五、生產(chǎn)與純化工藝

5.1 親和純化

采用固定于固相載體上的LEDGF/p75特異性表位進(jìn)行親和層析純化，確保抗體針對(duì)目標(biāo)表位具有高特異性。

5.2 濃度測(cè)定

免疫球蛋白濃度采用比爾定律（Beer’s Law）測(cè)定，計(jì)算依據(jù)為：1 mg/ml IgG溶液在280 nm波長處的吸光度值為1.4。

六、儲(chǔ)存與穩(wěn)定性

推薦儲(chǔ)存條件：2°C至8°C冷藏，切勿冷凍

有效期：自收貨之日起1年

緩沖液成分：Tris緩沖鹽水，含0.1%牛血清白蛋白（BSA）和0.09%疊氮化鈉

運(yùn)輸建議：冷藏運(yùn)輸，避免反復(fù)溫度波動(dòng)

七、LEDGF/p75靶標(biāo)背景信息

7.1 功能概述

LEDGF/p75（Lens Epithelium Derived Growth Factor / Transcriptional Coactivator p75）是一種多功能的轉(zhuǎn)錄共激活因子，參與以下關(guān)鍵生物學(xué)過程：

1. 晶狀體上皮細(xì)胞基因調(diào)控：最早在晶狀體上皮細(xì)胞中被鑒定，參與晶狀體發(fā)育相關(guān)基因的表達(dá)調(diào)節(jié)

2. 神經(jīng)上皮干細(xì)胞分化：在神經(jīng)上皮干細(xì)胞分化過程中發(fā)揮重要作用

3. 神經(jīng)發(fā)生：參與神經(jīng)元的生成與發(fā)育過程

4. 慢病毒與HIV整合：作為輔助因子，促進(jìn)慢病毒和HIV病毒DNA整合入宿主細(xì)胞基因組

7.2 別名信息

CLL-associated antigen KW-7；dense fine speckles 70 kDa protein（DFS 70）；DFS70；LEDGF；lens epithelium-derived growth factor；p52；p75；PAIP；PC4 and SFRS1-interacting protein；PSIP2；transcriptional coactivator p52/p75；Transcriptional coactivator p75/p52

備注：該蛋白存在p75和p52兩種亞型，均由PSIP1基因編碼，本抗體可識(shí)別p75亞型。

八、使用注意事項(xiàng)

1. 疊氮化鈉警示：緩沖液含0.09%疊氮化鈉，操作時(shí)請(qǐng)佩戴適當(dāng)防護(hù)裝備

2. BSA說明：緩沖液中含0.1% BSA，可作為載體蛋白穩(wěn)定抗體

3. IP用量計(jì)算：推薦用量為6 ?g抗體/mg總蛋白裂解物，請(qǐng)根據(jù)樣本蛋白總量精確計(jì)算

4. 二抗選擇關(guān)鍵：

檢測(cè)細(xì)胞裂解物WB時(shí)，可使用識(shí)別重鏈和輕鏈的二抗

檢測(cè)IP產(chǎn)物WB時(shí)，強(qiáng)烈建議使用抗兔IgG輕鏈HRP標(biāo)記二抗，并添加5%正常豬血清以降低背景，避免IgG重鏈（約55 kDa）的干擾信號(hào)

5. 過夜孵育要求：WB實(shí)驗(yàn)中一抗需過夜孵育，請(qǐng)勿縮短孵育時(shí)間以確保檢測(cè)靈敏度

*本說明書基于產(chǎn)品特性研究編寫，使用者應(yīng)結(jié)合具體實(shí)驗(yàn)體系進(jìn)行優(yōu)化驗(yàn)證。