一、產(chǎn)品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的本品為兔源抗FBW7多克隆抗體（貨號：A301-720A），經(jīng)抗原親和純化制備，以未標(biāo)記的完整IgG形式提供。該抗體特異性識別人類FBW7蛋白（F-box/WD重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白7，亦稱FBXW7），適用于免疫沉淀（IP）和蛋白質(zhì)印跡（WB）應(yīng)用，是研究SCF E3泛素連接酶復(fù)合物介導(dǎo)的蛋白降解及腫瘤發(fā)生機制的關(guān)鍵工具。

二、核心產(chǎn)品參數(shù)

參數(shù)項目 | 具體規(guī)格

靶標(biāo)蛋白 | FBW7

反應(yīng)種屬 | 人

宿主來源 | 兔

克隆類型 | 多克隆

抗體形式 | 完整IgG

免疫原區(qū)域 | 第1–50位氨基酸

抗體亞型 | IgG

標(biāo)記類型 | 未標(biāo)記

純化方式 | 抗原親和純化

抗原種屬 | 人

工作濃度 | 1000 ?g/ml（1 mg/ml）

保存溫度 | 2 - 8 °C

有效期 | 自收貨之日起1年

緩沖體系 | Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液，pH 7–8，含0.09%疊氮化鈉

三、推薦應(yīng)用與實驗條件

3.1 應(yīng)用稀釋度匯總

應(yīng)用技術(shù) | 推薦用量/稀釋度 | 備注

免疫沉淀（IP） | 6 ?g / mg 裂解物 | 每毫克總蛋白使用6微克抗體

蛋白質(zhì)印跡（WB） | 1:5000 - 1:20,000 | 寬稀釋范圍，建議從1:5000起始優(yōu)化

3.2 蛋白質(zhì)印跡（WB）專用實驗條件

通用條件：

封閉液及抗體稀釋液：5% 牛奶-TBST

一抗孵育方式：過夜孵育（不可縮短）

細胞裂解物Western Blot：

推薦二抗：山羊抗兔IgG重鏈和輕鏈抗體（貨號A120-101P）

免疫沉淀產(chǎn)物的Western Blot：

推薦二抗：抗兔IgG輕鏈HRP標(biāo)記抗體

封閉液補充：需添加5%正常豬血清（貨號S100-020）

*重要提示：使用輕鏈特異性二抗可避免免疫沉淀實驗中抗體重鏈（約55 kDa）的交叉檢測干擾，確保目標(biāo)蛋白信號的準(zhǔn)確解讀。*

四、免疫原與表位信息

4.1 免疫原區(qū)域

本抗體免疫原對應(yīng)人FBW7蛋白第1至50位氨基酸之間的區(qū)域。依據(jù)NP_361014.1（GeneID 55294）的編號體系，該表位位于蛋白N端區(qū)域。

4.2 表位位置

抗體識別的特異性表位位于N端前50個氨基酸內(nèi)。該區(qū)域包含F(xiàn)-box結(jié)構(gòu)域的關(guān)鍵部分——F-box是介導(dǎo)與SKP1相互作用的核心基序，對于SCF復(fù)合物的組裝至關(guān)重要。

五、生產(chǎn)與純化工藝

5.1 親和純化

采用固定于固相載體上的FBW7特異性表位進行親和層析純化，確保抗體針對目標(biāo)N端區(qū)域具有高特異性和親和力。

5.2 濃度測定

免疫球蛋白濃度采用比爾定律（Beer’s Law）測定，計算依據(jù)為：1 mg/ml IgG溶液在280 nm波長處的吸光度值為1.4。本產(chǎn)品濃度為1000 ?g/ml（1 mg/ml），屬于高濃度抗體，適合需要高靈敏度的IP實驗。

六、儲存與穩(wěn)定性

推薦儲存條件：2°C至8°C冷藏，切勿冷凍（冷凍會導(dǎo)致蛋白變性及抗體活性喪失）

有效期：自收貨之日起1年

緩沖液成分：Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液，pH 7–8，含0.09%疊氮化鈉作為防腐劑

pH范圍：7–8的寬泛pH范圍提供了良好的緩沖穩(wěn)定性

運輸建議：冷藏運輸，避免反復(fù)溫度波動

七、使用注意事項

1. 疊氮化鈉警示：緩沖液含0.09%疊氮化鈉，該化合物具毒性，操作時請佩戴手套和護目鏡，避免接觸皮膚或吸入氣溶膠。

2. 高濃度特性：本抗體濃度為1000 ?g/ml（1 mg/ml），屬于高濃度制劑。進行IP實驗時按6 ?g/mg裂解物用量吸取少量即可，建議使用低吸附吸頭以提高移液準(zhǔn)確性。

3. IP用量計算：推薦用量為6 ?g抗體/mg總蛋白裂解物。示例：若細胞裂解物總蛋白為2 mg，則需加入12 ?g抗體（即12 ?l，因濃度為1 ?g/?l）。

4. 二抗選擇關(guān)鍵：

檢測細胞裂解物WB時，可使用識別重鏈和輕鏈的二抗（如A120-101P）

檢測IP產(chǎn)物WB時，必須使用抗兔IgG輕鏈HRP標(biāo)記抗體，并添加5%正常豬血清以降低非特異性背景。若使用常規(guī)抗兔IgG（識別重鏈），在50–55 kDa處會出現(xiàn)強烈的重鏈信號，可能完全掩蓋在該分子量附近的目標(biāo)蛋白條帶。

5. 過夜孵育要求：WB實驗中一抗需過夜孵育（建議4°C緩慢搖動），請勿縮短至室溫1–2小時，否則可能顯著降低檢測靈敏度。

6. pH兼容性：本抗體儲存于pH 7–8的緩沖液中，與大多數(shù)WB和IP實驗的生理pH條件兼容，無需額外透析或緩沖液置換。

*本說明書基于產(chǎn)品特性研究編寫，使用者應(yīng)結(jié)合具體實驗體系進行優(yōu)化驗證。*