一、產(chǎn)品概述

由艾美捷代理Bethyl Laboratories推出抗PBRM1（BAF180）多克隆抗體（貨號：A301-591A）為兔源抗人/小鼠PBRM1（polybromo 1，又稱BAF180）蛋白C端區(qū)域（第1639–1689位氨基酸之間）的特異性多克隆抗體。PBRM1是哺乳動物SWI/SNF染色質(zhì)重塑復合物中PBAF亞型的核心亞基，含有六個溴結(jié)構(gòu)域（bromodomains），能夠識別組蛋白乙酰化信號，在轉(zhuǎn)錄調(diào)控、DNA損傷應答及細胞周期檢查點控制中發(fā)揮關(guān)鍵作用。該蛋白已被證實是一種腫瘤抑制因子，其突變在腎癌等多種腫瘤中高頻出現(xiàn)。本抗體經(jīng)抗原親和純化，適用于流式細胞術(shù)（Flow Cyt）、免疫組化（IHC）、免疫沉淀（IP）及免疫印跡（WB）等多種應用，是研究染色質(zhì)重塑與腫瘤發(fā)生機制的有力工具。

二、詳細規(guī)格

參數(shù) | 規(guī)格

靶標 | PBRM1（polybromo 1）

反應種屬 | 小鼠、人

應用 | Flow Cyt, IHC, IP, WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 全IgG

免疫原 | 人PBRM1第1639位至C端之間的區(qū)域（具體表位位于1639-1689位氨基酸）

抗體類型 | IgG

偶聯(lián)物 | 未偶聯(lián)

純度 | 抗原親和純化

抗原種屬 | 人

濃度 | 1000 ug/ml（1 mg/ml）

儲存溫度 | 2 - 8 °C

有效期 | 自收貨之日起1年

緩沖液 | Tris-檸檬酸-磷酸緩沖液，pH 7-8，含0.09% 疊氮鈉

三、產(chǎn)品制備

本抗體采用固相載體固定的PBRM1特異性表位進行親和純化。免疫原對應人PBRM1（GenBank登錄號AAP34197.1，GeneID 55193）第1639至1689位氨基酸之間的區(qū)域，該區(qū)域靠近蛋白C端，序列在哺乳動物中高度保守。抗體經(jīng)親和層析后，免疫球蛋白濃度通過比爾定律測定（1 mg/ml IgG在280 nm處吸光度為1.4）。

四、推薦應用與實驗條件

所有Western blot實驗建議使用5%脫脂牛奶-TBST作為封閉液和抗體稀釋液，一抗孵育條件為4°C過夜。以下為各應用的推薦起始條件：

應用 | 推薦用量/稀釋度 | 備注

Western Blot (WB) | 1:2000 – 1:10000 | 檢測細胞裂解液時，二抗推薦山羊抗兔IgG（H+L）（貨號A120-101P）；檢測免疫沉淀物時，二抗建議使用抗兔IgG輕鏈HRP偶聯(lián)抗體，并在封閉液中加入5%正常豬血清（貨號S100-020）以消除重鏈干擾。

Immunoprecipitation (IP) | 6 ug/mg 裂解物 | 每毫克總蛋白使用6 ug抗體（即1 mg裂解物加6 ul原液）。推薦與Protein A/G磁珠或瓊脂糖珠孵育2–4小時或過夜。

Immunohistochemistry (IHC) | 1:1000 – 1:5000 | 對福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）組織切片，推薦使用pH 6.0枸櫞酸鹽緩沖液進行熱誘導抗原修復。建議同時進行不含一抗的陰性對照。

Flow Cytometry (Flow Cyt) | 1 ul / 1×10? 細胞 | 細胞先用4%甲醛固定，再用90%甲醇透化。每1×10?細胞加入1 ul抗體（即1:1000稀釋，假設反應體積100 ul）。建議使用熒光標記二抗（如FITC或Alexa Fluor 488）。

五、背景信息

PBRM1是SWI/SNF-B（PBAF）復合物的專屬亞基（區(qū)別于含BRD7的BAF復合物）。該復合物利用ATP水解產(chǎn)生的能量滑動或驅(qū)逐核小體，促進轉(zhuǎn)錄因子與DNA結(jié)合，調(diào)控基因表達。PBRM1的已知功能包括：

1. 轉(zhuǎn)錄共激活/抑制：參與干擾素應答、核激素受體信號通路等。

2. DNA損傷應答：在DNA損傷后，PBRM1促進p21（CDKN1A）的轉(zhuǎn)錄，誘導細胞周期停滯，防止損傷基因組復制。

3. 腫瘤抑制：PBRM1基因在透明細胞腎細胞癌（ccRCC） 中的突變頻率僅次于VHL，約30-40%的ccRCC存在PBRM1失活突變。此外，在膽管癌、乳腺癌等中也發(fā)現(xiàn)其突變或表達下調(diào)。

六、儲存與穩(wěn)定性

儲存條件：2 - 8°C，嚴禁冷凍。冷凍會導致蛋白聚集和活性喪失。

有效期：自收貨之日起1年，在2-8°C未稀釋條件下保存。

運輸條件：冰袋冷藏運輸，收貨后請立即存放于2-8°C。

防腐劑：緩沖液含0.09%疊氮鈉，可抑制細菌生長。如需進行活細胞實驗或無疊氮操作，請通過透析或脫鹽柱去除疊氮鈉。

七、典型實驗結(jié)果預期

Western Blot：在HEK293全細胞裂解液中，1:5000稀釋抗體可檢測到一條約180–200 kDa的條帶；在PBRM1敲除細胞中該條帶消失。

Immunoprecipitation：使用6 ug抗體/mg裂解物可從HeLa細胞核提取物中捕獲PBRM1及其結(jié)合蛋白（如BRG1、ARID2等PBAF組分）。

IHC：人腎透明細胞癌組織中PBRM1染色缺失（陰性），而癌旁正常腎小管上皮細胞核強陽性。

Flow Cytometry：固定透化后的Jurkat細胞經(jīng)1 ul/106細胞染色，流式直方圖顯示明顯的熒光峰右移。

僅限科研使用：不得用于臨床診斷、治療或人體實驗。