一、產(chǎn)品概述

由艾美捷代理Bethyl Laboratories推出的兔源抗小鼠Ki-67（Mki67）蛋白多克隆抗體（貨號：IHC-00375），經(jīng)抗原親和純化，專門優(yōu)化用于免疫組織化學(xué)（IHC）檢測。Ki-67是被廣泛接受的細胞增殖標志物，在細胞周期的G1、S、G2及M期表達，而在靜止期（G0）細胞中完全缺失。該蛋白定位于細胞核，其表達水平與多種腫瘤的增殖指數(shù)、分級及預(yù)后密切相關(guān)。本抗體識別小鼠Ki-67蛋白C端區(qū)域的特異性表位，適用于福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）組織切片及冰凍切片的增殖細胞檢測，是臨床前研究及腫瘤模型評估的可靠工具。

二、詳細規(guī)格

參數(shù) | 規(guī)格

靶標 | Ki-67

反應(yīng)種屬 | 小鼠

應(yīng)用 | IHC（免疫組織化學(xué)）

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 全IgG

免疫原 | 小鼠Ki-67蛋白第1875–1925位氨基酸之間的區(qū)域（參考序列CAA58026.1）

抗體類型 | IgG

偶聯(lián)物 | 未偶聯(lián)

純度 | 抗原親和純化

抗原種屬 | 小鼠

濃度 | 250 ug/ml

儲存溫度 | 2 - 8 °C

有效期 | 自收貨之日起1年

緩沖液 | Tris緩沖鹽水，含0.1% BSA及0.09% 疊氮鈉

注：根據(jù)抗體制備記錄，該抗體識別的表位精確對應(yīng)于小鼠Ki-67蛋白第1650–1700位氨基酸（GeneID 17345，蛋白編號CAA58026.1）。不同數(shù)據(jù)庫注釋可能存在異構(gòu)體差異，但本抗體經(jīng)驗證可特異性檢測全長Ki-67。

三、產(chǎn)品制備與質(zhì)量控制

本抗體采用固相載體固定的小鼠Ki-67特異性表位進行親和純化。免疫原為重組蛋白或合成肽段，對應(yīng)小鼠Ki-67蛋白C端附近區(qū)域。免疫球蛋白濃度通過比爾定律測定（1 mg/ml IgG在280 nm處吸光度為1.4）。

每批次質(zhì)控標準：

IHC（FFPE）：對小鼠脾臟、胸腺、小腸或腫瘤組織切片進行染色，應(yīng)在生發(fā)中心、隱窩基底及腫瘤增殖區(qū)呈現(xiàn)清晰的核陽性信號，而靜息淋巴細胞或上皮細胞陰性。

特異性驗證：使用Ki-67敲除組織或抗體預(yù)吸附實驗確認信號特異性。

批次間一致性：通過對照組織切片的染色強度及陽性率進行比對。

四、推薦應(yīng)用與實驗條件

本抗體經(jīng)優(yōu)化主要用于免疫組織化學(xué)檢測。以下為推薦的起始條件：

應(yīng)用 | 推薦稀釋度 | 備注

IHC（福爾馬林固定石蠟包埋切片） | 1:100 – 1:500 | 必須進行抗原修復(fù)。推薦使用Tris-EDTA緩沖液（pH 9.0）進行熱誘導(dǎo)抗原修復(fù)，可顯著增強染色信號。也可試用枸櫞酸鹽緩沖液（pH 6.0），但效果可能略遜。

IHC（冰凍切片） | 1:100 – 1:500 | 切片固定后（如4%甲醛或丙酮）可直接染色；抗原修復(fù)通常非必需，但可嘗試溫和修復(fù)。

注意 | - | 在某些樣本或?qū)嶒烍w系中，抗體可進一步稀釋至1:1000以上，建議使用者進行梯度滴定優(yōu)化。

五、背景信息

Ki-67是一種高分子量核蛋白（小鼠Ki-67分子量約320–360 kDa，由于高度重復(fù)序列及磷酸化，電泳遷移率異常），其表達嚴格與細胞周期偶聯(lián)：

細胞周期依賴性表達：在G0期完全缺失；G1早期開始出現(xiàn)，S期和G2期逐漸累積，M期達到峰值；有絲分裂結(jié)束后迅速降解。因此，Ki-67陽性率直接反映細胞群體的增殖分數(shù)。

亞細胞定位動態(tài)變化：在間期定位于核仁及核基質(zhì)；在M期，與染色體表面結(jié)合，參與維持染色體外周結(jié)構(gòu)。

分子功能：雖然具體生化活性尚未完全闡明，但研究表明Ki-67參與：

核仁結(jié)構(gòu)的組織與維持；

異染色質(zhì)與常染色質(zhì)邊界的劃定；

有絲分裂期間核膜重建的調(diào)控；

核糖體RNA合成（與核仁纖維中心相關(guān)）。

研究及診斷價值：

Ki-67是組織病理學(xué)中最經(jīng)典的增殖標志物，具有以下應(yīng)用：

腫瘤分級與預(yù)后判斷：在乳腺癌、淋巴瘤、膠質(zhì)瘤、肺癌等多種人類腫瘤中，Ki-67增殖指數(shù)（陽性細胞百分比）與腫瘤惡性程度、轉(zhuǎn)移風(fēng)險及患者生存期呈顯著相關(guān)。本抗體雖針對小鼠，但廣泛用于人源腫瘤異種移植模型（PDX、CDX） 中評估人腫瘤細胞增殖活性。

藥物療效評估：在腫瘤學(xué)臨床前研究中，通過比較治療組與對照組的Ki-67陽性率，可快速評價抗增殖藥物的效應(yīng)。

正常組織增殖區(qū)定位：用于識別小腸隱窩、皮膚基底層、生發(fā)中心、胚胎組織等增殖活躍區(qū)域。

六、儲存與穩(wěn)定性

儲存條件：2 - 8°C，切勿冷凍。冷凍會導(dǎo)致抗體聚集及非特異性背景升高。

有效期：自收貨之日起1年，在未稀釋、2-8°C避光保存條件下可維持完整效價。

運輸條件：冰袋冷藏運輸，收貨后請立即存放于2-8°C。

防腐劑：緩沖液含0.09%疊氮鈉，可抑制微生物生長。注意：疊氮鈉會抑制HRP活性，若用于非HRP檢測系統(tǒng)（如熒光）則無影響；若需去除，可通過透析或脫鹽柱處理。

七、注意事項

1. 僅限科研使用：不得用于臨床診斷或治療。本抗體針對小鼠抗原，不保證對人Ki-67的交叉反應(yīng)，若需檢測人樣本，請選擇人反應(yīng)性產(chǎn)品。

2. 抗原修復(fù)至關(guān)重要：對于FFPE切片，必須進行熱誘導(dǎo)抗原修復(fù)，否則染色信號極弱或完全陰性。推薦優(yōu)先嘗試Tris-EDTA pH 9.0緩沖液。

3. 安全操作：疊氮鈉有毒，操作時請佩戴手套。廢液請按有害物處理。

4. 對照設(shè)置：每次IHC實驗必須設(shè)置陰性對照（以同濃度兔IgG或抗體稀釋液替代一抗）及陽性對照（已知高增殖小鼠組織，如小腸或脾臟生發(fā)中心）。

5. 稀釋優(yōu)化：不同固定時間、組織類型及檢測系統(tǒng)可能導(dǎo)致最佳稀釋度差異，建議進行預(yù)實驗梯度滴定（1:100, 1:200, 1:500）。