一、產(chǎn)品概述

IgA是一種以二聚體形式存在并通過(guò)J鏈連接的免疫球蛋白，主要分布于機(jī)體的黏膜表面，包括腸道、呼吸系統(tǒng)、眼睛以及初乳中。根據(jù)存在形式，IgA可分為分泌型IgA（存在于黏膜區(qū)域）和血清型IgA（存在于血清中）。在免疫學(xué)檢測(cè)中，特異性識(shí)別IgA重鏈的標(biāo)記抗體是研究黏膜免疫、抗體應(yīng)答及IgA相關(guān)疾病的關(guān)鍵工具。

本文介紹的艾美捷代理Bethyl Laboratories推出的產(chǎn)品為HRP（辣根過(guò)氧化物酶）標(biāo)記的山羊抗小鼠IgA重鏈多克隆抗體（貨號(hào)：A90-103P），經(jīng)親和純化及固相吸附處理以確保類特異性。該抗體適用于酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）、免疫細(xì)胞化學(xué)（ICC）、免疫組化（IHC）及免疫印跡（WB）等多種檢測(cè)平臺(tái)。

二、核心規(guī)格參數(shù)

參數(shù) | 詳細(xì)信息

靶標(biāo) | 小鼠IgA重鏈

反應(yīng)性 | 小鼠

應(yīng)用 | ELISA, ICC, IHC, WB

宿主 | 山羊

克隆性 | 多克隆

形式 | 全I(xiàn)gG

同型 | IgG

標(biāo)記 | HRP（辣根過(guò)氧化物酶）

純度 | 抗原親和純化

抗原物種 | 小鼠

濃度 | 1 mg/ml

儲(chǔ)存條件 | 2 - 8 °C

保質(zhì)期 | 收貨后1年

緩沖液 | 磷酸鹽緩沖液（PBS），含0.2% BSA及0.05% Pro-Clean 400

三、免疫原與特異性

生產(chǎn)與純化工藝

本抗體通過(guò)以下步驟制備：首先使用小鼠IgA免疫山羊，收集抗血清。為確保類特異性，抗血清經(jīng)過(guò)固相吸附處理，去除與其他免疫球蛋白（IgM、IgG亞類、IgE）交叉反應(yīng)的抗體。隨后，通過(guò)親和層析法進(jìn)行純化：將小鼠IgA抗原偶聯(lián)至瓊脂糖珠，從抗血清中特異性捕獲識(shí)別IgA重鏈的抗體。純化后的抗體與辣根過(guò)氧化物酶（HRP）進(jìn)行化學(xué)交聯(lián)偶聯(lián)，酶/抗體蛋白的摩爾比為4:1。

特異性驗(yàn)證

經(jīng)免疫電泳和ELISA驗(yàn)證，本抗體特異性識(shí)別小鼠IgA重鏈。與以下小鼠免疫球蛋白及亞類的交叉反應(yīng)率小于1%：

小鼠IgM

小鼠IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG2c、IgG3

小鼠IgE

這一高特異性確保了在復(fù)雜樣本（如血清、培養(yǎng)上清、組織裂解液）中能夠準(zhǔn)確檢測(cè)IgA，避免因非特異性結(jié)合導(dǎo)致的假陽(yáng)性或背景過(guò)高。

四、重要注意事項(xiàng)

某些雜交瘤細(xì)胞克隆可能表達(dá)異常的免疫球蛋白相關(guān)肽段，這些肽段可能被本抗體錯(cuò)誤識(shí)別。在檢測(cè)雜交瘤培養(yǎng)上清中的IgA時(shí)，建議同時(shí)設(shè)置適當(dāng)?shù)年幮詫?duì)照（如親本骨髓瘤細(xì)胞上清）以排除假陽(yáng)性。

五、HRP標(biāo)記與濃度測(cè)定

標(biāo)記特征

本抗體為HRP直接偶聯(lián)物，無(wú)需再使用二抗孵育步驟，簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)流程，減少了非特異性背景。HRP具有高催化活性，可與多種底物（如TMB、DAB、ECL）反應(yīng)產(chǎn)生可檢測(cè)信號(hào)，適用于比色、化學(xué)發(fā)光等多種檢測(cè)模式。

濃度測(cè)定

標(biāo)記前的免疫球蛋白濃度采用比爾定律測(cè)定。標(biāo)準(zhǔn)條件下，1 mg/mL IgG在280 nm波長(zhǎng)處的吸光度（A280）為1.4。本抗體濃度為1 mg/ml（即1000 ?g/ml）。HRP偶聯(lián)后，抗體濃度仍以IgG質(zhì)量計(jì)為1 mg/ml。

酶/抗體比例

本產(chǎn)品中HRP與抗體的摩爾比為4:1。這一比例在保證高信號(hào)強(qiáng)度的同時(shí)，避免了過(guò)度標(biāo)記導(dǎo)致的抗體親和力下降，實(shí)現(xiàn)了靈敏度與特異性的平衡。

六、應(yīng)用與實(shí)驗(yàn)條件

重要提示

并非所有列出的應(yīng)用均已在本實(shí)驗(yàn)室經(jīng)過(guò)具體測(cè)試。用戶需根據(jù)自身實(shí)驗(yàn)體系進(jìn)行優(yōu)化和驗(yàn)證。以下推薦條件基于產(chǎn)品說(shuō)明及行業(yè)通用經(jīng)驗(yàn)。

推薦稀釋比例

應(yīng)用 | 推薦稀釋比例 | 說(shuō)明

ELISA | 1:10,000 - 1:100,000 | 作為檢測(cè)抗體，建議從1:20,000開(kāi)始優(yōu)化

免疫細(xì)胞化學(xué)（ICC） | 1:200 - 1:2,000 | 用于細(xì)胞爬片或培養(yǎng)細(xì)胞的IgA染色

免疫組化（IHC） | 1:200 - 1:2,000 | 適用于冷凍切片或FFPE組織切片

免疫印跡（WB） | 1:2,000 - 1:20,000 | 檢測(cè)還原或非還原條件下的IgA重鏈

七、產(chǎn)品使用與儲(chǔ)存

儲(chǔ)存注意事項(xiàng)

抗體應(yīng)儲(chǔ)存于2 - 8°C，請(qǐng)勿冷凍。反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致HRP活性喪失及抗體聚集。本抗體以液體形式提供，緩沖液為PBS，含0.2% BSA作為穩(wěn)定蛋白，以及0.05% Pro-Clean 400作為防腐劑（替代疊氮化鈉，因疊氮化物會(huì)抑制HRP活性）。

穩(wěn)定性與保質(zhì)期

自收貨之日起，在推薦的儲(chǔ)存條件下保質(zhì)期為1年。避免光照和高溫。建議分裝為單次使用量（如10 ?l/管）儲(chǔ)存于2-8°C，避免反復(fù)開(kāi)蓋引入污染。

HRP標(biāo)記抗體的特殊注意事項(xiàng)

避免疊氮化物：HRP酶活性受疊氮化鈉抑制。實(shí)驗(yàn)體系中不得使用含疊氮化鈉的緩沖液。本抗體已使用Pro-Clean 400替代疊氮化鈉，用戶自備的洗滌液、封閉液等亦需注意。

避光保存：HRP偶聯(lián)物對(duì)光敏感，應(yīng)避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于強(qiáng)光下。

顯色底物：使用新鮮配制的底物溶液，確保顯色反應(yīng)的一致性和靈敏度。