兔抗hSET1抗體親和純化，助力H3K4甲基化分析

一、產品概述

hSET1（人Set1同源蛋白）是Set1樣組蛋白甲基轉移酶（HMT）復合物的核心亞基。該復合物負責催化組蛋白H3第4位賴氨酸（H3K4）的單甲基化、二甲基化和三甲基化修飾，是表觀遺傳調控中激活基因轉錄的關鍵標記。Set類蛋白的名稱來源于果蠅蛋白中鑒定出的SET結構域（約130-140個氨基酸）。hSET1與Ash2L、RBBP5、WDR5、hDPY-30、hSwd2、CXXC1及HCF1等多種蛋白共同組裝形成Set1樣復合物，在胚胎發育、細胞分化及疾病發生中發揮重要作用。

本文介紹的艾美捷代理Bethyl Laboratories推出的兔抗hSET1抗體親和純化（貨號A300-289A）由美國生產，經抗原親和純化，適用于小鼠及人源樣本的免疫組化（IHC）、免疫沉淀（IP）和免疫印跡（WB）檢測。

二、核心規格參數

參數 | 詳細信息

靶標 | hSET1（SETD1A，組蛋白賴氨酸N-甲基轉移酶SETD1A）

反應性 | 小鼠，人

應用 | IHC, IP, WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 全IgG

免疫原 | 人hSET1蛋白第1200–1250位氨基酸區間

同型 | IgG

標記 | 非偶聯

純度 | 抗原親和純化

抗原物種 | 人

濃度 | 1000 u

g/ml（1 mg/ml）

儲存條件 | 2 - 8 °C

保質期 | 收貨后1年

緩沖液 | Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液，pH 7-8，含0.09%疊氮化鈉

三、免疫原與識別表位

本抗體采用表位特異性親和純化工藝制備。將針對hSET1蛋白的特異性表位固定在固相支持物上，從抗血清中親和捕獲并純化特異性抗體。

A300-289A所識別的表位位于人hSET1蛋白第1200位至第1250位氨基酸之間。編號依據TrEMBL數據庫條目O15047（GeneID 9739）。該區域位于hSET1蛋白的C末端部分，靠近SET結構域但不與其重疊，保證了抗體的特異性識別能力。

四、濃度測定方法

免疫球蛋白濃度采用比爾定律測定。標準條件下，1 mg/mL IgG在280 nm波長處的吸光度（A280）為1.4。本抗體濃度為1000 ?g/ml（即1 mg/ml），可直接按體積量取使用。

五、應用與實驗條件

通用說明

所有免疫印跡實驗均采用5%脫脂牛奶-TBST作為封閉液及抗體稀釋液。一抗孵育條件為過夜孵育（推薦4°C）。

推薦稀釋比例與用量

應用 | 推薦稀釋比例/用量 | 特殊說明

免疫組化（IHC） | 1:1000 - 1:5000 | 推薦使用pH 6.0枸櫞酸鹽緩沖液進行抗原修復（FFPE組織切片）

免疫沉淀（IP） | 6 ug/mg 裂解物 | 每mg細胞裂解蛋白使用6 ug抗體

免疫印跡（WB） | 1:10,000 - 1:25,000 | 超高靈敏度，建議從1:10,000開始優化

六、二抗選擇說明

細胞裂解物免疫印跡：

使用山羊抗兔IgG重鏈和輕鏈抗體（貨號A120-101P）。該二抗可同時識別兔IgG的重鏈和輕鏈，適用于檢測總IgG信號。

免疫沉淀產物的免疫印跡：

使用抗兔IgG輕鏈HRP偶聯抗體，并在封閉緩沖液中添加5%正常豬血清（貨號S100-020）。免疫沉淀后樣本經變性處理會釋放抗體的重鏈（約55 kDa）和輕鏈（約25 kDa）。采用輕鏈特異性二抗可有效降低背景干擾，提高目標蛋白（hSET1分子量約185 kDa）的檢測靈敏度。添加正常豬血清可進一步封閉非特異性結合。

七、產品使用與儲存

儲存注意事項

抗體應儲存于2 - 8°C，請勿冷凍。反復凍融會導致抗體聚集和活性下降。緩沖液中含有0.09%疊氮化鈉作為防腐劑。

穩定性與保質期

自收貨之日起，在推薦的儲存條件下保質期為1年。建議分裝為單次使用量儲存于2-8°C，避免反復開蓋引入污染。

八、質量控制

每批次產品均經過抗原親和純化驗證，確保抗體特異性。生產過程中使用固定于固相支持物上的hSET1特異性表位（第1200-1250位氨基酸）進行純化。建議用戶在使用新批次時進行稀釋梯度驗證（尤其是WB和IHC），以確定最佳工作濃度。鑒于WB推薦稀釋比高達1:25,000，該抗體具有極高的靈敏度，建議初次使用時從1:10,000開始進行梯度實驗。

別名：

組蛋白賴氨酸N-甲基轉移酶SETD1A、hSET1A、KMT2F、賴氨酸N-甲基轉移酶2F、SET結構域包含蛋白1A、Set1、set1/Ash2組蛋白甲基轉移酶復合物亞基SET1、Set1A