ReadiLink?xtra快速抗體標(biāo)記試劑盒基本上只需要2個(gè)簡(jiǎn)單的混合步驟，不需要柱純化。ReadiLink?試劑盒中使用的預(yù)激活iFluor?350非常穩(wěn)定，與抗體具有良好的反應(yīng)性和選擇性。該試劑盒具有標(biāo)記約2x50 ug抗體的所有基本成分。試劑盒中提供的兩瓶預(yù)活化iFluor?350染料中的每一瓶都針對(duì)標(biāo)記約50?g抗體進(jìn)行了優(yōu)化。ReadiLink?xtra iFluor?350快速抗體標(biāo)記試劑盒提供了一種方便而穩(wěn)健的方法，可以用亮藍(lán)色熒光iFluro?350熒光團(tuán)標(biāo)記單克隆和多克隆抗體。AAT Bioquest的iFluor?染料經(jīng)過優(yōu)化，可用于標(biāo)記蛋白質(zhì)，特別是抗體。這些染料明亮、耐光，對(duì)蛋白質(zhì)的淬滅作用最小。它們可以被熒光儀器的主要激光線（例如350、405、488、555和633nm）很好地激發(fā)。

艾美捷ReadiLink xtra快速iFluor 350抗體標(biāo)記試劑盒(與BSA兼容)：

貨號(hào)：AAT-1950

單位尺寸：2次標(biāo)記

修正因子（260納米）：0.83

修正因子（280納米）：0.23

消光系數(shù)（厘米^-1 摩爾^-1）：200001

激發(fā)（納米）：345

發(fā)射（納米）：450

量子產(chǎn)率：0.95

預(yù)期用途 僅限研究使用（RUO）

組分：

組分A：預(yù)活化的iFluor? 350 2瓶

組分B：反應(yīng)緩沖液 1瓶（20微升）

組分C：TQ?-染色的猝滅緩沖液 1瓶（20微升）

樣品實(shí)驗(yàn)協(xié)議：

運(yùn)行偶聯(lián)反應(yīng)

將蛋白質(zhì)工作溶液（溶液A）加入標(biāo)記染料的一個(gè)瓶中（組分A），并通過反復(fù)吹打幾次或短時(shí)間渦旋瓶來充分混合。

注意：如果標(biāo)記100微克蛋白質(zhì)，使用兩瓶（組分A）標(biāo)記染料，將100微克蛋白質(zhì)分成2 x 50微克蛋白質(zhì)，并分別與一瓶標(biāo)記染料反應(yīng)。然后在下一步中合并兩個(gè)瓶。

將偶聯(lián)反應(yīng)混合物在室溫下保持30-60分鐘。

注意：如果需要，偶聯(lián)反應(yīng)混合物可以旋轉(zhuǎn)或搖晃更長(zhǎng)時(shí)間。

停止偶聯(lián)反應(yīng)：

加入5微升（對(duì)于50微克蛋白質(zhì)）或10微升（對(duì)于100微克蛋白質(zhì)），即總反應(yīng)體積的10%的TQ?-染色的猝滅緩沖液（組分C）到偶聯(lián)反應(yīng)混合物中；充分混合。

在室溫下孵育10分鐘。標(biāo)記的蛋白質(zhì)（抗體）現(xiàn)在可以使用。

蛋白質(zhì)偶聯(lián)物的儲(chǔ)存：

蛋白質(zhì)偶聯(lián)物應(yīng)在載體蛋白存在下（例如，0.1%牛血清白蛋白）以> 0.5毫克/毫升的濃度儲(chǔ)存。對(duì)于更長(zhǎng)時(shí)間的儲(chǔ)存，蛋白質(zhì)偶聯(lián)物可以凍干或分成單次使用的小份，并儲(chǔ)存在≤ -20°C。

工作溶液的準(zhǔn)備：

蛋白質(zhì)工作溶液（溶液A）

對(duì)于標(biāo)記50微克蛋白質(zhì)（假設(shè)目標(biāo)蛋白質(zhì)濃度為1毫克/毫升），將5微升（總反應(yīng)體積的10%）的反應(yīng)緩沖液（組分B）與50微升的目標(biāo)蛋白質(zhì)溶液混合。

注意：如果您有不同的蛋白質(zhì)濃度，請(qǐng)相應(yīng)調(diào)整蛋白質(zhì)體積，以使標(biāo)記反應(yīng)中有大約50微克的蛋白質(zhì)可用。

注意：對(duì)于標(biāo)記100微克蛋白質(zhì)（假設(shè)目標(biāo)蛋白質(zhì)濃度為1毫克/毫升），將10微升（總反應(yīng)體積的10%）的反應(yīng)緩沖液（組分B）與100微升的目標(biāo)蛋白質(zhì)溶液混合。

注意：蛋白質(zhì)應(yīng)溶解在1X磷酸鹽緩沖液（PBS）中，pH 7.2 - 7.4；如果蛋白質(zhì)溶解在甘氨酸緩沖液中，必須對(duì)其進(jìn)行透析，以對(duì)抗1X PBS，pH 7.2 - 7.4，或者使用Amicon Ultra-0.5，Ultracel-10膜，10 kDa（產(chǎn)品編號(hào)UFC501008來自Millipore）以去除廣泛用于蛋白質(zhì)沉淀的游離胺或銨鹽（如硫酸銨和醋酸銨）。

注意：含有0.1至0.5%牛血清白蛋白（BSA）的不純抗體或穩(wěn)定化的抗體將被很好地標(biāo)記。

注意：為了獲得最佳的標(biāo)記效率，建議最終蛋白質(zhì)濃度范圍為1-2毫克/毫升，低于1毫克/毫升的濃度會(huì)顯著降低偶聯(lián)效率。

圖：HeLa細(xì)胞微管蛋白的免疫熒光染色。HeLa細(xì)胞用4%PFA固定，用0.1%Triton X-100滲透并封閉。然后用兔抗微管蛋白單克隆抗體孵育細(xì)胞，并用ReadiLink?xtra Rapid iFluor?350抗體標(biāo)記試劑盒（目錄號(hào)1950）標(biāo)記的山羊抗兔IgG染色。

Wheat Germ Agglutinin, AF488 Labeled小麥胚芽凝集素，AF488標(biāo)記文獻(xiàn)參考：

Identification of a Small Probe That Can Be Conjugated to Proteins by Proximity Labeling.

Authors: Sun, Weiping and Huo, Yinbo and Mei, Yuxuan and Zhou, Qingtong and Zhao, Suwen and Zhuang, Min

Journal: ACS chemical biology (2020): 39-43

Paper-based nuclease protection assay with on-chip sample pretreatment for point-of-need nucleic acid detection.

Authors: Noviana, Eka and Jain, Sidhartha and Hofstetter, Josephine and Geiss, Brian J and Dandy, David S and Henry, Charles S

Journal: Analytical and bioanalytical chemistry (2020): 3051-3061

Site-Specific Fluorescent Labeling of Antibodies and Diabodies Using SpyTag/SpyCatcher System for In Vivo Optical Imaging.

Authors: Alam, Md Kausar and El-Sayed, Ayman and Barreto, Kris and Bernhard, Wendy and Fonge, Humphrey and Geyer, C Ronald

Journal: Molecular imaging and biology (2019): 54-66

A neuraminidase potency assay for quantitative assessment of neuraminidase in influenza vaccines.

Authors: Byrne-Nash, Rose T and Gillis, Jacob H and Miller, David F and Bueter, Katie M and Kuck, Laura R and Rowlen, Kathy L

Journal: NPJ vaccines (2019): 3

Author Correction: A dynamic three-step mechanism drives the HIV-1 pre-fusion reaction.

Authors: Iliopoulou, Maro and Nolan, Rory and Alvarez, Luis and Watanabe, Yasunori and Coomer, Charles A and Jakobsdottir, G Maria and Bowden, Thomas A and Padilla-Parra, Sergi

Journal: Nature structural & molecular biology (2019): 526