當(dāng)暴露于激發(fā)光時(shí)，染料的熒光強(qiáng)度會(huì)因其光氧化或其他光反應(yīng)而降低。很少有熒光染料能完全抵抗光漂白。通常，當(dāng)一個(gè)部分在強(qiáng)激發(fā)光下反復(fù)掃描時(shí)，染料可能會(huì)在視覺評估或攝影完成之前失去明顯的熒光信號。例如，熒光素（如FITC標(biāo)記的抗體）的光漂白已成為熒光顯微鏡的一個(gè)主要問題。在嚴(yán)重的情況下（如藻膽蛋白標(biāo)記的生物偶聯(lián)物），由于極高的光漂白率，甚至無法拍攝高分辨率的熒光圖像。Fluoroquest?防褪色試劑盒旨在降低染料的光漂白速率，為研究人員提供更長的觀察時(shí)間。該套件包含所有可以輕松應(yīng)用于成像實(shí)驗(yàn)的基本組件。它們都是預(yù)先混合好的即用型溶液。此套件專為微孔板格式設(shè)計(jì)，而#20001專為載玻片格式設(shè)計(jì)。

艾美捷FluoroQuest抗淬滅試劑盒II,適合微孔板成像：

貨號：AAT-20003

單位大小：1 套件

H-短語：H303, H313, H333

危險(xiǎn)符號：XN

預(yù)期用途：僅限研究使用（RUO）

R-短語：R20, R21, R22

激發(fā)：變化

發(fā)射：變化

推薦板：黑色壁，透明底

組分：

組分 A：抗褪色試劑   1 瓶

組分 B：測定緩沖液（4 °C）   1 瓶（10 mL）

協(xié)議概要：

準(zhǔn)備樣品（微孔板孔）

從板中移除液體

每個(gè)孔加入100 ?L/孔的抗褪色溶液

在顯微鏡下檢查樣本

庫存溶液的準(zhǔn)備：

除非另有說明，所有未使用的庫存溶液應(yīng)在制備后分成單次使用的小份，并儲(chǔ)存在 -20 °C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。

1. 抗褪色庫存溶液：

將整個(gè)瓶的測定緩沖液（組分 B）加入到抗褪色試劑（組分 A）的瓶中。注意：當(dāng)溶液變棕色時(shí)仍然可以使用，但當(dāng)溶液變黑時(shí)請丟棄。

樣品實(shí)驗(yàn)協(xié)議：

從您的96孔板中移除多余的液體。

在每個(gè)選定的孔中加入100 ?L的抗褪色溶液。

樣品可以在應(yīng)用抗褪色溶液后立即成像。圖1顯示了一個(gè)典型的圖像。

為了使樣品的壽命最優(yōu)化，請將板儲(chǔ)存在4°C的暗處。

圖：U2OS細(xì)胞裝載1?M鈣黃綠素AM 1小時(shí)，在96孔Costar黑板上用2%甲醛固定30分鐘。去除所有培養(yǎng)基后，向樣品中加入抗褪色試劑（100?L/孔）。使用奧林巴斯熒光顯微鏡在0和30秒曝光時(shí)間比較FITC信號。所有圖像都使用了相同的曝光設(shè)置。

FluoroQuest抗淬滅試劑盒II,適合微孔板成像文獻(xiàn)參考：

On the mechanism of Trolox as antiblinking and antibleaching reagent

Authors: Cordes T, Vogelsang J, Tinnefeld P.

Journal: J Am Chem Soc (2009): 5018

Relationship between DAPI-fluorescence fading and nuclear DNA content: An alternative method to DNA quantification

Authors: Gallardo-Escarate C, Alvarez-Borrego J, Von Br and E, Dupre E, Del Rio-Portilla MA.

Journal: Biol Res (2007): 29

Strategies to improve photostabilities in ultrasensitive fluorescence spectroscopy

Authors: Widengren J, Chmyrov A, Eggeling C, Lofdahl PA, Seidel CA.

Journal: J Phys Chem A (2007): 429

The reliability of long-term storage of direct immunofluorescent staining slides at room temperature

Authors: Dikicioglu E, Meteoglu I, Okyay P, Culhaci N, Kacar F.

Journal: J Cutan Pathol (2003): 430

Comparative genomic hybridization technique

Authors: El-Rifai WE, Knuutila S.

Journal: Methods Mol Med (2001): 25