iFluor 555-麥胚凝集素(WGA)結合物：精準的細胞標記和成像解決方案

小麥胚芽凝集素（WGA）是一種凝集素，能夠與N-乙酰-D-葡萄糖胺和唾液酸結合。它是研究最深入且在生物學應用中最有用的凝集素之一。由于WGA能夠與糖綴合物結合，其衍生物和結合物被廣泛用于標記細胞膜和纖維化瘢痕組織，以進行熒光成像和分析。WGA的糖結合特異性針對的是β-1,4-GlcNAc連接殘基序列，即殼聚糖。每個單體包含兩個相同且不相互作用的結合位點，這些位點與3或4個β-1,4-GlcNAc單元互補。在所檢測的單糖中，只有GlcNAc能夠與WGA結合。ManNAc不結合，而GalNAc結合力很弱。它展現出iFluor? 555染料的明亮紅色熒光。iFluor?555 WGA結合物與唾液酸和N-乙酰葡糖胺殘基的結合方式與AF555 WGA結合物相同。

艾美捷iFluor 555-麥胚凝集素(WGA)結合物：

貨號：AAT-25539

單位大小：1 毫克

溶劑：水

校正因子（260 納米）：0.23

校正因子（280 納米）：0.14

消光系數（cm -1 M -1）：100000

激發（納米）：557

發射（納米）：570

量子產率：0.64

H-短語：H303, H313, H333

危險符號：XN

預期用途：僅限研究使用（RUO）

R-短語：R20, R21, R22

儲存：冷凍（< -15 °C）；盡量減少光照暴露

激發：Cy3, TRITC 濾光片組

發射：Cy3, TRITC 濾光片組

推薦板：黑色壁，透明底

儲備溶液的制備：

除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應分為一次性等分，并在制備后儲存在-20°C下。避免反復凍融循環

iFluor?555小麥胚芽凝集素（WGA）結合物儲備溶液（200X）

將500?L的ddH2O加入粉末中，制成2mg/mL的儲備溶液。

注：復溶的結合物溶液可以在2-8°C下短期儲存，也可以在-20°C下長期儲存。

iFluor 555-小麥胚芽凝集素（WGA）結合物庫存溶液（200X）

向粉末中加入500 ?L的去離子水，制成2 mg/mL的庫存溶液。

注意：重組后的結合物溶液可以儲存在2-8 °C進行短期儲存，或在 -20 °C進行長期儲存。

工作溶液的準備：

iFluor? 555-小麥胚芽凝集素（WGA）結合物工作溶液（1X）

向1 mL HHBS緩沖液中加入5 ?L的200X WGA結合物溶液。

注意：不同細胞系的最佳染色濃度可能不同。推薦的起始濃度為活細胞5-10 ?g/mL。

樣品實驗協議：

在打開前將瓶加熱至室溫并短暫離心。染色協議因應用而異。應通過實驗確定結合物的適當稀釋度。

活細胞染色：

用HHBS緩沖液洗滌細胞兩次。

加入100 ?L iFluor? 555-WGA工作溶液。

在37 °C下用WGA工作溶液孵育細胞10-30分鐘。

用HHBS緩沖液洗滌細胞兩次。

使用Cy3/TRITC濾光片組在熒光顯微鏡下成像細胞。

固定細胞染色：

WGA結合物也可用于染色固定細胞。

用4%的甲醛在PBS中固定細胞。

注意：對于固定細胞膜染色，建議跳過通透化步驟進行染色。固定后的通透化步驟可以幫助染色細胞內室，如高爾基體和內質網（ER）結構。

加入100 ?L iFluor? 555-WGA工作溶液。

在室溫下用WGA工作溶液孵育細胞10-30分鐘。

用HHBS緩沖液洗滌細胞兩次。

使用Cy3/TRITC濾光片組在熒光顯微鏡下成像細胞。

圖：活HeLa細胞用5?g/mL的iFluor?555小麥胚凝集素（WGA）偶聯物染色30分鐘，然后用Hoechst 33342（AAT Cat#17535）染色。使用Cy3/TRITC和DAPI濾光片組通過熒光顯微鏡獲取圖像。

iFluor 555-麥胚凝集素(WGA)結合物文獻參考：

Wheat germ agglutinin is involved in the protective action of 24-epibrassinolide on the roots of wheat seedlings under drought conditions.

Authors: Avalbaev, Azamat and Bezrukova, Marina and Allagulova, Chulpan and Lubyanova, Alsu and Kudoyarova, Guzel and Fedorova, Kristina and Maslennikova, Dilara and Yuldashev, Ruslan and Shakirova, Farida

Journal: Plant physiology and biochemistry : PPB (2020): 420-427

Membrane-associated gamma-glutamyl transferase and alkaline phosphatase in the context of concanavalin A- and wheat germ agglutinin-reactive glycans mark seminal prostasome populations from normozoospermic and oligozoospermic men.

Authors: Jankovi?, Tamara and Go?, Sanja and Miti?, Ninoslav and Danilovi? Lukovi?, Jelena and Jankovi?, Miroslava

Journal: Upsala journal of medical sciences (2020): 10-18

Succinylated Wheat Germ Agglutinin Colocalizes with the Toxoplasma gondii Cyst Wall Glycoprotein CST1.

Authors: Guevara, Rebekah B and Fox, Barbara A and Bzik, David J

Journal: mSphere (2020)

Wheat germ agglutinin is a biomarker of whole grain content in wheat flour and pasta.

Authors: Killilea, David W and McQueen, Rebecca and Abegania, Judi R

Journal: Journal of food science (2020): 808-815

Wheat germ agglutinin liposomes with surface grafted cyclodextrins as bioadhesive dual-drug delivery nanocarriers to treat oral cells.

Authors: Wijetunge, Sashini S and Wen, Jianchuan and Yeh, Chih-Ko and Sun, Yuyu

Journal: Colloids and surfaces. B, Biointerfaces (2020): 110572