細胞培養用HyStem透明質酸3D水凝膠套裝使用說明

HyStem 硫醇修飾透明質酸 12.5 mL 套件基于交聯巰基修飾透明質酸技術。透明質酸是自然存在于結締組織、上皮組織和神經組織細胞外基質中的成分。通過HyStem?，研究人員可以創建可定制的3D水凝膠，用于培養在其天然環境中富含透明質酸的細胞。

艾美捷細胞培養用HyStem透明質酸3D水凝膠套裝（ABM-GS1004F）包括：

- Glycosil?（巰基修飾透明質酸）

- Extralink?-Lite（PEGDA，聚乙二醇雙丙烯酸酯）

- 重組緩沖液（PBS）Hystem?套裝組分混合后形成透明水凝膠。

細胞附著HyStem?水凝膠系統提供具有可變剛度的粘彈性基質，支持干細胞的擴增（迄今已對人類胚胎干細胞、CD34+細胞和肝細胞祖細胞進行了測試）。HyStem?水凝膠不支持表面細胞附著。細胞必須被封裝在水凝膠中。細胞外基質（ECM）蛋白或肽可以在交聯前與Glycosil混合，以提供附著信號并允許細胞附著在水凝膠表面。然而，添加的ECM蛋白類型取決于細胞類型和所需結果（擴增而無分化或伴有分化）。

存儲說明：

Glycosil：在-20°C條件下儲存，可保存一年。重組后的溶液必須在同一天使用，不能重新冷凍。

Extralink-Lite：在-20°C條件下儲存，可保存一年。重組后的溶液可在-20°C條件下保存一個月。

重組緩沖液：在4°C或室溫條件下儲存，可保存一年。

HyStem透明質酸3D水凝膠套裝使用說明：

Glycosil和Extralink-Lite溶液通過用重組緩沖液溶解凍干固體來制備。重組后，Glycosil和Extralink-Lite將在pH約為7.4的1X磷酸緩沖鹽溶液（PBS）中。按照說明重組后，套裝將能夠產生2.5、7.5或12.5毫升的材料以形成3D水凝膠。

1）讓套裝組分回到室溫，靜置1小時。

2）使用注射器和針頭，用重組緩沖液重組套裝組分。如果在重組過程中取下瓶塞，請盡量減少暴露在氧氣中，以避免潛在的自交聯。請按照下面的重組圖表操作。

3) 在加入重組緩沖液后，立即對每個瓶進行幾秒鐘的渦旋。將瓶水平放在搖床或搖床上。每隔15分鐘快速渦旋樣品。有些組分可能需要超過2小時才能完全溶解。加熱至37°C并輕輕渦旋將加速溶解。組分將變清晰并略帶黏稠。

4) 當以1:4體積比向Glycosil中加入Extralink-Lite時，將形成3D水凝膠。1. - 對于2.5毫升和7.5毫升套裝：0.25毫升Extralink-Lite對應1.0毫升Glycosil，用于2.5毫升和7.5毫升套裝- 對于12.5毫升套裝：2.5毫升Extralink-Lite對應10.0毫升Glycosil2. 用移液管混合。3. 如果要封裝細胞，在加入Extralink-Lite之前將細胞沉淀重懸于Glycosil溶液中。來回移液管混合。4. 將所有組分混合后，等待5分鐘，然后再次用移液管混合以確保細胞均勻分布。

5) 將HyStem分裝到所需的孔板中。凝膠化將在約15分鐘內開始，并在約90分鐘內完全凝膠化。