小鼠ANA（抗核抗體）總Ig ELISA試劑盒是一種適用于定量或滴定總抗體的免疫測定可提取核抗原特異性活性（IgG、IgA和IgM）（ENA）在血清或血漿中。其他生物液體，包括組織培養(yǎng)基）可以被驗證使用。

小鼠抗核抗原（ANA/ENA）IG（總（A+G+M））ELISA試劑盒檢測原理：

鼠抗核抗體（ANA）總Ig ELISA試劑盒基于樣品中小鼠ANA IgG、IgA和IgM與固定在微孔板上的可提取核抗原（ENA）的結(jié)合，總ANA抗體通過與辣根過氧化物酶（HRP）酶偶聯(lián)的特異性抗小鼠IgG+IgA+IgM（H+L）抗體來檢測。經(jīng)過洗滌步驟后，加入顯色底物（TMB），并通過HRP在底物上的酶促反應(yīng)產(chǎn)生顏色，該顏色與樣品中存在的ANA Ig的量成正比。加入終止液以終止反應(yīng)，然后使用ELISA微孔板讀數(shù)器測量450nm處的吸光度。樣品中總小鼠抗體的活性是相對于小鼠ANA校準(zhǔn)物計算的。

艾美捷小鼠抗核抗原（ANA/ENA）IG（總（A+G+M））ELISA試劑盒：

貨號：ADI-5210

特異性：用于涂層微孔板的ENA是各種可提取抗原（DNA、SSA/Ro、SSB/La、Scl70、Sm、RNP和Jo-1）的混合物；小鼠ANA檢測可能檢測到針對這些抗原的抗體。

ADI提供單獨的ELISA試劑盒，用于檢測針對這些個別自身抗原的特異性抗體。抗小鼠IgG+IgA+IgM (H+L) HRP偶聯(lián)物與結(jié)合到板上ENA的小鼠IgG、IgA和IgM類抗體反應(yīng)。IgE抗體不會在背景信號之上被測量。

檢測靈敏度：ENA涂層水平、HRP偶聯(lián)物濃度和低非特異性結(jié)合樣本稀釋液被優(yōu)化，以區(qū)分小鼠血清樣本稀釋1:100后ANA Ig與背景（非抗體）信號。

試劑盒內(nèi)容：如果未開封，微孔板和其他所有試劑在2-8攝氏度下穩(wěn)定，直至盒標(biāo)簽上打印的有效期。工作溶液的穩(wěn)定性在試劑準(zhǔn)備部分指明。

檢測設(shè)計和設(shè)置：

低非特異性結(jié)合（NSB）樣本稀釋液TBTm比1xSD20T稀釋液更能降低NSB，而不會減少真正的陽性抗體信號，從而提供了更大的陽性和非免疫樣本之間的鑒別能力。

樣本收集和處理：

培養(yǎng)基、血清和其他生物液體在適當(dāng)稀釋以避免溶液基質(zhì)干擾的情況下可以使用作為樣本。對于血清，通過靜脈采血，允許凝血，并通過室溫離心分離血清。對于其他樣本，包括組織培養(yǎng)基，在用樣本稀釋液稀釋之前，通過離心和/或過濾澄清樣本。

抗體穩(wěn)定性：

建議將血清初步稀釋到工作樣本稀釋液（WSD）中以穩(wěn)定抗體活性。這增強了可重復(fù)的采樣，并在冷藏或冷凍儲存時，穩(wěn)定抗體活性數(shù)年。進(jìn)一步稀釋到提供最低檢測背景的低NSB樣本稀釋液（LNSD）中，應(yīng)該是初始稀釋的至少10倍，并且應(yīng)該在檢測當(dāng)天進(jìn)行。

示例：初始（1/5）：10μl血清 + 40μl WSD [或0.1ml + 0.4ml]

進(jìn)一步（1/50）：10μl初始（1/5）+ 90μl LNSD（1/50）

檢測設(shè)計：

在進(jìn)行之前，回顧結(jié)果計算（第5-7頁）和檢測的限制（上文）：

1、選擇適當(dāng)?shù)臉颖鞠♂尅？紤]陽性的預(yù)期效力，最小化非特異性結(jié)合（NSB）和其他基質(zhì)效應(yīng)；例如，非免疫樣本應(yīng)給出凈信號<0.5 OD。這通常是小鼠血清的1/100或更高稀釋，對于正常IgG和IgM水平。在工作樣本稀釋液（1xSD20T）或低NSB樣本稀釋液（TBTm）中稀釋樣本（見上文）。注意：所有樣本必須在同一稀釋液中稀釋以進(jìn)行適當(dāng)比較——要么使用TBTm，要么使用1xSD20T。

2、運行樣本稀釋液空白。這個信號是檢測性能的指標(biāo)，特別是洗滌效果，并且用于凈OD計算，如果需要的話。空白OD應(yīng)<0.3。見方法A和B。

3、運行一組校準(zhǔn)物。校準(zhǔn)物驗證檢測是否按照規(guī)格執(zhí)行，并且可以用來標(biāo)準(zhǔn)化檢測間變異以增強精度。從校準(zhǔn)物曲線上讀取值，方法C，有限制。見上文檢測限制。

4、為預(yù)期的高陽性運行一系列樣本稀釋，允許計算抗體滴度（當(dāng)特定滴度至少比非免疫高4倍以上時）。見方法D。

5、如果用于定量，樣本應(yīng)雙重運行；非免疫樣本如果明顯低于免疫樣本，可以單次運行。用于定量的校準(zhǔn)物，例如，用于檢測間標(biāo)準(zhǔn)化，應(yīng)雙重運行。當(dāng)從稀釋曲線確定滴度時，如果用于滴度計算的稀釋點超過兩個，可以單次運行。